《组培指导课件.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《组培指导课件.pptx（29页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、植物组培实验操作指导,北京川布兰生物技术开发有限公司技术部,一、培养基制备,配制培养基需要的仪器设备电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）,培养基制备所需仪器设备及耗材,2、加热煮沸,将溶解的培养基用电磁炉加热煮沸至琼脂全部溶解，溶液呈澄清态。少量的培养基可用烧杯放于微波炉加热。煮沸溶解后添加蒸馏水补充加热损失的水分。（图4）,（图4）,3、添加激素调节pH,按照培养的不同植物以及不同外植体添加合适的激素（图5）（矮牵牛腋芽转接不需加激素），调节pH值至6.0。（图6、7）,（图6）,（图7）,
2、4、分装,待培养基冷却至5060时，分装到组培瓶中，每瓶2530mL，拧上盖子。（图8，10，11）注：瓶盖上的固定滤膜装置要拧紧，防止滤膜脱落。（图9）,（图8）,（图9）,（图10）,（图11）,5、灭菌及冷却,把分装好的组培瓶和培养皿放于高压蒸汽灭菌锅中121灭菌20分钟。（图12，13，14）灭菌结束后取出放置室温冷却凝固备用。,（图12）,（图13）,（图14）,二、无菌苗接种培养,超净工作台、光照培养架或恒温光照培养箱、解剖剪、镊子、两面板（试管架）、酒精灯、火柴（打火机）、酒精棉球、无菌培养皿、废液缸。,接种培养需要的仪器设备,1、超净台灭菌,打开超净工作台内的紫外灯和风机（开到
3、低速档），把实验用到的相关器械放进超净工作台紫外照射灭菌20 30min。灭菌结束后关闭紫外灯，继续吹风5min去除臭氧的味道。（图15）,（图15）,2、双手消毒,点燃酒精灯，使用酒精棉球擦拭双手，尽量擦拭到手指缝和指甲盖位置。（图16，17）注：如果用火柴点酒精灯一定要让火柴熄灭后方可放入废液缸，以免点燃使用过的酒精棉球引起火灾。,（图16）,（图17）,3、接种器械消毒,先使用酒精棉球对解剖剪（解剖刀）和镊子进行擦拭，然后放于酒精灯火焰进行灼烧，剪刀的交叉部位需张开活动以便充分灼烧。灼烧灭菌后放于两面板或试管架上冷却。（图17，18，19，20）,（图17）,（图18）,（图19）,（图
4、20）,4、修剪无菌苗,把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图21，22，23，24）（注：瓶口灭菌时间不宜过长，以免烧坏瓶口）剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽和叶柄。（图25，26，27）,（图21、22、23、24）,修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大的话再剪开，最后剪成边长0.5cm大小即可。修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株；使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便修剪。,（图25、26、27）,5、接种培养,把未接种培养
5、基瓶口在酒精灯火焰灭菌2 3秒后打开瓶盖，用镊子夹取腋芽或叶片接种于培养瓶内。叶片平铺在培养基上，页面朝上，腋芽直接插入培养基即可。（图28，29）,（图28）,（图29）,接种结束后把瓶口和瓶盖在酒精灯火焰灭菌2 3秒后盖上瓶盖，放在光照培养架或者恒温光照培养箱内培养。（图30，31）培养条件：25室温光照培养12h，黑暗培养12h。,（图30）,（图31）,三、移栽,移栽到花盆或花圃、也可移栽至小型无土栽培系统。,1、炼苗,挑选长势较好而且长出根系的无菌苗，在移栽培养的环境中先闭瓶放置3天，再打开瓶盖放置3天，让无菌苗适应室内的温度和湿度。（图32）,（图32）,2、移栽到花盆,炼苗结束后把无菌苗从组培瓶中取出，去净培养基，把组培苗移栽到蛭石和草炭土的混合基质中。（图33，34，35，36）,（图33）,（图34）,（图35）,（图36）,3、成苗开花,在培养的过程中要经常浇水或营养液，温度维持在25 30，植株容易开花。（图37）,（图37）,小飞守角制作,实验结束Thank you!,
