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1、狭叶荨麻中多糖的提取研究,姓 名：指导老师：专 业：食品科学与工程,研究意义,狭叶荨麻是我国常用民间药，始载于图经本草，药用历史悠久，已被收入1995年卫生部药品标准（藏药）第一册。在东北地区资源丰富，却尚未被开发利用，具有广阔的市场前景。,目前，我国对狭叶荨麻的基础研究甚少，多为其同属植物的研究，因此我们选取狭叶荨麻作为研究对象，对狭叶荨麻中多糖进行提取研究，为对其进行深入研究奠定基础。因此，本论文的研究内容具有重要的意义。,国内外研究现状,目前国内外对狭叶荨麻的研究还很少，主要在于它的提取物的药理作用的研究。国外研究表明狭叶荨麻提取物有抗肾上腺素作用，而国内也有报道狭叶荨麻水煎液具有明显的
2、抗凝血作用。现代药理研究也证实，荨麻多糖有显著的抗炎、增强免疫作用。因此，对狭叶荨麻的活性成分-多糖的深入研究有待进一步开展。,研究内容,狭叶荨麻多糖的提取 狭叶荨麻多糖的分离纯化 狭叶荨麻多糖光谱分析 狭叶荨麻多糖组分分析,1.狭叶荨麻多糖提取纯化工艺流程图,狭叶荨麻干品,预处理,热水浸提,浓缩 醇沉,离心,狭叶荨麻粗多糖,Sevage法脱蛋白,有机溶剂萃取,干燥,狭叶荨麻多糖,狭叶荨麻多糖的提取,(1)葡萄糖标准曲线 如图1所示，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标得标准曲线。回归方程为：C=12.188A-0.0005（R=0.9991）通过回归方程以及提取率的计算公式计算狭叶荨麻在最优
3、试验条件下的多糖提取率为6.309%。,图1 葡萄糖标准曲线,2.狭叶荨麻多糖含量测定,(2)葡萄糖稳定性实验 如图2所示，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标进行绘图。结果表明所用测定方法显色后5min内稳定，10min内吸光度略有下降。因此应该在显色后5min内完成测定。,图2 葡萄糖标品稳定性图,2.狭叶荨麻多糖含量测定,浸提温度 浸提时间 料液比,3.狭叶荨麻多糖提取的影响因素,(1)浸提温度 如图3所示，90C为最佳 提取温度。,图3 浸提温度对多糖提取率的影响,(2)浸提时间 如图4所示，1h为最佳提 取时间。,图4 浸提时间对多糖提取率的影响,(3)料液比 如图5所示，110为最佳 料
4、液比。,图5 料液比对多糖提取率的影响,4.正交试验,通过单因素试验得出正交试验因素水平表（如表1），选择L9（34）正交表（表2）进行试验。,表1 因素水平表,表2 正交试验结果,表3 正交试验方差分析表,由正交试验结果（表2）和方差分析表(表3)可知，最佳提取工艺条件为：料液比110，温度90，时间1h。影响狭叶荨麻多糖提取率各因素的主次关系为：浸提温度浸提时间料液比。,5.优化方案验证试验,表4 优化工艺提取验证结果,优选出最佳工艺后，进行验证试验，以确保其重复性和准确性。,由表4可知，验证的最佳工艺多糖得率稳定，提取率高，证明优选出的最佳工艺合理可行。,6.醇沉比的选择,由图6可知，醇
5、沉比为13时狭叶荨麻多糖的提取率最高，所以醇沉比13为最佳条件。,图6 醇沉比对多糖提取率的影响,1.Sevage法脱蛋白,在多糖溶液中按51与Sevage试剂（氯仿正丁醇=51）混合，经充分振摇，将游离蛋白质沉淀，经分液除去。其脱蛋白效果如图7所示。,图7 Sevage法脱蛋白效果图,狭叶荨麻多糖的分离纯化,2.有机溶剂萃取,1)石油醚萃取,在多糖溶液中按31加入石油醚，经充分振摇，将杂质溶于石油醚中，经分液除去。其杂质除去效果如图8所示。,图8 石油醚除杂质效果图,2)乙醚萃取,在多糖溶液中按31加入乙醚，经充分振摇，将杂质溶于乙醚之中，经分液除去。其杂质除去效果如图9所示。,图9 乙醚除
6、杂质效果图,3)乙酸乙酯萃取,在多糖溶液中按31加入乙酸乙酯，经充分振摇，将杂质溶于乙酸乙酯中，经分液除去。其杂质除去效果如图10所示。,图10 乙酸乙酯除杂质效果图,红外光谱分析,图11中3467cm-1处有吸收峰，为多糖-O-H形成的分子间或分子内氢键；1430cm-1处为CO的伸缩振动峰，为多糖的特征吸收峰；850cm-1处表明组成的单糖有-D-吡喃葡萄糖存在；760cm-1为吡喃糖环C-O-C对称振动峰。,图11 红外光谱图,狭叶荨麻多糖光谱分析,狭叶荨麻多糖组分分析,图12 气相色谱分析图,气相色谱分析,由图12及表5可知，狭叶荨麻多糖主要由3种单糖组成：葡萄糖、木糖、甘露糖。并根据
7、面积归一化法，面积之比近似等于物质量之比，可推算出各个单糖物质量之比大致为：木糖葡萄糖甘露糖=15.2417.66 66.10。,表5 狭叶荨麻多糖气相色谱数据表,结论,本论文通过对狭叶荨麻多糖提取、分离纯化的研究和多糖组成成分分析，主要得出以下结论：对狭叶荨麻多糖进行提取条件优化的研究表明：料液比为 110，浸提温度为90，浸提时间为1h为最佳提取工艺条件。最佳醇沉比为13。经优化试验验证，狭叶荨麻多糖在优选工艺条件下提取率为6.309%。本试验用Sevage法脱蛋白，有机溶剂萃取对狭叶荨麻粗多糖进行纯化，结果显示效果比较理想。对狭叶荨麻多糖样品进行红外光谱检测，图谱显示出一般多糖类物质的特征吸收峰。对狭叶荨麻多糖样品进行气相色谱分析，得出狭叶荨麻多糖主要由3种单糖组成：葡萄糖、木糖、甘露糖。,谢 谢 各 位 老 师 辛 苦 了！,
