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1、脐带间充质干细胞概述,市场部2015-09-13,目录,定义 临床应用 优势 前景样本接收标准及冻存工艺案例分析,什么是脐带间充质干细胞？,脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。,间充质干细胞,间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。,脐带获取干细胞的另一来源,我国科学家2006年首次从新生
2、婴儿废弃的脐带组织中得到了一种多能干细胞，称作脐带间充质干细胞(UC-MSC)。UC-MSC具有胚胎干细胞类似的增殖能力和多向分化潜能，且来源丰富、取材方便、低病毒感染率、无伦理障碍，又没有胚胎干细胞产生畸胎瘤的问题，并且抗原性很低。不产生免疫排斥反应，异体使用无需HLA配型。,间充质干细胞治疗疾病的原理,替代和修复死亡和受损伤的细胞；激活休眠和处于抑制状态的细胞；旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）,涉及病症,肝脏疾病,神经系统疾病,心血管疾病,血液系统疾病,骨关节疾病,烧伤,糖尿病,MSCs可能用于治疗以下疾病,间充质干细胞,多向分化,作为种子细胞，临床上主要用于治疗机体无法自然修
3、复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病,是关键,鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点,作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病,脐带间充质干细胞具有临床应用价值,泌尿系统：肾实质的修复；消化系统：肝组织的修复；内分泌系统：胰岛细胞的修复；神经系统：脑、脊髓损伤的修复；血液系统：化疗、放疗后造血系统 的修复；循环系统：心肌修复、血管修复；免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；衰竭器官的结构和功能的修复和再生：最终替代组织和器官移植。,间充质干细胞治疗途径,腰穿途径静脉途径局部种植介入途径,优势,1、取材方便：采集过
4、程简单、无痛苦，不影响母子健康；2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；3、免疫原性低：具有独特的免疫调 节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。,前景,干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓损伤、心力衰竭等疾病。,间充质干细胞前景,干细胞的魅力在于：一旦身体需要，这些细胞可按照发育途径通过分裂而产生分化成熟的体细胞。也许在某一天，人们突然发现，人体器官可以在实验室按需要、按流程生产，血细胞、脑细胞、骨
5、骼、心肌细胞、肝脏、神经等的更换都不成问题，即使患上白血病、帕金森氏症和癌症这些不治之症也能绝处逢生。,供者筛选,供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。,样本采集运输要求,脐带采集标准：1.脐带长度不得低于20cm 2.脐带两端均在2-3cm处结扎 3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化 4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横 5.采集套装内容完整，无缺失 6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认 7.脐带运输时间在规定范围内 8.温度控制在适度范围内（0度-25度）,样本接收标准,脐带的接收标准：1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。2.母血采集量5ml 脐血检测样
6、本采集量5ml 3.采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。4.无可能造成供者基因型异常的家族史。5.供者健康调查表登记信息无异常。,间充质干细胞的制备方式,间充质干细胞的制备原理：脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。,组织块分离法,免疫五项检测均为阴性,工艺流程简介,信息反馈,间充质干细胞的制备方式,华通氏胶的提取与培养华通氏胶提取：1.消毒2.清洗3.分离出两条动脉和一条静脉4.剥取华通氏胶5.剪碎华通氏胶（大小1mm3）6.接种至培养皿培养（密度2-3g/10cm皿
7、）,间充质干细胞原代培养,细胞补液和换液（原代培养）1.制备五天补液（观察是否有细胞爬出）2.八天换液,间充质干细胞的冻存,细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO）配制：DMSO 10%冷冻方式 深低温冰箱梯度降温,细胞治疗程序,1、治疗前咨询：明确诊断，明确疾病处于哪一期；2、治疗风险：分析利弊；可能的副作用；获益 3、知情同意：,治疗前准备,1).安全检测:菌检；2).个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定;3).需要的细胞数量；4).细胞的使用方法；5).可能出现的不良反应及应对措施。,间
8、充质干细胞质量要求,细菌检测内毒素检测革兰氏检测支原体检测活性检测90%,阴性,细胞发放,1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保存液）2.运输要求：时间、温度3.病人信息填写完整4.样本检测合格,MSC治疗禁忌证：,1.怀孕。2.精神病。3.严重的心、肝、肾、肺功能不全。3.不能控制的严重感染。4.合并其他有致命危险的疾病。5.一般受者年龄不超过65岁（个别患者65岁）。6.自体免疫性疾病晚期。7.恶性肿瘤。8.HIV 阳性,案例分析,干细胞临床应用,一、肝硬化细胞移植有可能成为肝硬化治疗的最佳备选方案。越来越多的体内外实验表明MSC可以横向分化为功能性肝细胞，动物研究表明脐带MSC可以抑制诱导
9、型的肝硬化发生，并促进肝硬化的消退。,临床资料,本组男10例，女2例，年龄38-63岁。均为慢性乙型肝炎，肝硬化,Child-Pugh分级B级9例，C级3例。健康婴儿脐带提取间充质干细胞经实验室传代、扩增，取108制成40ml混悬液，第一次经肝动脉注入，第二次以后为静脉输注，每周一次，共4次。4周后复查生化指标。,结果,食欲改善、体力好转11例（91.66%）；腹胀减轻11例（91.66%）；腹水减少、下肢浮肿减轻10例（83.33%）。12例患者术中均未发生严重并发症，术后无不良反应。,12例肝硬化患者脐带间充质干细胞移植前后实验室指标变化,MSC治疗肝硬化的机制,主要有以下几个方面：1)M
10、SC分化形成正常肝细胞，补充肝细胞数量，改善肝功能；2)MSC分泌细胞因子/生长因子、抑制炎症反应；3)MSC抑制肝星形细胞，活化、阻止细胞外基质的生成；4)MSC激活卵原细胞，促进肝细胞再生；5)MSC降解肝内过量的细胞外基质。,二、脊髓损伤,临床资料本组男11例，女4例。年龄11-48岁，平均37岁。病程4个月-5年，平均1.2年。治疗前均有损伤平面以下肌力、肌张力减退，其中尿失禁9例，大便失禁7例。,临床资料,脐带间充质干细胞108，第一次、第三次制成混悬液20ml，其中5ml通过腰穿作椎管内注射，另外15ml经静脉输注。第二次、第四次制成混悬液40ml，作静脉输注。每次间隔一周，共4次
11、为一疗程。,评价标准,感觉平面恢复2个椎体节段以上，肌力恢复2级及以上，肌张力恢复2级及以上，大小便能控制，达到上述之一者，为显效。有改善但达不到上述标准，为有效。,结果,15例患者，显效5例，有效9例，无效1例。,三、肌萎缩侧索硬化症,肌萎缩侧索硬化症(amyotrphic lateral sclerosis，ALS)是一种累及锥体束上、下运动神经元(脊髓、大脑、脑干)的进行性变性疾病，发病后25年内死亡，主要死因为呼吸衰竭，目前临床无有效治疗方法。,结果,4名患者经MSC治疗后用力肺活量和ALS功能评分的线性衰减趋势明显变缓。有效率达44.4%。研究结论为MSC治疗ALS安全、耐受性好、无明显急性或长期毒性，且疗效颇具前景。,谢谢！,
