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1、T-SPOT TB与预防性抗结核治疗,硕士研究生：李思颖 导 师：杨益大教授 2015.11.6,传染病诊治国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心浙江大学医学院附属第一医院,主要内容,T_SPOT.TB的原理,外周血T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术（ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗原刺激后外周血单个核细胞释放的-干扰素来检测抗原特异性 淋巴细胞的应答反应，从而判断结核感染状态。每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞，记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T细胞数量。,T_SPOT.TB的原理,结核特异性抗原,由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白，只存在于结核分枝杆菌群
2、(包括人型、牛型和非洲型分枝杆菌)及其它几种致病性分枝杆菌(如堪萨斯分枝杆菌，Szulgai 分枝杆菌，海分枝杆菌)中，是T 细胞的靶抗原，能诱导皮肤迟发型超敏反应并刺激外周血单核细胞产生-干扰素。,T_SPOT.TB检测方法,T-SPOT检测过程：收集1*106外周血单个核细胞，平均分为4份，每份细胞数为2.5*105，分别加入空白对照、抗原A（ESAT-6）、抗原B（CFP-10）、阳性对照孔中。然后使用ELISPOT 法，并分别记录每个孔中斑点形成细胞数目（SFCs）。,T_SPOT.TB检测方法,当空白对照5 SFCs时，只要（A-空白）或者（B-空白）6 SFCs考虑为阳性，存在结核
3、感染。当空白对照6 SFCs时，要求A或B孔细胞数大于空白两倍才考虑阳性。,T_SPOT.TB结果判读,注：部分化验单回报结果为A、B实验孔出现斑点形成细胞数目（SFCs）减去空白对照后乘以4，因此化验单上界值为6 SFCs*4=24。只要A或者B值24则考虑存在结核感染，AB值之和大于500-600考虑活动性结核可能。,T_SPOT.TB结果的判读,无反应性：表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞,有反应性：表明样本中存在针对结核杆菌特异的效应T细胞,T_SPOT.TB 阳性,活动性结核病：结核中毒症状，影像学检查支持结核病诊断，临床排除其他疾病结核感染状态：结核中毒症状，无影像学
4、等临床检查证据，临床排除其他疾病，试验性抗结核治疗有效既往结核感染：无结核中毒症状，影像学显示病灶存在（钙化或陈旧性病灶），存在结核病史潜伏性结核感染：无结核中毒症状，无影像学等临床检查证据，根据发展为活动性结核病风险程度决定是否进行预防性抗结核治疗非结核分枝杆菌感染：4种环境分枝杆菌的感染（海、堪萨斯、苏尔加、戈登分枝杆菌）结核菌素试验TST所致T-SPOT假阳性：需同时检测T-SPOT和TST时，T-SPOT的血样最好在TST实验前或者实验后3天内采取,T_SPOT.TB 阴性,因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的少数免疫系统功能不全的情况，多见于严重免疫缺陷的病
5、人 以及其它免疫学、实验非正常操作的差异 高龄、超重、检测前病程超过6个月肺结核患者出现T-SPOT.TB的假阴性独立危险因素,患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T细胞。假阴性常见于：,T_SPOT.TB 特点,既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动性结核病的特异性降低。只与外周血中结核特异性抗原刺激产生的效应T细胞有关，与感染部位无关。受年龄、机体免疫状态、HIV感染、营养不良等影响较小。抗结核治疗后效应T细胞消失，可使斑点数减少或使结果呈阴性。与是否排菌无关。,我院T_SPOT.TB试验结果,结核病中的敏感性为83.2%,特异性为81.
6、6%,阳性预测值为64.5%,阴性预测值为92.3%。肺外结核组的阳性率低于肺结核，结核性胸腔积液患者，抽取积液行T-SPOT TB，其阳性率高于血标本。结核患者中,免疫抑制状态与糖尿病对T-SPOT结果无明显影响。（回顾性分析1181例2010年11月至2012年5月在浙医一院行T-SPOT试验的患者资料）,预防性抗结核治疗,对以下高危人群进行筛查，若T-SPOT阳性，则应予以预防性抗结核治疗：近期有活动性结核患者接触史胸片提示存在陈旧性结核病灶者HIV感染者拟行器官移植者接受免疫抑制剂治疗者（包括每天使用泼尼松15mg超过1个月者）矽肺患者透析治疗患者,预防性抗结核治疗方案,6个月INH：5mg/kg（300mg/d）QD 或15mg/kg（900mg/d）BIW,3TNH-RPT：异烟肼15mg/kg（900mg/d）+利福喷丁10mg/kg（900mg/d）QIW(需要DOT）,9个月INH：5mg/kg（300mg/d）QD 或15mg/kg（900mg/d）BIW,长期应用异烟肼患者可予以服用维生素B6预防周围神经炎，同时应注意监测肝功能,thank you！,
