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1、医院消毒灭菌及环境卫生学监测技术,1,医院消毒灭菌效果监测,卫生部医院感染管理规范医院必须对消毒、灭菌效果定期进行监测；灭菌合格率必须达到100%；不合格的物品不得进入临床使用部门。,2,医院消毒灭菌效果监测,医院消毒灭菌效果监测的目的：是预防医院内感染的重要措施之一。对消毒效果的监测是评价：其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段。是无菌技术操作及隔离技术的基础。因此消毒灭菌效果监测是保证医院消毒灭菌质量的重要措施。,3,医院消毒灭菌效果监测,消毒灭菌效果监测遵循原则：监测人员必须经过专业培训，掌握一定的消毒知识，熟悉消毒设备和药剂性能，具有熟练
2、的检验技能；选择合理的采样时间（消毒后、使用前）；遵循严格的无菌操作。,4,医院消毒灭菌效果监测的内容,热力灭菌效果监测：压力蒸汽紫外线消毒效果监测；使用中消毒剂的监测；软式内镜消毒效果监测采样；医院环境卫生学监测采样：空气、物体表面、工作人员手,5,一、压力蒸汽灭菌效果监测,压力蒸汽灭菌器的分类：根据排放空气的方式和程度不同可分为：下排气式压力蒸汽灭菌器预真空、脉动真空压力蒸汽灭菌器,6,一、压力蒸汽灭菌效果监测,压力蒸汽灭菌效果监测方法包括：A、物理监测 B、化学监测 C、生物监测,7,一、压力蒸汽灭菌效果监测,A、物理监测（程序监测）按照经过试验所确定的灭菌工艺和有关参数进行检查，以判断
3、灭菌是否按照规定的条件进行,8,一、压力蒸汽灭菌效果监测,物理监测的主要项目：(必须每锅进行)物品的包装体积、重量：下排气式：30cm30cm25cm预真空：30cm30cm50cm金属包的重量不超过7kg；敷料包不超过5kg快速蒸汽：一般无包装,9,一、压力蒸汽灭菌效果监测,物理监测的主要项目：排气情况：灭菌温度:灭菌时间 压 力 每次灭菌应做详细记录，包括：每锅锅号、压力、温度、时间、灭菌 物品、灭菌操作者签名,10,一、压力蒸汽灭菌效果监测,压力蒸汽灭菌所需压力、温度、灭菌时间,11,一、压力蒸汽灭菌效果监测,物理监测的主要项目：物品的装放：大包上层、小包下层 织物上层、金属下层 物品竖
4、放不能贴靠柜壁下排气：装量不超过柜室内容量80%,12,一、压力蒸汽灭菌效果监测,物理监测的主要项目：物品的装放：预真空：装载量不得柜室容积的90%；装载量不得柜室容积的10%。脉动真空：装载量不得柜室容积的5%。（以防止“小装量效应”，残留空气影响灭菌效果）,13,一、压力蒸汽灭菌效果监测,B、化学监测包括：包内指示卡(121、132）包外指示胶带要求：指示胶带每包外必贴；指示卡每包包内必放。,14,包内：化学指示卡,结果判断：打开灭菌包，指示剂由米色变成黑色，表示达到灭菌条件,15,灭菌包的外包装,16,17,注意事项：,包外化学指示胶带，根据变色情况，只能代表物品是否已经灭菌，仅仅起到一
5、个鉴别作用，不能代表灭菌是否彻底。包内化学指示卡，可以准确反映灭菌的时间、温度和饱和蒸汽的综合变化，用以鉴定每一个包裹内部的情况，指示剂与对照色块颜色相符，表示灭菌彻底。,18,压力蒸汽灭菌效果监测,B、化学监测B-D试验（空锅试验），需每日一次对于预真空、脉动真空压力蒸汽灭菌器应 每日空锅做B-D试验。目的：检测灭菌器内空气排除效果,19,B-D试验,B-D试验包的准备：由100%脱脂纯棉布折叠成长30*25*25（cm）大小的布包裹，测试包的质量为4kg或用一次性B-D试验包。操作方法：将专门的B-D试验纸，放入自制测试包或专用的一次性B-D试验包的中间，将B-D试验包水平放于灭菌柜内灭菌
6、车的前底层，靠近柜门与排气口的前方，柜内除测试包外物任何物品，134,3.5-4分钟后，取出B-D试验纸观察颜色变化。B-D试验结果判定：包内试纸均匀一致变色，说明B-D试验通过冷空气排除效果良好，灭菌器可以使用，反之，变色不均则说明灭菌器有冷空气残留，B-D试验失败，可重复一次B-D试验。直至通过B-D试验后该灭菌器方可使用。,20,压力蒸汽灭菌效果监测,C、生物监测1）压力蒸汽灭菌器：采用“自含式生物指示剂”每周进行一次（指示菌株采用耐热的嗜热脂肪杆菌芽孢）2）灭菌器新安装、移位、大修后的灭菌器应进行物理监测、化学监测和生物监测，物理监测、化学监测通过后，生物监测应空载连续监测三次，合格后
7、灭菌器方可使用，对于小型压力蒸汽灭菌器，生物监测应满载连续监测三次，合格后灭菌器方可使用。预真空压力蒸汽灭菌器应进行B-D试验并重复3次，连续监测合格后，方可使用。,21,标准测试包：下排气压力蒸汽灭菌器测试标准包备有平纹长袖手术衣3件，小手术巾4块，中手术巾2块，大毛巾1块，10*10cm8层纱布敷料30块，包裹成25*30*30cm大小；预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌标准测试包备有16条全棉手术巾，每条41*66cm，将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，包裹成23*23*15cm大小。测试方法：将至少一个自含式生物指示剂放于一标准测试包中心部位。预真空和脉动真空及下排式压力蒸
8、汽灭菌器的测试包均置于灭菌柜内排气口上方。小型压力蒸汽灭菌器测试包侧放于灭菌器最难灭菌部位。经过一个灭菌周期后，将灭菌试验样品送至实验室。取出生物指示菌片，将安培折断或挤破，让管内培养基和菌片融为一体，与1支对照管一起置于56培养器内，48小时后观察培养基变化。,22,二、紫外线消毒效果监测,紫外线消毒的监测，必须进行：A、日常监测 B、化学监测 C、生物监测,23,二、紫外线消毒效果监测,日常监测：使用时记录：新灯管启用日期、灯管使用照射时间、累计照射时间、擦管时间、化学及生物监测结果记录,24,二、紫外线消毒效果监测,化学监测及方法要求：6个月一次；主要监测使用 中灯管的照射强度。新灯管要
9、 进行抽样监测。,25,紫外线强度照射指示卡测定法,图1 物品准备：标尺、紫外线强度照射指示卡图2 放好标尺，开启紫外线灯图3 开启紫外线灯5分钟后，将指示卡置于紫外线灯下垂直距离1m处，有图案面朝上图4 照射1min后，关掉紫外线灯，观察指示卡色块的颜色，进行结果判定。将指示卡色块的颜色与“灯管强度90 w/cm2”、“灯管强度70 w/cm2”标准色块进行比较，判定测定结果。,26,二、紫外线消毒效果监测,C、生物监测：空气消毒效果的监测：空气培养表面消毒效果的监测：物体表面采样,27,使用紫外线消毒灯的注意事项：,紫外线消毒灯强度监测化学指示卡必须经过卫生部批准认可，并在有效期内使用及时
10、记录判断结果，放置时间过久，指示卡光敏涂料的颜色会随着时间变化而变淡。指示卡应用避光纸包装，置于4冰箱内储存，以免光敏涂料遇日光照射不稳定变色而影响监测结果。紫外线灯安置后及使用前应进行监测，使用中的灯管照射强度监测，应6个月监测一次。监测时应特别注意照射距离和时间，以免影响检测结果的准确性。测试时注意个人防护，避免灼伤眼角膜、皮肤。,28,三、消毒剂的监测,卫生部医院感染管理规范规定：必须对使用中的消毒剂、灭菌剂，进行 生物和化学的监测。使用中的消毒剂国家卫生标准：皮肤黏膜消毒液细菌菌落总数应10cfu/ml；其他使用中的消毒液细菌菌落总数100cfu/ml，致病性微生物不得检出。,29,三
11、、消毒剂的监测,化学监测要求应该根据消毒剂、灭菌剂的性能定期监测。含氯消毒剂：应该每日监测浓度，并做好记录；消毒剂使用的时间不得超过产品说明书规定的使用期限戊二醛：每周不少于1次监测浓度；应同时对消毒、灭菌的物品进行消毒灭菌效果的监测消毒物品，不得检出致病性微生物；灭菌物品，不得检出任何微生物。,30,三、消毒剂的监测,化学监测含氯消毒剂浓度测试纸：测定时，半分钟内，在自然光下与标准色块比较，读出溶液所含的有效成分浓度值。时间超过1分钟，颜色即逐渐消退。,31,化学监测：（测氯浓度试纸）,32,三、消毒剂的监测,化学监测戊二醛浓度测试纸操作方法：从小瓶中取出一条试纸，并旋紧瓶盖；将指示色块完全
12、浸没于戊二醛溶液，并及时取出；用吸水纸吸取多余的液体；横置于瓶盖上，注意不要将色块面朝下；等候3 8分钟的颜色变化，判读结果。（低于3分钟，颜色变化不彻底结果不正确；超过8分钟，颜色逐渐褪去，也使判读困难）,33,化学监测（测戊二醛浓度试纸）,34,三、消毒剂的监测,化学监测戊二醛浓度试纸操作操作结果判定：指示色块变成均匀黄色时，说明溶液的有效浓度高于所测最低有效浓度。指示色块全部或仍有部分白色，说明溶液的有效浓度低于最低有效浓度。,35,三、消毒剂的监测,生物监测 检测方法：A、涂抹法：用无菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入9.0ml含有相应中和剂的采样管内混匀；用无菌吸管吸取上述溶液0.2m
13、l，滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样；一平板置20培养7天，观察其霉菌生长情况，另一平板置35温箱培养72小时记数菌落数同时按照卫生部消毒技术规范 2002年11月版,详见204页（按照3.17.15 原则执行）检测致病菌（金葡、乙型溶血 性链球菌）。消毒液染菌量（cfu/ml）=每个平板上的菌落数50,36,三、消毒剂的监测,生物监测检测方法：B、倾注法：用无菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入9.0ml含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀；分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内，加入已熔化的45-48 的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固；一平板置20培养7天，观
14、察其霉菌生长情况；另一平板置36 1 培养72小时，记数菌落数；同时按照卫生部消毒技术规范 2002年11月版,详见204页（按照3.17.15 原则执行）检测致病菌（金葡、乙型溶血 性链球菌）。消毒液染菌量（cfu/ml）=每个平板上的菌落数20,37,三、消毒剂的监测,生物监测结果判断：消毒剂：每季度监测1次，其含菌量必须 100cfu/ml，不得检出致病性 微生物；灭菌剂：每月监测1次，不得检出任何致 病性微生物。3、注意事项：采样后1小时内检测。,38,使用中的碘伏效果监测法,使用中的碘伏,39,注意：如果自己配制的消毒剂，要有配置时间、失效期、配置人员签名。所有化学测试纸、卡，必须经
15、过卫生部批准认可，并在有效期内使用。,40,四、软式内镜消毒灭菌效果监测,采 样,41,四、软式内镜消毒灭菌效果监测采样,42,四、软式内镜消毒灭菌效果监测,卫生部要求：消毒后的内镜应该每季度进行生物学监测并记录完整；灭菌后的内镜应该每月进行生物学监测并记录完整。内镜消毒、灭菌后合格标准：消毒后的内镜合格标准为：细菌总数 20 cfu/件，不能检出致病菌。灭菌后的内镜合格标准为：无菌检测合格。（灭菌后的内镜和附件应按照无菌物品要求进行储存）,43,五、医院环境卫生学监测,医院环境卫生学监测内容包括：定期进行空气培养 定期进行物体表面培养 定期进行工作人员手培养,44,空气及物体表面微生物学监测
16、指标,45,五、医院环境卫生学监测,卫生部医院感染管理规范规定：医院应每月对手术室、重症监护（病房）室ICU、产房、母婴室、新生儿病房、骨 髓移植病房、血液病房、血液透析室、供 应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门 进行环境卫生学监测。当有医院感染流行时，怀疑与医院环境卫生 学因素有关时，应该及时进行监测。,46,洁净手术室空气采样流程,图1 手术间准备图2 采样物品准备，培养皿采样前室温放置30分钟图3 采样人员准备，穿戴与待测洁净区相应的工作服,1,2,3,47,图4 不同级别区域采样布点，布点上方避免遮挡物图5 打开培养皿盖，平移至培养皿边缘，暴露的培养皿上面禁止操作，防止污染,5,4,
17、48,图6 暴露培养皿30min后，将培养皿盖合上图7 标识培养皿图8 随机取出培养皿一个，打开培养皿盖，平移至培养皿边缘后立即合上，做操作对照,6,7,8,49,图9 将培养皿放入转运箱，密闭转运至细菌室，在37条件下培养24h图10 每 批次随机抽取培养皿放入培养箱中培养，做培养皿无菌试验,9,10,50,非洁净环境空气沉降菌采样,图1 待测房间准备，静止至少10分钟,图2 物品准备,图3 根据待测房间面积大小，按GB15982要求放置培养皿,图4 空白对照,图5 从里到外逐个打开培养皿盖，扣放于平皿旁（注：手、头等严禁从培养基上方越过,图6 暴露规定时间后，按打开顺序盖上平皿盖，及时送检
18、,51,物体表面消毒效果监测方法,1,2,3,4,图1 物品准备：规格内板径5cm5cm图2 打开无菌棉签图3 消毒采样管口后取下管塞图4 将无菌棉签放入无菌0.03mol/L的PBS或生理盐水中浸湿并挤出多余液体。,52,物体表面消毒效果监测方法,6,6,5,5,图5 A.在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉签，连续采样4个规格板面积；爆发流行调查时，采样面积不限；B.小件物体则涂抹物体全部表面采样图6 将棉签放入采样管中折断手接触部分，并消毒试管口后盖紧（A、B）,53,工作人员手消毒效果监测方法,图1 物品准备图2 酒精灯外焰烧灼采样试管管口，用无菌棉签蘸取中和试剂图3 被检者卫生手消毒后，双手5指并拢，用棉拭子在一手曲面从指跟到指端往返涂2遍，涂擦过程中同时转动棉拭子；同法采集另一手,1,2,3,54,工作人员手消毒效果监测方法,图4 取无菌剪刀，酒精灯外焰烧灼采样试管管口（同图2）图5 减去棉拭子手接触部分投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内；酒精灯外焰烧灼试管管口后塞上瓶塞（同图2）,4,5,55,56,
