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1、,限制性核酸内切酶切割原理、方法、结果分析及应用PPT制作:杜雨濛、张佳佳、陈靓,Most restriction site sequences are palindromes.课堂内容回顾1、定义:限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一6tnse类酶,简称限制酶。2、分类I型酶:具有DNA修饰的作用在非特异位点处切割DNA。(根据酶的基因、蛋白质结果、依赖的辅型酶:是最重要的工具酶能在DNA分子内部的特异助因子及DNA裂解的位点识别和切割DNA双链,所以通常所说的限制特异性,将限制性内性内切酶就指这一类酶切酶分为三种类型)型酶
2、:与型酶一样,具有限制与修饰活性,其切割位点很难预测,型酶:具有DNA修饰的作用在非特异位点处切割DNA型酶:是最重要的工具酶能在DNA分子内部的特异位点识别和切割DNA双链,所以通常所说的限制性内切酶就指这一类酶型酶:与型酶一样,具有限制与饰活性,其切割位点很难预测规则第一个字母(大写):取自该酶的细胞属名hlI第二、三个字母(小写):该细胞的种名人第四个字母(罗马数字):代表同一菌株中不同限制性内切酶的编号例如:EcoR I、Hind等等,限制性核酸内切酶切割原理1、I类和类酶:在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。I类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远
3、处的DNA,而类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。2、类由两种酶组成:一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列;另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。绝大多数类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列,产生5或3黏性末端(也有一些产生平端或钝端),几种限制性内切酶的切割位点限制酶 BamHI EcoR!Pstl日的基因识惊列和 GGATCCIG AATTC|CTGCAG位点 TAG GCTTAAG6cr123、同工异源酶:来源不同但能识别和切割同一位点的酶。如:BamH I和BstI,XhoI和PaeR7等可以相互代替使用。4、同尾酶:识别序列不同,但产生相同末端的限制性内切酶。如:BamH I和Sau3AI等由此产生的DNA片段可借黏性末端相互连接,操作是具有更大的灵活性。,
