临床尿液分析质量控制.pptx

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1、临床尿液分析质量控制,1,主要内容,1、室内质控的三个阶段 2、尿液干化学分析质量控制 3、尿液有形成分分析质量控制 4、实验室认可的要求,2,一、分析前质量控制,分析前质量控制是临床实验室质量保证体系中最重要、最关键的环节之一。尿液分析绝大部分标本由患者自己留取，这就要由工作人员告知留取方法及注意事项，以保证高质量的标本。,3,样本采集手册,正确的尿液标本收集时间、方法、收集标本使用的容器和标本运送至实验室的时间、尿标本新鲜程度，有效的标本标记与识别、适宜的防腐剂或冷藏装置等。同时还应了解患者影响尿化学分析的进食及用药情况等。,4,1.患者准备,医护人员必须给患者交代清楚如某些药物、饮食、剧

2、烈运动等对检测结果的影响。按要求清洁采集部位，避免污染、使用合格容器、对女性患者应冲洗外阴后留取中段尿、月经期不做尿液检查等。对于男性患者则需避免前列腺液和精液污染，若做细菌培养，应冲洗外阴，并消毒尿道口，用无菌杯留取中段尿等。,5,2.标本采集与保存：自然排尿法导尿法穿刺法,6,晨尿：住院患者最好要求留取清晨第次尿，如果没留成，可用第次尿代替。第次尿留取时间一般在清晨起床后第次排尿。第次尿留取时间应在进食、服药或剧烈运动前。随机尿：此类标本容易获得，是尿常规检查最常用的方法，但受饮水、饮食、用药、情绪和收集时间等多种因素影响。仅适用于门诊、急诊患者的常规过筛试验，但在标本容器上应注明留取时间

3、，便于分析。,7,特殊尿液标本：空腹或餐后2h尿液标本对于糖尿病患者尿糖测定更为敏感，做尿糖检测时应留取空腹尿，否则应注明进食后留尿时间，其他特殊试验应按试验要求留取，如尿蛋白定量检测。计时尿标本：尿液有形成分定量计数，留尿时应先排尽尿液后再开始计算时间。,8,9,贴条码后仍有透明可查看样本外观区域,10,样本采集手册实例,可以有纸质版和电子版。两个版本必须同步发布，具有同等时效性。新的版本发布时，旧的版本必须收回。易于检索查阅。可以有发放给病患者的简易版，可以在卫生间张贴简易尿便标本留取指南，应该来自正式发布的采集手册中的一部分。,11,3、标本送检与保存：送检：标本留取后应立即送检，以免细

4、菌繁殖及有形成分破坏。留取到接收标本的时间不得超过h，留取尿量不得少于30ml，检验科收到标本后应签收，在送检单上及时注明收到时间并及时检测。容器:尿液要收集在清洁一次性带盖应容纳50ml以上尿液的容器内，容器上应贴有患者姓名、科室、床号、条形码及注明标本留取时间的标签。根据签收标本要求凡不合格标本一律拒收。,12,尿液保存:尿液化学物质和有形成分不稳定，排出后即发生化学和物理变化，如胆红素、尿胆原被氧化，抗坏血酸消失，细菌生长导致尿液成分的改变，尿素经细菌酵解生成氨，尿值升高，尿液有形成分破坏，葡萄糖被细菌降解，使病理性尿糖消失。因此，应提倡常规检查在排尿后尽快送检，最好不超过，如不能及时送

5、检或分析，必须采取保存措施。,13,冷藏：置冰箱，防止一般细菌生长，能维持一个较恒定的弱酸性 值，利于基本有形成分保存，若尿液中 为碱性，可加少许冰醋酸。甲苯或二甲苯：阻止细菌污染以延缓尿液化学成分的分解，常用于尿糖、丙酮、乙酰乙酸、尿蛋白等化学成分的保存。,14,4、存在的问题：,患者身份不明;送检标本与申请项目不相符，或者信息不全;尿标本收集不当或者容器错误;标本量少（最常见）;尿液标本污染及送检不及时;储存不当,加入不适合防腐剂。,15,ISO 15189：2012的要求,16,17,实验室环境：需独立的房间，需要安装在干燥、通风、洁净的位置，而且要远离热源。室内调节温度在20-30 左

6、右，并要保持室内清洁以防灰尘对实验结果的影响。应配有 UPS不间断电源系统，以防临时停电影响工作。,18,尿化学分析仪和试纸条：必须配套使用；试纸条应保持密封、防潮、避光、防酸碱、防氨、盐酸等挥发性气体和有机溶酶等；禁止手触及反应块或其他污染；宜在冰箱或按说明正确保存；必须在有效期内使用。,19,尿试剂带的管理,（1）尿试剂带要避免阳光直接照射，放在30以下，防潮、通风条件好处密封保存。（2）使用时取出必要数，并盖紧容器。取出而没有使用过的试剂带不要重复放回原试剂带瓶内，以免影响试验结果。（3）开封后的尿试剂带严禁冰箱存放，以防潮湿，不要放容易污染的场所。（4）试剂带的反应部分严禁用手接触，不

7、要使用变色的试剂带、过期的试剂带。（5）每瓶试剂带开封前用标准质控尿检测其敏感性和准确性，合格后方可使用。,20,仪器的维护：严格按照开关机程序对仪器进行管路冲洗和维护保养，关机前要用仪器配置的专用清洗液清洗机器，对仪器进行清洁。每天清洗废液瓶，及时清理废液条，保持机器表面和内部检测系统的清洁干燥。,21,离心机应该有校准验证记录,22,行业标准尿液分析仪试纸条YY/T 0478-2004：准确性重复性检出限分析特异性,23,仪器设备校准尿液分析仪校准规范：JJF 1129-2005 外观检查，空白、示值校准医用离心机：YY/T 0657-2008 转速；噪声、振幅、温升；制冷干化学尿液分析仪

8、：浊度、比重、反射率,24,必须使用水平制式的离心机,水平离心机,25,水平转子使细胞有效聚集于管底400G离心力可使颗粒最优化聚集离心5分钟保证过程优化10ml原尿量、0.2ml沉渣标准化，以保证检测结果一致！,26,离心转速和离心力换算法,离心机相对离心力（RCF）应在400g左右。离心机转速与相对离心力的换算公式为：g=11.18(rpm/1 000)2 R 或rpm=1 000 400/(11.18 半径)1/2（注：rpm为每分钟转数；R为离心半径，指从离心机轴中央到离心管底部的距离；g为相对离心力，即重力加速度(9.8 m/s2)）离心半径为20cm时，采用1338r/min(13

9、50r/min)离心半径为16cm时，采用1495r/min(1500r/min)离心半径为10cm时，采用1892r/min(1900r/min),27,尿液分析性能验证,28,29,依据行业标准尿液有形成分分析（数字成像自动识别YY/T 0996-2015：精密度符合率假阴性率携带污染率,30,2015年3月颁布,2016年1月实施,其中重复性和携带污染率是重点,检出限：对细胞的检出限为5个/l重复性（精密度）携带污染率：0.05%稳定性：开机8h内细胞计数(浓度200个/l)变异系数15%,31,单项结果与镜检的符合率：仪器至少应能自动识别以下项目，其单项结果与镜检的符合率应达到如下要求

10、假阴性率：应3%,32,还应该根据自己设备特点制定,线性范围和可报告范围（以参考方法为准，如显微镜计数法）复检规则（干化学法+显微镜法）,33,参考范围：确定与验证,应该按照所使用的仪器设备，制定自己适合的参考范围。没有条件的制定的单位，应该进行参考范围验证。取不同年龄和性别的正常人尿液样本，每组各20例进行验证，符合率应 80%。,34,不同的方法和仪器，参考值不同,35,36,应建立筛检规则,应该配合干化学和有形成分分析结果联合制定筛检规则。干化学法+流式尿液有形成分分析法+显微镜镜检法。干化学法+数字图像原理的仪器，可以先进行图片筛检和修正。前提是能够获取清晰、不重叠、形态特点突出的图片

11、。不能满足上述条件时，还应采取必要的显微镜检查/相差显微镜检查/染色法检查等技术手段进行复检和复查。,37,例：UF系列仪器应采用的筛检原则,干化学法+流式细胞分析法建立参考区间，建立筛检规则观察散点图和报警信息对可疑信病理信息进行分析，当报告管型阳性时应镜检确认并区分类别。报告结晶增加时也要坚定类别，并排除对RBC干扰情况。与干化学检查结果不符时，要镜检复核必要的备注,38,例：某实验室复检规则（摘录）,PRO=0.3g/L，或UFcast=1.3/ul,离心镜检。干化学BLD=25/ul，定量计数（女）=30/ul；定量计数（男）=15/ul，离心镜检，同时报告红细胞形态信息。干化学BLD

12、与UF所得结果明显不符，阴性与阳性互为矛盾，或有两倍以上差距时，镜检确认。干化学WBC与UF所得结果明显不符，阴性与阳性互为矛盾，或有两倍以上差距时，镜检确认。,39,出现不一致时，复检后，必要时修订结果,主要是阴阳性不符，或出现两级以上差距时：例如RBC干化学阴性，UF阳性时，先不离心样本，用计数板计数1ul标本内红细胞数量，并修改最终定量计数结果。干化学项目：如BLD按相应阶梯，25，80，200/ul修改一致。备注中说明情况。WBC干化学法阳性，UF阴性时，先不离心样本，用计数板计数1ul标本内细胞数量，并修改干化学分析的结果结果，如LEU可按相应的15，70，125,500/ul等阶梯

13、修改。备注中说明情况。RBC干化学法阳性，UF阴性时，补充单抗法潜血实验，在备注中说明结果。,40,41,42,5.3.1.5 设备故障后,设备故障指与分析相关的设备：如干化学分析仪、有形成分分析仪、离心机等。其性能应该恢复到故障之前的水平。可校准的项目，实施校准通过质控物进行检验与其他设备或方法的比对试验以前检验过的样本的再检验（样本应在适当的保存条件下保存后，再检验）所有的记录应予以保存，备查。,43,44,二、检测中的质量控制,分析中的质量控制由检验工作人员来完成，检验人员首先要有明确的责任心，其次这部分质量保证措施主要包括标准的操作规程，良好的检测系统，校准及室内质量控制、室间质量评价

14、等质量控制标准，科学的纠正措施。这是质量保证措施的关键环节。,45,在尿液分析仪定期校准的基础上，每天对仪器和试纸条按规范化质量控制程序进行，为确保测试结果的准确性，建议进行质量控制检测：每天开始测试时；更换一筒新的试纸条时；更换操作者时；检测结果有疑问时。,46,就室内质控而言，我们走过了不做质控偶尔质控天天质控但偷工减料实施完整的室内质控-这样一条弯曲的路！,47,质控品必须具备三个基本特性:,对所有检测的项目都适用;质控品所有成分都能稳定较长时间(至少 1 年);质控品应该与临床患者或正常人尿成分尽可能一致,即没有基质效应。此外,配制质控品最好使用无毒或微毒的试剂,不会造成环境污染,对使

15、用者也安全。,48,质量控制物的正确使用,（）严格按控制物说明书操作；（）冻干品的复溶要确保所用溶剂的质量；（）冻干品的复溶要确保溶剂的量要准确；（）冻干控制物复溶时应使内容物完全溶解；（）严格按使用说明书规定的方法保存；（）尿液干化学操作环境的室温通常为25；（）当试剂插入尿液后，反应块经尿液浸润发生反应，同时反应块上的各化学反应物也扩散入尿液，若次数过多，大于次，结果会受影响；（）质量控制品的检测必须与患者的标本一同测定，才能真实反映实验的情况。,49,质控判断标准,每次必须使用“正常”和“异常”两种浓度的质控物进行试验,一天内最好使用同一份质控标本;质控物的测定结果由正常变成异常结果或由

16、异常变为正常结果,均为失控;质控物某一膜块的测定结果在靶值“+”的为正常,否则为失控。,50,失控的处理,应检查质控物是否有效，是否正确储藏，是否污染及使用中是否恢复至室温。更换新的质控物再次测定。重测后结果在控，说明原质控物存在以上问题。如重测后结果仍不在控，应更换同一批号新的试纸条进行第3次进行测定，结果在控说明试纸条存在问题。结果还不在控，应更换另一批号新试纸进行第4次测定，如果检测结果仍超出质控范围，应对仪器进行检修或重新校正，必要时联系仪器厂商。,51,结果产生假阳性或假阴性可能原因分析,1.酸碱度：分析仪采用酸碱指示剂法。留尿后放置时间过长，使尿中的细菌繁殖，分解尿素产生氨使尿呈碱

17、性或尿中CO2自然扩散造成丢失，使pH值呈现假阳性结果。或操作时未严格按说明操作使试纸浸渍时间过长有使pH减低的趋势出现假阴性结果。,52,2.比密：采用多聚电解质离子解离法。需注意：尿液必须新鲜且不含强酸强碱等物质，其比密pH变化范围为pH 6.27.0，当pH7.0 时而出现结果偏低，应在测定结果的基础上增加0.005，作为由于碱性尿损失的补偿。当测定值的表达变化范围在1.0001.030，间 隔值较大（0.005），不能反应较小的比密变化，对于比密范围在 1.0001.004的新生儿尿不宜使用此法。尿液中蛋白或糖的浓度增加，将使比密结果增加，尿素10 g/L或pH6.5时致比密结果偏低。

18、,53,3.尿糖：是基于葡萄糖氧化酶的酶促反应，特异性较强。尿分析仪测定比班氏法具有更高的灵敏度，当葡萄糖含量为1.672.78 mmol/L时，尿液分析仪测定结果将出现弱阳性，而班氏法在8.33 mmol/L时才会出现弱阳性。尿液在低葡萄糖浓度（14 mmol/L）时，维生素C会干扰，使结果产生假阴性，而使班氏法产生假阳性。尿液中过氧化物，次氯酸盐、强氧化性清洁剂污染，高浓度的链霉素、青霉素等非糖还原物可使糖呈假阳性结果；尿液中含有L-多巴，大量水杨酸盐、氟化钠、维生素C超过500 mg/L，尿酮体超过0.4 g/L，尿比密过高或染菌陈旧尿，则尿糖呈现假阴性结果。,54,4.蛋白质：采用pH

19、指示剂蛋白质误差法。影响因素有：pH是影 响测定结果的主要原因之一；当尿液呈强碱性（pH9.0）超过测试纸的缓冲能力，使结果出现假阳性，当pH3.0时，会出现假阴性结果，电解质含量过少也可导致假阴性。灵敏度：主要对清蛋白敏感（70100 mg/L），而对球蛋白、黏蛋白，本周氏蛋白不敏感，对球蛋白的敏感度为清蛋白1/1001/50。因此，对于肾病患者，特别是在疾病发展过程中需系统观察尿蛋白的含量的病例，最好使用对清、球蛋白灵敏度一致的磺柳酸法。药物干扰：青霉素族药物存在可使测定产生假阴性。其他尿中含有生殖系统分泌物或较多细胞成分，可引起假阳性。,55,5.酮体：采用亚硝基铁氰化钠法。本法对酮体各

20、组成成分的灵敏度不一；乙酰乙酸为50100 mg/L，丙酮为400700 mg/L，与-羟丁酸不发生反应。另外，由于不同病因引起的酮症，酮体成分不一，同时患者不同病程，酮体成分也会发生变化。尿中含有过量的肌酐、肌酸、胱氨酰、安替比林、酚类或柳酸盐类药物、醛糖阻断剂、头孢类抗生素、左旋多巴可使结果呈假阳性。尿中含有异烟肼、酚磺肽可使结果出现假阴性。尿酮体中丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性，测定时应使用新鲜尿液标本。,56,6.亚硝酸盐：采用硝酸盐还原法，是细菌感染的指标。阳性结果产生取决于3个条件：尿中的致病菌须含有硝酸盐还原酶；体内有适量的硝酸盐存在；尿在膀胱内有足够的停留时间（4 h）且排除药物等

21、干扰因素，亚硝酸盐诊断泌尿系大肠埃希菌感染的阳性符合率为80%，但考虑到样本放置时间过久，尿液被亚硝酸盐或偶氮试剂污染，可呈假阳性结果，因此，对阳性结果的解释应慎重，同时尿液中尿胆原、维生素C、尿pH6，尿量过多都可造成假阴性，同时不能使硝酸盐还原成亚硝酸盐的细菌生长也可使结果产生假阴性。,57,7.白细胞：采用白细胞酶酯法。本法只对粒细胞敏感；尿中污染甲醛、高浓度胆红素尿或使用某些药物如呋喃妥因等时尿分析仪测定结果产生假阳性。当尿中含有维生素C，大剂量先锋霉素或，庆大霉素或尿中葡萄糖30 mg/L、蛋白5 g/L时，则结果产生假阴性。,58,8.隐血：尿液中含有肌红蛋白对热不稳定酶，氧化剂或

22、细菌、甲醛、碘 化物、普鲁卡因可使测定呈假阳性；尿中大量维生素C（100 mg/L）存在或还原性的谷胱甘肽，硫代硫酸钠可竞争性的抑制反应而产生假阴性。,59,分析过程中的致错因素:,未确认合格尿标本;仪器校准有误;试剂(试带)变质过期;检验技术不当;存在干扰物质;质量管理资料误判。,60,三、分析后质量控制,对检验报告规范化管理的基本要求是完整、正确、有效、及时。主要体现在检验报告的审核、发放，除了注意检验报告的文字书写或计算机录入有无错误外，还应检测结果之间的关联性，即尿液化学分析结果与显微镜镜检结果的相互关系。,61,如出现以下情况：化学分析血红蛋白阴性，而镜检有多量红细胞；化学分析血红蛋

23、白强阳性，而镜检不见或仅见少量红细胞；化学分析白细胞阴性，而镜检有多量白细胞；化学分析白细胞阳性，而镜检不见或仅见少量白细胞；化学分析亚硝酸盐阳性，而尿蛋白质和白细胞均为阴性；尿镜检红细胞、白细胞和管型增多，而化学分析蛋白质阴性等。这些均被视为可疑结果，应进一步查明原因。,62,从尿液分析仪各个测试项目的原理和影响因素来具体分析。首先尿液标本是否合格，是否受到污染或放置时间太长，是否摄食了含硝酸盐丰富的食物，是否服用了影响分析结果的药物，还有维生素对检测结果的影响等，检查尿液分析仪的工作状态是否正常，保养工作是否到位，多联试纸条及校准条和质量控制物有无失效或受到污染，实验室的温度湿度是否适宜，

24、必要时重新留取标本进行重新检测，并且再用相应的校准条和质量控制物判断有无假阳性或假阴性，发现问题及时采取纠正措施。,63,只有在各方面正常的情况下，才能决定该批检验结果报告发出。检验报告发出前，除操作人员签字外，还应有另一高年资、有经验的检验人员核查无误后签名方可发出。审核全部检测结果，了解病人情况；了解上一次检查结果及历史记录；结合其他有关检查结果进行分析，排除产生假阳性，假阴性的原因。确认无误后签名，发出报告。,64,3.1 原始资料（包括数据）的记录与保存 做好阳性率、阴性率统计分析。及时对反馈信息进行处理。3.2 做好仪器使用和保养记录。3.3 尿液分析室间质评 所有报告项目必须参加室

25、间质评，如没有相关质评项目，应与其他实验室进行比对和确认。3.4 尿液分析的室内质量控制 尿液干化学试纸条的质量管理,购买有国家相关部门推荐的产品,每一批试纸条在使用前，应该做对照试验,试纸条应该按照规定要求进行保存尿液分析的室内质量控制。,65,EQA目前采用较多的是以CLIA88允许总误差作为评价限，利用实验室间的比对进行实验室的能力验证。具体要求：每次活动每一分析项目未能达到至少80%可接受成绩，则称为本次活动该分析项目不满意，每次EQA所有评价项目未能达到80%得分称为不满意的 成绩。临床尿液干化学室间质评结果的允许误差范围为，且阴性不能检测为阳性，而阳性不能检测为阴性，在此前提下，以

26、能力验证大于 80%为检测合格。在尿液EQA 中虽然各分组结果均可能合格，但某组的结果并不能代表检测物的真实浓度。,66,质量保证,室内质控,检测系统准确性质量分析能力验证,检测系统稳定性质量保证基本保障,室内质控的另一形式实验室自发行为,室间质评,室间比对,67,分析后的致错因素:,未确认患者身份;报告单书写笔迹不清;结果打印不佳(褪色);遗漏发送报告;参考范围不确定;无法鉴定参考物质,68,69,四、尿液形态学及尿沉渣质控,开展尿液有形成分的室内质量控制，首先要有能与标准镜检法溯源且稳定可靠的质控品。日本Sysmex公司为 系列仪器配套使用质控品是由不同直径大小的粒子组成；国内长春迪瑞公司

27、使用固定人红细胞制成的质控品适用于尿干化学的检测；美国伯乐公司的尿干化学质控品中的有形成分也只含有红细胞和白细胞。,70,Hycor Biomedical 公司的尿液质控品包含了所有干化学的试验、比重和有形成分的内容，特别是含有红细胞、白细胞、管型和结晶等成分，并按异常的程度不同分 为、个浓度水平，可用干化学法进行尿10项的检查，并同时进行有形成分观察，但国内尚无此类产品提供。,71,爱威公司有形成分质控物,为解决定量计数考评问题，可配制一定浓度的显微镜细胞计数用的参考样品，进行间接考核。在这方面一些医院的探索非常值得借鉴，例如按常规的方法收集不同肾脏疾病患者的尿液，离心取沉淀。用中性甲醛溶液

28、按适当的比例进行固定。将已固定的尿液有形成分混匀后，加盖标记后放入冰箱保存。在使用时可以用生理盐水或健康者的尿液将RBC、WBC、上皮细胞、管型分别配制成不同的浓度。,72,可用此自制的质控品定期对工作人员进行考核，以此作为形态学室内质控的一部分，由两名经验丰富的上级检验师以双盲法做定量计数的检测，取均值作为参考值，被考核人员操作规范，考核计数值在参考值上下的范围内为合格。在考核定量计数的同时也可以考核尿沉渣的形态学，随机取10个以上的视野，以有丰富经验的上级检验师的结果作为参考，被考核人员的细胞形态识别率应在90%以上。,73,应定期开展尿沉渣专业培训与考核，使尿沉渣的识别达到熟练化，不漏掉

29、病理有形成分。应建立实验室本身的尿液有形成分形态特征标准和形态学标准化图谱，图片的来源可以为检验界专家编辑的书籍，也可以采用卫生部室间质评的图片。但图片的效果与显微镜下真实的视野还略有不同，要多看显微镜以积累经验。,74,在完善尿液有形成分显微镜检查室内质控的同时，也需要参加卫生部临检中心与国内各级临检中心的室间质评活动，有条件的医院还可以参加国外机构的室间质评或考核，这不但可以提高自身形态学认识水平，积累资料，还能够对参加质评人员的技术水平有一个客观的评价。,75,尿液有形成分的自动化分析,76,开展尿沉渣检查的好处：1、提高尿液异常病人的检出率，减少漏诊；2、提供标准化定量检测结果，诊疗有

30、量化依据；3、提供更多临床诊断信息，对诊断有帮助。,77,尿有形成分主要检验方法：1、未离心人工显微镜镜检2、离心后人工显微镜镜检3、改良的人工镜检系统-半自动4、流式电信号法结合核酸荧光染色技术5、流式图像分析技术6、简单的图像技术结合计算机自动识别7、机器视觉自动镜检技术,78,1、尿液直接涂片人工显微镜镜检,将未经处理的尿液涂片后，置显微镜下观察进行定性或半定量读取结果。优点：简便、反映的是尿液中的实际情况。属于确证检验。局限性：不定量、难标准化和规范化，再加上人工观察的视野非常有限，结果受操作者技术水平和主观因素影响，因而具有一定程度的不确定性。,79,2、离心后人工镜检：,将尿液将尿

31、液离心后取沉渣充入计数板进行定量计数。优点：提高检出率，可定量、可实现标准化、规范化 局限性：一方面，离心过程使细胞破坏与丢失，细胞下降不完全，造成结果误差环节多，另一方面，操作繁杂、效率低，劳动强度大，结果受操作者技术水平和主观因素影响。,80,将显微镜下图像通过摄像机或数码相机传输到计算机显示屏上再由人工进行分类计数和判别。优点：将镜下图像在显示屏上显示，方便多人会诊。摄像图谱可以存储备查，通过计算机记录，进行数据处理和图像存贮、换算结果发图文报告。局限性：离心人工直接镜检的缺点未得到任何解决。部分仪器较直接镜检效率更低，不适于临床常规大批量标本检验，并且管道易堵塞,清洗困难，产品差异大,

32、方法和结果不统一。,3、改良的人工镜检系统-半自动,81,采用了与血球分析仪相同的流式细胞技术，荧光染色和激光散射检测原理来进行尿液中有形成份检测。这是Sysmex UF系列自动流式尿有形成分自动分析仪采用的技术。局限性：（1）非形态学检查，无法实时查看各有形成份形态.（2）仪器成本高，影响成本回收。,4、半导体激光流式细胞技术结合核算荧光染色,82,5.流式图像分析法 优点：自动化程度高，操作简便，可以采集部分成分图像并显示，一定程度上弥补了流式细胞计数法的缺陷。缺点：仅一个固定焦距的摄像镜头难以保证流动的细胞都通过焦点，未通过焦点的目标无法采集到清晰图像，所以不是对所有有形成分进行图像识别

33、分析，而是局限于对几种目标的部分图像进行比对分析；报告中显示的是图库中存储的单个有形成分标准图像，非标本中有形成分的实际图像，人工复核无意义，大多数医院对阳性标本离心镜检后修改流式计数结果后发出报告。检测结果异常时必须用人工镜检方法进行重新检测加以确认。,83,6、简单的图像技术结合计算机自动识别,优势：阴性样本检测速度较快，原尿直接上机检测，不需要离心、染色，成本低廉。局限性：自动化程度低，阳性样本速度慢；图像采集少，检出率无保障；多采用简单的图像比对方法对目标进行识别，可自动识别的种类非常有限，粘液丝等基本检测不到；分类与计数准确度差，基本依赖人工判读与修改才可出报告。,84,7、机器视觉

34、自动镜检技术 高低倍（40X，10X）镜头自动转换，对大小目标分级识别优点：实现了标准镜检流程的自动化，快速、高效、无污染，解决了人工镜检工作量大、耗时，受人为因素影响等问题；有实景图像保存，可以追溯、共享和循证；报告可直接审核和修改，阳性标本不需复检；大样本量（ISLH规定检测量的6倍）实景检测，结果更客观、准确。局限性：仪器成本较高。,85,机器视觉镜检形态学分析自动化,根据红细胞形态信息：大小、形状、色度、纹理1大小数据：半（直）径、面积、2形状数据：规则、异形、多形3色度、纹理数据：,86,利用机器视觉技术粪便分析自动化,目前利用机器视觉技术开发的EAV-562全自动粪便分析仪进行粪便

35、检验，具有以下优势：1、粪便标本前处理封闭、自动，包括采样后样本的稀释、成分捕捞、混匀搅拌、自动涂片、，自动充一次性计数池。2、自动镜检、摄像（包括免疫化学反应）准确分析获得图像得出有价值的结论。各种有形的病理成分清晰显示并保留供检验者观察、决定及诊断。,87,3、粪便提取液能借助免疫胶体金的方法，完成各种抗原成分的检出。如粪便隐血试验，轮状病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、螺旋幽门杆菌、癌胚抗原、钙卫蛋白等更多项目。4、将人工检验方法发展为自动化仪器分析，极大地丰富了粪便检验的内涵和应用，封闭的自动化检验减低了操作人员的劳动强度，改善了工作环境，保证了实验室生物安全。,88,尿沉渣检验质量控制与标准

36、化,现代尿液分析除理学、化学检验外，最重要的是对尿中有形成分进行显微镜检查。但是对于理学检验结果正常、中性粒细胞酯酶、亚硝酸盐试带法结果正常的尿液，其显微镜检查的价值已被提出了质疑。如有学者提出，试带法结果若符合下列条件就可不做显微镜检查：白细胞阴性，红细胞阴性，蛋白质阴性，亚硝酸盐阴性。,89,美国临床检验标准委员会（NCCLS）规定凡有下述情况的应进行显微镜检查：医生提出镜检要求的;检验科规定的患者（如泌尿科、肾病科患者、糖尿病患者、应用免疫抑制剂患者及妊娠妇女）;任何一项理学、化学检验结果异常的，这一条和上述国内的观点不同，表明理学或干化学试带检查仅是一种普查试验，适用于正常人群的筛选，

37、而疾病患者尿液一旦有颜色、透明度、气味或化学试验结果改变，均应进行显微镜检查。,90,必要时,LIS未提示,LIS提示,上机检测,触发规则,未触发规则,专家推荐的尿液有形成分仪器检验流程,直接报告,人工镜检,筛选规则,离心、沉渣,12ml尿液,识别规则,LIS系统,人工审核,修改报告,人工镜检,离心、沉渣,上机检测,检验报告,检验报告,显微镜检查和报告的内容,细胞：红细胞、白细胞、吞噬细胞、上皮细胞（肾小管上皮细胞、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞）、异形细胞等。管型：透明管型、细胞管型、颗粒管型、蜡样管型、脂肪管型、混合管型、宽幅管型等。结晶：磷酸盐、草酸钙、尿酸盐结晶、病理性结晶和药物结晶等。其

38、他：细菌、寄生虫（或卵）、真菌、精子、粘液及临床医生特殊要求的其他成分。,92,1、尿沉渣检查标准化的建议,卫生部临检中心,中华医学会检验学会血液学与体液学检验专家委员会(2002年1月28-2月1日，广州)全国临床检验尿液检查标准化方案1、建立依据：JCCLS、NCCLS、ECCLS2、报告标准化：规定尿沉渣结果必须报 xxxx/ul 3、检测时间：2小时内完成检验。4、检查内容：RBC、WBC,管型,结晶,细菌,寄生虫（或虫卵）、真菌、精子、粘液等 5、尿沉渣检查应建立质量保证体系,93,2、尿沉渣检验标准化,（1）材料与仪器的标准化要求：标本容器：应干净、防漏，并由透明且不与尿液成分发生

39、反应的惰性材料制成，容器及其密封装置不带干扰物质。收集容器体积大于50mL，具有直径大于4.0cm的圆形开口和较宽的底部。病人的姓名、编码、标本收集的时间等标签应贴在容器上，不可贴在其盖上。标记：尿液分析的容器、试管、玻片必须能进行标记，便于病人的识别，材料应保持干净，不能附有微粒，减少尿液分析过程的干扰。离心管：干净、透明，便于尿液外观检查。体积刻度精确到0.1mL；其体积为1215mL，以防止在离心时尿液溢出。试管口密封装置，防止试管液体溅出，形成气溶胶。试管的底部为锥形或缩窄，便于浓缩沉渣。离心时机内温度应在1525。离心机相对离心力可稳定在400g，并定期对离心机的相对离心力进行校正。

40、,94,（2）操作规范：取尿液10mL离心（标本不足10mL报告时应注明），相对离心力（RCF）400g，离心5min。手持离心管4590弃除上层尿液，保留0.2mL尿沉渣。轻轻混匀后，吸取1520L注入到特制的计数区内，计数1L区域内的白细胞、红细胞、管型数；或取1滴（大约50L）置载玻片上，用18mm18mm或22mm22mm的盖玻片覆盖后镜检。防止产生气泡。低倍视野（1010）下观察尿沉渣分布的情况，再转高倍视野（1040）仔细观察细胞，细胞应观察10个高倍视野，管型应在低倍镜下观察20个视野，分别记录每个视野的细胞和管型数，计算平均值报告。定量计数板法以/L方式报告。,95,3、尿沉渣

41、显微镜检查应引起注意的问题,（1）标本问题 尿沉渣镜检通常推荐采用晨尿，近年来，有的学者提出采用晨间第二次尿液，即留取早上8点至9点钟尿液，避免因标本室温存放时间过长、细菌生长、蛋白分解、氨升高而使细胞、管型等有形成分破坏。,96,（2）染色问题 有的推荐采用活体染色，如Sternheimer-Malbin 染色（斯-马二氏染剂）、0.5%甲苯胺蓝染色有助于细胞和管型的鉴别。对于尿中脂肪和结晶的鉴别，推荐采用偏振光显微镜，亦可用特殊染色，如脂肪、卵圆脂肪小体的油红O、苏丹染色，细菌的革兰氏染色，嗜酸性粒细胞的Hansel染色、Wright、Giemsa染色、巴氏染色，含铁血黄素颗粒的普鲁士蓝染

42、色等。有的认为尿沉渣不必染色，因为有些染色会引起溶血，或因大量染液而稀释标本。,97,（3）使用标准化尿沉渣检查器材的问题 目前，推荐采用商品化沉渣检查器材的呼声越来越高，原因是这些装置具有检查尿量、离心力、离心时间、留取沉渣量、检查量、报告单位等统一的特性。可保证检查结果的精密度、准确度良好。,98,（4）显微镜检查和结果报告问题 有的推荐显微镜检查应在较弱光线下进行，这样比较容易观察管型（如透明管型）和异形红细胞，当发现可疑成分时要由高级检验员复核。所有的显微镜检验结果必须和理学、化学检验结果符合，反之亦然。若存在不一致的结果，应在最终报告之前解决这类问题。,99,（5）室内质量控制问题

43、尿沉渣中有形成分质量控制是一个难点。目前，国外已有厂商生产了用于尿沉渣和化学试带检查的质控物，但价格昂贵。欧州的方法是，除每日用质控物观察有形成分外，还定期开展沉渣的形态学培训班，并由有经验技术人员组织定期考核，国内开展这方面工作的单位相对较少。,100,小 结:,尿液显微镜检查的质量控制是一个难点，目前缺乏标准化与规范化的程序，而显微镜检查又是尿液有形成分检查的“金标准”，所以需要探讨合理的流程与方法。以上所述只是尿液显微镜检查质量控制流程中分析中的因素，一个完整的质量控制流程包括分析前、分析中与分析后的质量控制，尤其是分析前因素中留取合格尿标本是质量控制的一个关键因素。现在大多数医院都采用

44、自动化的检测设备加上显微镜的复检，最后得出一份完整的尿液分析检验报告，所以质量控制流程也包括自动化检测设备的质量控制，应该统筹考虑，建立适合本实验室实际情况的质量控制流程。,101,什么是尿液分析？,尿常规Urine Routing尿液检验Urinalysis,102,某医院的尿液化验报告样式,103,报告单样式,104,ISO 15189质量保证,105,干化学法质控图-GLU,106,干化学法质控图-pH,107,尿有形成分质控图-RBC,108,尿有形成分质控图-RBC，WBC、Cast，EC,109,5.6.3.1 室间质评,必须参加一种室间质评活动，特别应包含干化学和形态学内容。成绩

45、合格。CAP有尿液有形成分的室间质评图片发放卫生部临检中心有干化学测定和尿液有形成分图片考核的室间质量评价内容国内一些省市均开展了尿液干化学室间质评工作，部分省市开展有形态学质评活动。,110,没有开展室间质评的项目,111,关于比对的一些观点解读,原理不同的仪器都应该可以与显微镜法比对,112,讨 论：,比对应该适当的进行，不可以在同一医院不同实验室内出现完全不同的实验结果。使用不同的检查系统，应该有不同的参考区间。应遵循按照不同的参考区间进行比对，其原则不是完全的数量之间的一致，而是大方向上的一致。不同原理的设备，阴性结果应该一致，阳性结果应该一致。其一致性应80%。如显微镜法与仪器法之间

46、，流式尿液有形成分分析仪与影像尿液有形成分分析仪之间；不同操作者之间，可以考虑这个原则。,113,实际工作中，大家都会在报告单上打印：“检查结果与送检标本相对应”、“此检验结果仅对所检测的样本负责”。这是什么意思呢？原来的问题因此而不存在了吗？这句话在法律上，会被认可吗？我们的责任因此而消失了吗？,114,检验结果与临床不一致的原因试分析如下：实验室假性结果、错误结果。标本不是稳定体系。离体后某指标在检测前已经 出现较大变化。临床对疾病本身的误诊误判。实验室结果为真，但临床理解、应用这个结果出了错误。临床时序演变，此时结果与彼时不相符。时间节点有时候临床把握不好，这在会诊中比较常见。甚至把报告时间误作标本采集时间。,115,临床位点不同，此处结果与彼处不相符。临床表现演变之中，最终结局尚无定论。此时对检验结果评价为时过早。临床复杂，而实验室结果非常具体-细节与整体不会完全相符。临床复杂，有被掩盖的因素存在。这个因素导致检验结果与已经明了的因素不符。多种疾病共存，检验结果受多方面影响。影响最大者，不一定是表现最明显者。.,116,质量控制是一个系统性的工程，只有执行正确的准备，严格采样，保持良好的仪器性能，规范操作，合理使用质控物，正确判断结果及审核，发出的报告单才更加可靠、准确。,117,谢谢关注！,118,