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1、1.熟悉哺乳动物离体器官灌流的一种方法；2.观察不同浓度乙酰胆碱对家兔离体肠平滑肌的作 作用及阿托品对乙酰胆碱的拮抗作用；3.熟悉研究药物量效关系的实验方法；4.理解概念PD2和PA2,【实验目的】,【实验原理】,家兔小肠平滑肌上存在、M受体，ACh通过激动肠管平滑肌上的M受体引起平滑肌收缩，在一定的剂量范围内，其收缩强度呈剂量依赖性。阿托品作为M受体阻断剂，可竞争地拮抗ACh对M受体的激动作用。,PA2和PD2,PD2（亲和力指数）是指药物与受体复合物的解离常数KD的负对数，其值与亲和力成正比。2、PA2（拮抗指数）当有一定浓度的拮抗药存在时，激动剂增加2倍时才能达到原来效应，此时拮抗药的负
2、对数即拮抗参数。PA2的值越大说明拮抗剂的作用越强。,【实验材料】,实验对象：家兔，体重2.53.0Kg，实验前12h禁食不禁水。实验器材：超级恒温器、恒温浴管、BL-420生物机能实验系统、温度计、烧杯、张力换能器、注射器(1.0ml)2支、注射针头、手术器械等。实验药品：台氏液、含阿托品台氏液、不同浓度（3101、3103、3105、3107）mol/L氯化乙酰胆碱,实验步骤及观察项目,启动并进入BL-420系统，进行软件操作安装实验装置标本制备 连接标本药物对平滑肌运动的影响结果处理,【实验步骤】,1、调试BL-420生物机能实验系统，使其进入肌张力测定状态.打开计算机中的BL-420生
3、物机能实验系统。在主菜单上选择：输入信号-1通道-张力，双击页面进入肌张力记录状态。调节界面右侧参数区参数：增益效应（一般50）、滤波（一般20Hz）、T（一般为DC）、速度（一般为5）。,根据换能器所连通道选择,泵液按钮,2、调节仪器并制备离体肠标本,调节仪器：将超级恒温水浴温度调至380.5，向麦氏浴管中加30ml台氏液，通入氧气(12个气泡秒)。制备离体肠标本：用木锤击家兔头后部使其猝死，立即剖开腹部，轻轻剪取整个空肠及回肠上半段，迅速置于冰冷台氏液中，用台氏液将肠内容物冲洗干净，将肠管剪成23cm数小段置于台氏液中备用。,轻取一段兔离体肠标本，一端连于L型管的小钩上，另一端用蛙心夹（或
4、小弯钩）与张力换能器相连，稳定10min，鼠标单击主菜单“开始“按钮，描记一段离体肠平滑肌正常收缩曲线。,3、连接标本,1）从低浓度开始，依次向浴管内加入各浓度的乙酰胆碱0.1ml，同时选择“添加特殊标记”命令或通用标记命令，记录给药后的平滑肌收缩曲线，每次加入乙酰胆碱，待离体肠平滑肌收缩幅度达到最大后，用台氏液冲洗三次，使肠管恢复到给药前状态，然后再加入下一个浓度的乙酰胆碱，每次冲洗时一定选择“暂停”命令按钮，以减少对张力传感器的刺激。,4、Ach量效关系曲线的描绘及阿托品对Ach竞争性拮抗作用的观察,2）上述离体肠标本经冲洗恢复正常后，再用含有阿托品台氏液冲洗，然后以含有阿托品的台氏液作为
5、营养液重复步骤 1）。3）记录结束后，选择“停止”命令，以文件形式保存实验结果。,求出Di和Ei：计算Di均以10-6mol/L为单位，效应E以克为单位。选择“数据处理”菜单，选择“数据处理”菜单中的“计算PA2、PD2”子菜单，即可得到PD2和PA2及相应曲线。选择“计算PD2”计算类型后，分别输入已计算好的无DH数据 中相应Di值和Ei值，然后点击“计算结果”；再点击“量效曲线”即得PD2值和其相应曲线。选择“计算PA2”计算类型后；分别输入已计算好的无DH数据和加DH数据中相应的Di值和Ei值，然后点击“计算结果”；再点击“量效曲线”即得PA2值和其相应曲线。,5、数据处理,【结果】,打印量效关系曲线,计算pD2、pA2,在加药前，必须先准备好更换用的38oC台氏液。每次加药出现效果后，必须立即更换浴管内的台氏液，待肠管恢复正常 活动后再观察下一项目。随时检查恒温装置，确保水浴管内温度控制在381。离体肠管时，标本及其张力传感器的连线不要触及浴管及通气管管壁，而且标本与张力传器的连线要垂直，不要过紧，也不要过松。给药时要将药液直接滴于液面上，不要滴在线及管壁上，而且每次加药的方式要保持一致。实验中尽量不要按“停止”命令按钮，以免丢失实验数据。洗浴管时一定选择“暂停”命令按钮，以减少对张力传感器的影响。,【注意事项】,
