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1、下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究,专 业：口腔正畸学导 师：王小琴 教授研 究 生：赵 华,前言材料与方法结果讨论结论,目录,前言,Allwright and Bundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(Mandibular Prognathism,MP)患病率较其他地区相对较高，大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。,MP有家族聚集倾向,MP可能为常染色体显性遗传病 局部因素,有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传 多因素影响,Gheriani Marazita,许多学者,Ricardo Silviene,2003年,2007
2、年,19世纪,2007年，余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长激素受体基因单核苷酸多态性分析。,另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因，比如ShhNell-1Ptc等。,结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)胞嘧啶(C)。,国内研究现状,Nell-1基因,目前对 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组织工程学方面，基因改变研究未见报道。,本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。,SNP位点,基因,G,C,蛋白质,Glu,Asp,天冬氨酸,谷氨酸,研究目的,探讨Nel
3、l-1基因单核苷酸多态性 位点rs61150458在下颌前突与正 常人群之间的差异 为下颌前突的病因学机制提供理 论基础。,材料与方法,实验试剂与仪器,研究对象,满足以下条件的进行头颅侧位片测量：均为汉族人，且没有异族通婚史 双侧颌面对称，无面部畸形 无不良习惯及替牙障碍 均为成年人，无外伤史，无手术史,纳入标准,对照组(正常)：SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH 在正常范 围之内，2ANB4,实验组(MP)：SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，ANB0。,实验组60人,对照组45人,采静脉血5ml,提取全部DNA,设计相应目的基因的引物,PCR扩增目的基因,
4、Hinf 酶切,统计学分析,实验步骤,DNA提取采用TKM血细胞DNA快 速提取法,DNA提取,目的基因引物的设计,引物的设计采用Printer 3.0软件上游引物：gcttccagggtggagtttta下游引物：cacagagttttggacccatgt,50LPCR反应体系,PCR反应参数,1 SspIaat|att13 1tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc 61MboIIn|nnnnnnntcttc84 61NdeII|gatc83 61MboI|gatc83HinfIg|antc10161tcctt
5、tgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg 121MboIIn|nnnnnnntcttc167121tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc,酶的确定,Hinf,5 G A N T C 3 3 C T N A G 5,统计学分析,比较各组间等位基因频率和基因型分 布，采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行 Hardy-
6、Weinberg遗传平衡性检验 所有统计学检验采用SPSS 17.0软件完 成，以P0.05代表有统计学差异,结 果,电泳结果目的基因扩增产物,200bp,Marker,目的基因,实验组酶切后凝胶电泳图,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,对照组酶切后凝胶电泳图,100bp,200bp,GG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp,等位基因频率分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间等
7、位基因频率差异无显著性。,基因型分析,注：P0.05，即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。,讨 论,可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan 研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞，特别是对下颌骨的成骨有其特异性,Nell-1基因的特点,MP的致病原因与Nell-1基因无关。,由于样本量有限，其代表性有限。,MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。,结果分析,结论,由于实验组与对照组的病例有限，对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究，对其它位点及二者之间的内在联系仍
8、需深入探讨。,Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性，尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。,1,2,主要参考文献,1 Alexander AE,McNamara JA Jr,Franchi L,et al.Semilongitudinal cephalometric study of craniofacial growth in untreated Class III malocclusion J.Orthod Dentofacial Orthop,2009,135(6):1-14 2 Baccetti T
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14、e.Biology and clinical applicationsJ.Bone Joint Surg,2002,84-A(6):1032-1044 14 A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,et al.Marazita Segregation Analysis of Mandibular Prognathism in Libya J.Dent Research 2003,82(7):523-527 15 Ricardo Machado Cruz,Henrique Krieger,Ricardo Ferreira,et al.Major Gen
15、e and Multifactorial Inheritanceof Mandibular Prognathism J.American Medical Genetics,2008,146A(1):71-77 16 Stockton DW,Das P,Goldenberg M,et al.Mutation of Pax9 is associated with oligodontiaJ.Nat Genet.2000,24(1):18-19 17 Zhou J,Lu Y,Gao XH,et al.The growth hormone receptor gene is associated with
16、 mandibular height in a Chinese populationJ.Dent Res,2005,84(11):1052-1057 18 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,et al.Craniosynostosis in transgenic mice overexpressing Nell-1 J.Clin Invest,2002,110(6):861-870 19 Lander ES.The new genomics:global views of biologyJ.Science,1996,274(5287):536-539 20 David
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18、idt SC,et al.A map of human genome sequence variation eontaining 1.42 million single nucleotide polymorphisms J.Nature,2001,409(6822):928-933 23 Fomage M,Doris PA.Use of single nucleotide polymorphisms for gene discovery in hypertensionJ.Curr Hypertens Rep,2000,2(1):23-31,首先，我衷心感谢我的导师王小琴教授，在三年来的学习、工作和生活中给予我无微不至的关怀和启迪。是她开拓了我的思路，让我走进了科研的大门。在我完成学位论文的每一步都离不开她的精心指导和关怀。她对我的帮助我终生难忘，受益匪浅。在收集病例中黄荣花老师、潘涛老师等也都给予了我极大的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意。其次，我要感谢山西医科大学附属一院口腔科的各位老师，在我实习阶段，是你们毫无保留地教我知识，指导我操作，让我在实习阶段学到了许多。最后感谢我的家人这么多年对我含辛茹苦，倾尽心血的坚定支持，让我安心的完成学业。祝大家身体健康，万事如意！谢谢！,致谢,谢谢,
