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1、生物医药工程系2011届本科毕业论文黄芩连作对土壤微生物数量的影响研究专 业 生物科学 学 号 5 学生姓名 指导教师 完成时间 2011-05-28 陕西 商洛 毕业论文任务书姓名： 学院：商洛学院班级：07生物科学专业：生物科学毕业论文题目;连作黄芩对土壤微生物数量的影响研究立题目的和意义：连作障碍是制约中药材产量和质量的重要因素之一，但有关其连作障碍的研究仅停留在对该现象的解释上，目前我国对作物连作障碍的研究主要集中在豆类瓜类烟草棉花蔬菜等植物上，而对中药材连作障碍方面研究还很少，对其连作障碍的成因也认识不足，也未曾对黄芩的根系微生物进行研究。本研究从黄芩土壤微生物群落总数测定入手，研究
2、了不同连作年限黄芩根系微生物数量和种类，旨在探明连作黄芩土壤微生物数量的变化趋势，以指导商洛黄芩基地规范化种植。技术要求与工作计划：1.技术要求在研究过程中，应综合应用所学基础理论、基本知识和基本技能，分析解决实际问题；在试验中要认真操作，在老师的指导下完成采样等前期准备工作！熟悉稀释涂布的原理及操作方法。2工作计划第一步，查找与整理资料，确定选题。第二步，根据选题，在导师指导下初步形成论文写作提纲。第三步，在老师的带领下采集土样。第四步，根据掌握的方法，进行实验探索。第五步，实验之后的思考和论文写作的前期工作.第六步，论文写作提纲定稿，组织有关资料准备论文撰写。第七步，进行论文写作，完成初稿
3、工作。第八步，根据导师所提意见和建议，经反复修改后定稿。第九步，积极准备及参加论文答辩，并按答辩小组意见在导师的指导下进行修改和定稿。第十步，按规范要求进行打印、装订一式两份的毕业论文。时间安排：1 毕业设计准备 2010年09月01日-2010年09月05日2 确定题目 2010年09月05日-2010年09月6日3 开题（确定提纲、提交开题报告书和毕业设计任务书） 2010年09月6日-2010年09月13日4 提交初稿 2010年09月13日-2010年09月20日5 中期检查（基本定稿，准备答辩）2010年12月10日-2010年12月20日6 进行论文答辩 2011年06月01日-2
4、011年06月10日7 根据答辩委员会要求修改论文定稿 2011年06月10日-2011年06月24日8 论文打印及装订 2011年06月25日-201年06月30日9 毕业论文工作总结、资料归档 2011年07月01日-2011年07月05日指导教师要求：（签字） 年 月 日教研室主任意见：（签字） 年 月 日系室意见：（签字） 年 月 日黄芩连作对土壤微生物数量的影响研究摘要通过对连作黄芩根际及非根际土壤微生物数量变化的研究，结果表明，微生物总数由大到小依次是3年根际土壤3年非根际土壤1年根际土壤1年非根际土壤。由此可见随着种植年限的增加，微生物总量呈增加趋势。且所有土壤微生物在总体数量上
5、均以细菌为绝对优势，占其总量的99以上，放线菌次之，真菌最少。随着连作年限增加，细菌、放线菌、真菌总数平均增加，根际3年种植年限细菌数量是1年根际的7.50倍；非根际3年种植年限细菌数量是1年非根际的11.78倍。根际3年种植年限放线菌数量是1年根际的6.23倍；非根际3年种植年限放线菌数量是1年种植年限非根际放线菌数量的2.48倍。3年种植年限黄芩田根际真菌数量是1年种植年限根际真菌数量的1.69倍；3年种植年限非根际真菌数量是1年种植年限非根际真菌数量的1.17倍。黄芩田土壤中香农威纳指数和均匀度指数在一年根际土中达到最高，其次是一年非根际土壤、三年非根际土壤、三年根际土壤，香农威纳指数指
6、数和均匀度指数都在降低，从而微生物多样性和均匀度降低，土壤生态系统稳定性下降，抗干扰能力降低，说明了连作黄芩可能会影响生态系统的稳定性。关键词：连作；连作障碍；黄芩；土壤微生物；微生物多样性指数Abstract Radixscutellariae by cropping and non-rhizosphere soil microorganisms changes, the results show that the total number of bacteria dominant, accounting for 93.88% of the total microbial 99.99%, f
7、ollowed by actinomycetes, was the lowest with the fungus. With continuous cropping increased, bacteria,actinomycetes ,fungi increased the total number of average, which increased by 4518%of bacteria,actinomycete,an increase of 34.97 percent ,fungi, an increase of 343.78 percent.Both bacteria, fungi,
8、 actinomycetes, and even for a year Campanulaceae rhizosphere microorganisms was significantly higher than non-rhizosphere, rhizosphere bacteria with one year of non-rhizosphere bacteria than 1790%over three years than non-rhizosphere rhizosphere bacteria more than 39 percent a year, actinomycetes i
9、n rhizosphere than non-rhizosphere actinomycetes 78.4% more than three years in rhizosphere than non-rhizosphere actinomycetes 9.17% more a year than non-rhizosphere fungi in rhizosphere fungi more than 82.16% in three years than non-rhizosphere soil rhizosphere soil fungi and more 860.75%.Key words
10、: Continuous cropping; Radixscutellariae; Soil microbial 目录1 选题背景11.1选题的目的意义11.2选题的依据12 材料与方法32.1研究区基本概况32.2样品采集32.2.1根际土样的采集32.2.2非根际土样的采集32.3研究方法42.3.1培养基的配制42.3.2土壤微生物的测定42.3.3土壤含水率的测定52.3.4微生物指数的计算53结果与分析63.1不同种植年限对黄芩田土壤微生物数量影响63.2不同年限黄芩田细菌状况63.3不同年限黄芩田放线菌状况73.4不同年限黄芩田真菌状况73.5 不同种植年限对黄芩田土壤微生物多样性
11、指数影响84结论9参考文献10致谢111 选题背景1.1选题的目的意义 黄芩为唇形科植物黄芩（ScuteUaria baicalensis）的干燥根，具有清热解毒、燥湿泻火、止血安胎的功效，具有抗炎、抗肿瘤、耐缺氧等作用，用于发热烦躁、肺热咳嗽、泻痢热淋、湿热黄疸、胎动不安、痈肿疮毒等症，现代用于治疗肺炎、慢性支气管炎、高血压、化脓性感染等疾病1。 随着黄芩人工种植面积的扩大，连作所带来的产量下降，病虫害发生等现象时有发生，有研究表明，根茎类药材中70%具有连作障碍2，连作也是导致黄芩根结线虫病发生严重的重要因素，且连作种植年限的长短与根结线虫发生程度呈显著正相关3。连作障碍发生的原因很多，但
12、主要是土壤中微生物种群结构失衡，从而导致作物减产、土壤质量下降4-5。但迄今为止，对黄芩连作土壤微生物随连作茬次变化的研究尚未见报道，黄芩连作条件下根部微生物的动态变化与演替规律尚不清楚。本研究对连作1年和3年的黄芩根土壤微生物三大类群作对比研究，旨在探明黄芩连作障碍因素,探索消除连作障碍的技术，同时对黄芩GAP基地建设和制定标准化操作规程（SOP），提高药材产量与品质提供科学依据。1.2选题的依据 连作是一年内或连年在同一块田地上连续种植同一种作物的种植方式。在一定条件下采用连作，有利于充分利用自然资源，也较易掌握某一特定作物的栽培技术。但同一种植物或近缘植物在同一块土地上连续多年种植以后，
13、即使在正常管理情况下，也会出现生育状况变差、病虫害严重、产量降低、品质变劣的现象，称为连作障碍(continuous cropping obstacles)6。它往往会造成多种弊害：加重对作物有专一性危害的病原微生物、害虫和寄生性、伴生性的滋生繁殖。影响土壤的理化性状,使肥效降低；加速消耗某些营养元素,形成养分偏失；土壤中不断累积某些有毒的根系分泌物，引起连作作物的自身“中毒”等。引起连作障碍的机理相对复杂，是由植物、土壤、微生物三个生态系相互影响与相互作用的结果。虽然不同植物与不同栽培条件，所引发连作障碍的原因也不同，但仍有共通之处。引起连作障碍产生的机理，众说纷纭。18世纪时plenk(1
14、759)， Decandolle(1832)，Danbeby(1845)及uslar(1552)等都先后提出过毒素学说，可是都没有找到直接的证据。而Mofisch于1937所提出作物克生现象 (allelopathy)的概念，为现代化学生态学研究奠定了基石。现代比较公认的连作障碍机理是Claus在1937提出了五大因子系统。分别为:土壤养分的偏耗（ 在植物的生长发育中，离不开N、P、K、B、Mn、Zn、Cl等营养元素,营养元素的多少直接影响到植物体的生理作用，其中N、P、K是土壤易缺乏的元素植物生长需要较大的营养元素）；土壤物理性质的恶化（ 包括水灌地由于土壤中盐分积聚而缓慢恶化和土壤通透性、
15、储水能力下降、土壤酸化板结）；土壤反应异常；植物的毒素积累（主要是由植物化感作用代谢物质组成。植物化感作用指植物在代谢活动中对环境中其它植物所产生的有利或不利的作用）；土壤微生物区系变化的影响7。综上可见，引起连作障碍的主要原因为植物、土壤、微生物三个生态系相互影响与相互作用的结果。土壤微生物是土壤的重要组成部分，主要包括细菌、真菌和放线菌等。关于土壤微生物的研究，研究人员进行了大量的研究，如陈慧8研究了地黄连作对土壤微生物的影响，其研究结果表明随着种植年限的增加，根际细菌真菌减少，但差异均不显著；放线菌增多，连作2年的土壤约为1年的4倍。她认为病原的增加与有益微生物的减少是连作的普遍现象。连
16、作造成根际微生物类群的显著变化，使某些特定的微生物类群得到富集，特别是植物病原真菌，而使得植物根部病害发生，打破根际土壤中微生物种群的平衡，使产量逐年降低。在实践中也发现，外源加入拮抗菌能非常有效的抑制植物根系病原菌的生长，研究认为正常微生物群落的存在是作物生长良好的前提条件。此外，连作还导致土壤透气性降低，同样造成不利于根际细菌繁殖的环境，所以连作土壤中明显的变化是随连作年限的增加植物根际微生物由细菌主导向真菌主导转化，这一现象是导致连作障碍的主要原因之一，随着根际微生物的深入研究，利用人工调控改变连作植物根际微生物区系也许是克服“连作障碍”的有效途径之一。 郝慧荣9等以连作两年和多年的怀牛
17、膝根际土壤为研究对象，对其微生物区系及酶活性的变化作了对比研究。结果表明，连作两年和多年的怀牛膝根际土壤中细菌总数占绝对优势，其平均占有率分别为6227和8946；放线菌次之，平均占有率分别为3759和1045；真菌最少，分别占总菌数的015和009。随着连作年限的增加，细菌数量和比例明显增加；其中亚硝化细菌、反硝化细菌、好气性纤维素分解菌、硫化细菌的数量均明显增加。代丽10等通过日光温室试验研究了连作草莓根际土壤和根表微生物总量动态、 种群结构的变化。结果表明： 连作处理根际土壤和根表真菌总量高于正茬处理。细菌、 放线菌总量则低于正茬处理。生育期结束时， 正茬处理根际土壤和根表的细菌与真菌总
18、量比下降了57.3%和47.5%， 连作处理则分别下降了93.3%和63.1%；连作处理根表和根际土壤放线菌与真菌总量比增高了42.6%和1.26倍， 正茬则增高了8.25倍和4.75倍。郭利11等对烟草不同连作年限的烟田土壤中细菌、田氮菌、放线菌和真菌进行分离，对微生物不同种群进行数量和多样性分析。结果表明，在连作10年内,细菌的数量随着连作年限的延长而增大；连作年限在IO年以上，细菌数量随着连作年限的延长而呈现减小趋势；在连作15年内，固氯茵和教线茵数量随着连作年限的延长而增大。连作年限在5年以内，根际土和非根际土中微生物多样性指数日和均匀度E随连作年限的延长而增大。连作年限在5年以上。根
19、际土和非根际土中微生物多样性指数日和均匀度E随着连作年限的延长而呈现减小趋势。本试验研究了黄芩不同连作年限对土壤微生物变化的影响。旨在为进一步解决黄芩连作障碍提供理论依据。邹莉12等研究了正茬与连作大豆根际及非根际土壤微生物区系的变化。结果表明，细菌总数占绝对优势。连作低于正茬。放线菌数量总体变化幅度不大，真菌数量有显著变化，连作明显高于正茬。连作使土壤pH、含水率和微生物主要生理类群数量明显下降，土壤肥力降低。无论细菌、放线菌和真菌，正茬及连作大豆根际微生物数量明显高于非根际。王明道13等运用传统平板培养方法及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析法对地黄的连作问题进行了研究结果表明，地黄连作引起
20、土壤根际、根外细菌数量减少；根际放线菌数量增加，根外数量变化不大；真菌种类和数量都有较大变化DGGE分析表明，头茬和重茬地黄生长过程中根际土壤微生物区系发生了明显变化，细菌数量减幅较大，有些条带消失，说明种群数量减少；放线菌种群没有大的变化，数量有所上升；真菌数量有所增加，种群发生了明显改变，表现为条带的缺失和增加。地黄连作后土壤微生物多样性发生了较大变化，细菌数量减少，木霉和黄曲霉数量增加，土壤生态系统已开始失调，这可能是地黄连作障碍产生的原因。 土壤环境的变化势必影响土壤微生物群落组成、数量及分布。而土壤微生物群落是个非常特别的生物学群体，其重要的生理功能已引起学者们的足够重视。在生态系统
21、中土壤微生物有机体组成了一个强大的动力资源库，是土壤生态系统中重要的组成部分，其群落结构组成及其变化在一定程度上反映了土壤的质量及其健全性,同时也是克服连作障碍及其他土壤障碍因子的关键所在。更重要的是，土壤微生物群落结构和组成的多样性与均匀性不仅提高了土壤生态系统的稳定性和和谐性，同时也提高了对抗土壤微生态环境恶化的缓冲能力。本试验研究了黄芩不同连作年限对土壤微生物变化的影响。旨在为进一步解决黄芩连作障碍提供可能途径和理论依据。2 材料与方法2.1研究区基本概况陕西商洛地处秦岭南麓，陕西省东南部,与鄂豫两省交界,界于东经1083420111125，北纬33230342440之间。地势西北高东南
22、低，平均海拔900m，受东南季风影响，具有四季分明、降水充沛的特点。年降水量722.9-899mm,平均日照1874-2185h,年总辐射量为5211326J/cm2,平均气温11-14，无霜期198-218 d14。商洛市因受地形、岩性、气候条件的影响，植被类型繁多，素有“南北植物荟萃、南北生物物种库”之美誉，是全国有名的“天然药库”， 陕西商洛黄芩种植区始建于1983年，现已成为中国黄芩的主要产区之一15。尤其是陕西省重大科技创新专项万亩黄芩基地建设项目在商洛市启动，推动了黄芩基地建设走上新水平，黄芩的规范化种植将会得到推广,产量和规模将会得到进一步的提高。2.2样品采集本实验所用土样于2
23、010年7月21日采自陕西香菊药源基地（一年根际及非根际、三年根际及非根际）、陕西香菊药源基地旁边的麦田（对照）。采用五点混合取样法，去除表层0-5厘米，用标准操作法分别采集根际和非根际土壤样品(对照不分根际和非根际)，带回室内备用。2.2.1根际土样的采集采集时用小铲将黄芩连根挖出，去除根上附着的大土块，然后用干净的毛刷将根上黏着的土刷进无菌袋，一式两份，最后将无菌袋封口，并贴上标签，注明采集时间、地点、采集人及采集样品名称。一部分风干保存，测定酶活性；另一部分在4下保鲜，测定土壤微生物类群和数量。2.2.2非根际土样的采集 采用五点混合取样法，去除表层0-5厘米，用小铲将黄芩根周围的土装至
24、无菌袋中，最后将无菌袋封口，并贴上标签，注明采集时间、地点、采集人及采集样品名称。一式两份，最后将无菌袋封口，并贴上标签，注明采集时间、地点、采集人及采集样品名称。一部分风干保存，测定酶活性；另一部分在4下保鲜，测定土壤微生物类群和数量。2.3研究方法2.3.1培养基的配制 2.3.1.1牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 (用于分离和培养细菌)：（1）称取牛肉膏3g、蛋白胨5g、氯化钠3g，加入自来水10O0ml于烧杯中；（2）上述烧杯放在电炉子上加热至微沸，用玻璃棒搅匀，加热溶解之后加琼脂20g，不断搅拌，可适当补水；（3）用pH试纸和0.1mol/L氢氧化钠、0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值，p
25、H值范围在7.0一7.2之间；（4）把配制好的培养基分装在 500ml的三角瓶中，瓶口塞上棉塞，然后用牛皮纸包扎好，贴上标签注明为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；（5）把包扎好的培养基放在高压锅中，在120，1.5Mpa下维持3Omin进行灭菌。灭菌后的培养基放在33恒温箱中保存、备用。2.3.1.2高氏一号培养基 (用于分离和培养放线菌)：(1)称取可溶性淀粉20g、硝酸钾1g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.5g、硫酸亚铁0.01g、氯化钠0.5g，加入自来水I000ml于烧杯中；(2)上述烧杯放在电炉子上加热至微沸，用玻璃棒搅匀，加热溶解之后加琼脂20g，不断搅拌，可适当补水；(3)用pH试纸和0
26、.1mo/L氢氧化钠、0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值，pH值范围在7.2一7.4之间；(4)把配制好的培养基分装在 500ml的三角瓶中，瓶口塞上棉塞，然后用牛皮纸包扎好，贴上标签注明为高氏一号培养基；(5)把包扎好的培养基放在高压锅中，在120， 1.5MPa下维持3Omin进行灭菌，灭菌后的培养基放在33恒温箱中保存、备用。临用前每300ml培养基加入灭菌的3% K2Cr2O7溶液1ml，分开灭菌。2.3.1.3马铃薯糖琼脂培养基（用于分离和培养真菌）：（1）把马铃薯洗净去皮，称取200g切成小片，加自来水1000ml于烧杯中；（2）上述烧杯放在电炉子上加热至沸腾，用玻璃棒搅匀半小时
27、后加琼脂20g，不断搅拌，可适当补充水；（3）用pH试纸和0.1mol/L氢氧化钠、0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值，pH值范围在6.66.8之间；（4）把配制好的培养基分装在 500ml的三角瓶中，瓶口塞上棉塞，然后用牛皮纸包扎好，贴上标签注明为马铃薯糖琼脂培养基；（5）把包扎好的培养基放在高压锅中，在120， 1.5MPa下维持3Omin进行灭菌。灭菌后的培养基放在33恒温箱中保存、备用。临用前每100ml培养基加0.3ml灭菌的乳酸，分开灭菌。2.3.2土壤微生物的测定2.3.2.1仪器和无菌水的准备：清洗三角烧瓶、试管、培养皿、吸管，之后进行灭菌，制作包装三角瓶和试管棉塞，在25O
28、ml三角瓶装90ml蒸馏水、试管中装9ml蒸馏水、塞上棉塞、包扎、灭菌锅灭菌。三角烧瓶和试管须预先塞好棉塞。利用高压锅灭菌时，首先要排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出冷空气后关闭排气阀;或关闭排气阀，待压力上升到0.5MPa时再打开排气阀，待压力回复到将近零时，再关闭排气阀。在120， 1.5Mpa维持30min灭菌。灭菌时间一到，切断电源。待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌锅盖，取出物品。紫外线灭菌是指在超净台接种前，是利用30W灯管，打开紫外灯照射0.5h，可使无菌室内空气灭菌，之后关闭。2.3.2.2制备土壤稀释液：用天平称取土样10g，加到装90ml蒸馏水三角瓶中，
29、振荡15min，即制成10-1的土壤稀释液。用无菌移液管吸取上面的土壤稀释液lml，加到装9ml蒸馏水试管中，即制成10-2的土壤稀释液。同样再从其中吸取土壤稀释液lml加到另外的装9ml蒸馏水试管中，每新加入一个试管，土壤溶液稀释10倍。以此类推，做细菌的土壤溶液稀释到10-7，真菌的土壤溶液稀释到10-3，放线菌的土壤溶液稀释到10-5。在这个过程中，每次用无菌移液管移取土壤溶液时在试管内反复吸取三次，然后取出无菌移液管，并将其通过火焰。2.3.2.3土壤微生物的培养：将以上配制好的三种培养基采用稀释平板法测定土壤微生物总数，用0.1ml稀释涂布法接种，细菌采用10-5、10-6、10-7
30、梯度接种，真菌采用10-1、10-2、10-3梯度接种，放线菌采用10-3、10-4、10-5梯度接种，三次重复，接种后细菌放在37OC培养箱培养，真菌和放线菌放在28OC培养箱培养，培养2-3天进行计数，此过程在严格操作防止培养基污染。结果以每克干土所含微生物数量表示。2.3.2.4微生物菌落计数：土壤中的微生物经培养后，每一个活菌细胞可以在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，结果以每克干土所含数量表示16。其计算方法:每克干样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数10稀释倍数水分系数水分系数= 式中：W%含水率2.3.3土壤含水率的测定采用烘干法17测定土壤含水率。测定结果为:一年黄芩根际
31、土壤含水率为 17.69%，一年黄芩非根际土壤含水率为15.39%，三年黄芩根际土壤含水率为17.74%，三年黄芩非根际土壤含水率为15.61%。W=100% 式中： A铝盒重量（g）；B土样与铝盒重（g）；C干土与铝盒重（g）。 2.3.4微生物指数的计算 生物多样性18指数是描述生物类型数和均匀度的一个度量指标。它在一定程度上可反映生物群落中物种的丰富度及其各类型间的分布比例。本研究中土壤微生物菌群多样性指数和土壤微生物菌群的均匀度计算方法如下： 土壤微生物菌群多样性指数(香农威纳指数) HPi1nPi 土壤微生物菌群的均匀度E=H/1nS 式中，Pi=Ni/N为某群落中第i个类型的个体数
32、占总个体数的百分比，S为微生物类群数量。 3结果与分析3.1 不同种植年限对黄芩田土壤微生物数量影响 由表1可知，随着黄芩种植年限的增加，土壤中微生物组成和数量存在较大差异，微生物总数由大到小依次是3年根际土壤3年非根际土壤1年根际土壤1年非根际土壤。由此可见随着种植年限的增加，微生物总量呈增加趋势。且所有土壤微生物在总体数量上均以细菌为绝对多数，占其总量的99以上，放线菌次之，真菌最少。表1 黄芩不同种植年限土壤三大类群微生物状况种植年限细菌（107cfug-1）放线菌（104 cfug-1）真菌（103 cfug-1）微生物总量（107 cfug-1）1根际11.7752.6611.051
33、1.82非根际5.2035.206.075.24根际/非根际2.661.491.822.253根际88.3188.8968.7988.41非根际61.2787.327.1661.36根际/非根际1.441.019.601.443.2不同年限黄芩田细菌状况 由图1可见黄芩田土壤细菌数量随着黄芩种植年限的增加而明显增加，根际3年种植年限细菌数量达88.31107cfug-1，是1年根际的7.50倍；非根际3年种植年限细菌数量61.27107cfug-1，是1年非根际的11.78倍。且根际土壤细菌数量均高于同一种植年限的非根际土壤细菌数量，3年和1年种植年限根际土壤细菌数量分别是非根际的2.26倍和
34、1.44倍。 3.3不同年限黄芩田土放线菌状况由图2可见黄芩田土壤放线菌数量随着种植年限的增加也明显增加， 3年种植年限黄芩田根际放线菌数量为88.89104cfug-1，是1年种植年限根际放线菌数量的6.23倍；非根际3年种植年限放线菌数量为87.32104cfug-1，是1年种植年限非根际放线菌数量的2.48倍。1年种植年限根际放线菌数量是非根际的1.49倍, 3年种植年限根际放线菌数量是非根际的1.01倍，表明随着种植年限的增加,放线菌数量虽有增长趋势, 但同一种植年限根际与非根际放线菌数量逐渐不显著。3.4不同年限黄芩田真菌状况由图3可见黄芩田土壤真菌数量随着种植年限的增加，总体呈增加
35、的变化趋势， 3年种植年限黄芩田根际真菌数量为68.79103cfug-1，是1年种植年限根际真菌数量的1.69倍；3年种植年限非根际真菌数量为7.16103cfug-1，是1年种植年限非根际真菌数量的1.17倍。3年和1年种植年限根际真菌数量分别是非根际的9.60倍和1.82倍,表明随着种植年限的增加,真菌数量不仅有所增加,且根际真菌数量增长趋势明显高于非根际增长幅度。3.5 不同种植年限对黄芩田土壤微生物多样性指数影响土壤微生物群落结构和组成的多样性与均匀性是衡量生态系统稳定和健康的一个重要指标19，由表2可知，黄芩土壤中香农威纳指数和均匀度指数均为1年非根际土壤1年根际土壤3年非根际土壤
36、3年根际土壤，香农威纳指数指数和均匀度指数均在降低，从而微生物多样性和均匀度显著降低，土壤生态系统稳定性下降，抗干扰能力降低，说明了黄芩的种植影响了土壤微生物群落组成和生存分布状态，也可能会导致土壤微生物生态系统的不稳定性。 表2 不同种植年限黄芩土壤中生物多样性的变化种植年限香农-威纳指数（H）均匀度指数（E）1根际0.02920.0266非根际0.04240.03863根际0.00880.0080非根际0.01090.0099 4结论（1）从不同种植年限黄芩田土壤微生物组成来看，以细菌数量最多，放线菌次之，真菌最少，细菌在黄芩田土壤微生物组成中占绝对优势。无论细菌、真菌、放线菌，1年及3年
37、种植年限黄芩田根际土壤微生物数量明显高于非根际，但随着种植年限增加，放线菌根际与非根际数量差异逐渐缩小，几乎趋于一致，而真菌数量随种植年限的延长，根际与非根际差距加大，这可能是黄芩连作障碍与真菌持续积累有关。（2）从香农威纳指数和均匀度指数来看，黄芩种植年限延长可能会影响生态系统的稳定性，连作使微生物多样性和均匀度低，土壤生态系统稳定性下降，抗干扰能力降低，从而可能引起连作障碍的发生。（3）本实验仅做了不同种植年限黄芩土壤微生物数量的变化情况，是否由此引起病害及其产生机理等有待于进一步研究。参考文献1 魏东华，李林章，陈淑欣.不同土壤营养条件对黄芩苷含量的影响J.中国实验方剂学杂 志,2010
38、,16(12):56-58.2 郝慧荣，李振方，熊君.连作怀牛膝根际土壤微生物区系及酶活性的变化研究J.中国生态农业学报,2008,16(2):307-311.3 郑小惠，王刚云，文家富.影响商洛市中药材根结线虫病发生的因素与防治对策J.陕西农业科学,2010,56(4):107-108,118.4 郑军鲜，叶素芬，喻景权.蔬菜连作障碍产生原因及生物防治J.中国蔬菜,2004,(3):56-58.5 王明道，吴宗伟，原增艳.怀地黄连作对土壤微生物区系的影响J.河南农业大学学报，2008，42(5):532-538.6 高群，盂宪志，于洪飞连作障碍原因分析及防治途径研究J.山东农业科学,2006
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40、壤微生物的影响研究J.微生物学杂志,2005，25(2):27-30.13 王明道，吴宗伟，原增艳等.怀地黄连作对土壤微生物区系的影响J.河南农业大学学报.2008,42(5):532-538.14 张向东,张晓虎,翟丙年.商洛南五味子种植区土壤肥力特征J.西北农业学报,2008,17(6):329-333.15 常瑾,井金学,张海宽等.陕西黄芩茎枯病病原菌的鉴定J.西北林学院学报,2006，21(3)：81-82.16 沈萍，范秀荣，李广武.微生物学实验(第三版)M.北京:高等教育出版社,1999:92-94.1719 郭利,王学龙,陈永德,赵玉纲.烟草连作对烟田土壤微生物的影响J.湖北农业科学,2009,48(10):441003-441503.19董艳，董坤，郑毅等.种植年限和种植模式对设施土壤微生物区系和酶活性的影响J.农业环境科学学报,2009,28(3):527-532.致谢我的指导老师张向东副教授在整个实验过程和写论文的过程中,予以悉心指导和帮助，他在百忙的教学工作中挤出时间来来审查、修改我的论文，并且提出了宝贵的意见和建议，尤其是他循循善诱的教导和不拘一格思想给予我无尽的启迪，端正了我在今后学习和工作中的态度，在此谨表谢意。
