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1、2003届硕士研究生毕业论文：地塞米松和维甲酸缓释系统预防增生性玻璃体视网膜病变的实验研究地塞米松和维甲酸缓释系统预防增生性玻璃体视网膜病变的实验研究山东省眼科研究所研究生 原公强导 师 董晓光教授【摘要】 目的 研究地塞米松和维甲酸缓释系统预防增生性玻璃体视网膜病变的有效性、安全性和玻璃体腔内的药物浓度变化。 方法 1. 取新西兰白兔皮肤瘢痕组织进行成纤维细胞原代及传代培养，采用中轴区玻璃体切除联合成纤维细胞玻璃体腔内注射构建兔眼PVR的动物模型，随机分为5组：A组为空白对照组，B组为空白DDS植入组，C组为DexDDS植入组，D组为RADDS植入组，E组为DexDDS和RADDS联合植入组
2、。术后1、2、3、5天及1、2、4、6、8周，观察术眼前节炎症反应、后节反应及眼压变化。 2. 实验兔眼中轴区玻璃体切除，随机分为2组：F组为DexDDS 本课题受青岛市科技局资助，资助号：2001KNSE2植入组，G组为RADDS植入组，术后1、2、3、5天及1、2、4、6、8周，观察术眼前、后节炎症反应及眼压变化；术后4周和8周各随机选取6只，进行双眼暗适应ERG检查，与术前比较，观察视网膜功能变化；术后8周行视网膜及肝脏、肾脏的组织病理学检查。 3. C、D、E组动物术后1周和8周，以及F、G组动物术后1、2、4、6、8周各随机选取4只，抽取玻璃体腔液，高效液相色谱分析法检测Dex和RA
3、的药物浓度。 结果 1. 术后AE组术眼前节炎症反应分级：A、B组相近，等级最高，D、C、E组依次降低，E组与前4组之间在各个观察点比较差异皆有显著性意义；术后AE组术眼后节反应分级：A、B组相近，等级最高，C、D、E组依次降低，术后发生II级后节反应天数的中位数分别为3d、3d、3d、7d、56d，A、B、C三组之间比较差异无显著性意义，其余各组之间比较差异皆有显著性意义。2. F、G组术后前、后节炎症反应轻微，眼压无明显改变；术前及术后各个观察点双眼暗适应ERG b波波幅比值差异无显著性意义；术后8周视网膜及肝脏、肾脏的组织病理学检查未见毒性反应。 3. DexDDS在植入后1周即达到较高
4、的玻璃体腔药物浓度，持续至6周，其后降低；RADDS在植入后2周内玻璃体腔药物浓度浓度较低，其后明显升高，于6周达到高峰，持续到8周以上。 结论 地塞米松和维甲酸缓释系统玻璃体腔内植入安全，药物浓度适宜。地塞米松缓释系统可以明显的抑制眼内的炎症反应，但并不能有效抑制PVR；维甲酸缓释系统可以明显的延缓PVR；地塞米松和维甲酸缓释系统联合应用，可以有效的抑制PVR。【关键词】 地塞米松；维甲酸；药物缓释系统；增生性玻璃体视网膜病变Antiproliferative Effect of Sustained Drug Delivery System of Dexamethasone and Reti
5、noic Acid in an Animal Model of Proliferative Vitreoretinopathy Shandong Eye Institute & HospitalPostgraduate: Yuan Gongqiang Tutor: Professor Dong Xiaoguang【Abstract】 Objective To investigate the antiproliferative effect，safety and drug concentration of the Dexamethasone Drug Deliverary System (Dex
6、DDS) and Retinoic Acid Drug Delivery System (RADDS) in an experimental animal model. Methods 1. The PVR animal models were made by central vitrectomy with homologous fibroblasts injected in New Zealand albino rabbits, which were divided into 5 groups at random: Group A is the control group; In group
7、 B, C, D and E, blank DDS, DexDDS, RADDS and both DexDDS and RADDS were implanted into the vitreous cavities respectively after vitrectomy. Each group was observed 8 weeks postoperatively, registering the anterior chamber flare and the development of the proliferative vitreoretinopathy (PVR). 2. The
8、 animal models were divided into 2 groups at random, which were undergone central vitrectomy and DexDDS and RADDS were implanted into vitreous cavities in group F and G respectively. Each group was observed 8 weeks postoperatively, registering the inflammation of anterior and posterior segments and
9、IOP; 6 rabbits from each group were undergone scotopic ERG at 4 and 8 weeks postoperatively; the retina, liver and kidney toxicity was evaluated by histopathological examinstion. 3. 4 rabbits from group C, D, E at 1 and 8 weeks postoperatively, and 4 rabbits from group F and G at 1, 2, 4, 6 and 8 we
10、eks postoperatively were undergone inspiration of 0.3ml vitreous cavity fluid, to measure the concentration of the dexamethasone and retinoic acid by HPLC. Results 1. The degree of anterior chamber inflammation: group A, Bgroup DgroupCgroup E; the development of PVR: group A, Bgroup Dgroup Cgroup E.
11、 2. The inflammation of anterior and posterior segments in group F and G were mild, and the IOP were stable; the differences of the ratio of the ERG b wave amplitude between bilateral eyes preoperatively, 4 and 8 weeks postoperatively were not significant statistically; No retina, liver and kidney t
12、oxicity was found in the histopathyology examination. 3. The concentration of dexamethasone in vitreous cavities elevated rapidly in the first week and lasted to 6 weeks postoperatively; the concentration of retinoic acid in vitreous cavities were lower before 2 weeks, and elevated to the peak conce
13、ntration at 6 weeks and at least lasted to 8 weeks postoperatively. Conclusions DexDDS and RADDS were safety in vitreous cavity and the drug concentration in vitreous cavities was suitable and stable. DexDDS could inhibit the inflammation postoperatively; RADDS could postpone the development of PVR;
14、 both DexDDS and RADDS implanted in association could inhibit PVR effectively. 【Key words】 Dexamethasone；Retinoic Acid；Drug Delivery System；Proliferative Vitreoretinopathy前 言增生性玻璃体视网膜病变（Proliferative Vitreoretino- pathy, PVR）是指由孔源性视网膜脱离及穿通性眼外伤所引起的增生性病变，其实质是眼组织对于创伤产生的超强的修复作用。目前公认增生性玻璃体视网膜病变是一个细胞介导的病理
15、过程，视网膜色素上皮细胞和胶质细胞离开了原来的正常位置，在多种细胞因子的共同作用下，迁移到玻璃体腔及视网膜的前、后表面，形成具有收缩力的细胞性膜，膜的收缩使得其所附着的组织扭曲变形，发生在临床上可见的视网膜血管扭曲、视网膜表面膜形成、视网膜下条索，进而形成视网膜全层固定皱褶，严重时形成漏斗状视网膜脱离。增生性玻璃体视网膜病变中增生膜的主要细胞成分是视网膜色素上皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞，其中以视网膜色素上皮细胞的作用最为重要，视网膜色素上皮细胞广泛参与PVR形成与发展的整个过程。PVR的治疗主要有手术和药物两种手段。目前PVR的治疗方法主要以玻璃体手术为主，手术中通过剥除增生膜，松解牵拉紧张的
16、视网膜，使之复位，然后在眼内填充长效气体或硅油。手术的成功率在4580左右1。玻璃体手术并不能防止增生性病变的进一步发展，而且手术刺激会促进PVR的进一步发展2，只有合理的应用抗增生药物，才能真正防止PVR 的发生发展。近年来许多学者致力于此类药物的研究，如糖皮质激素3、氟尿嘧啶4、柔红霉素5等，取得了一些成果。但是这类药物全身应用副作用大，费用高，而且由于血眼屏障的存在，难以达到有效的眼内药物浓度；尤其对于眼后节疾病，点眼等常见的局部用药方法亦难以达到玻璃体视网膜局部有效的药物浓度。因此，改变药物的给药途径和剂型，以达到并在治疗期间维持眼内有效的药物浓度是近年来眼科学者研究的热点。眼内缓释药
17、物的研制和发展，为PVR等难治性玻璃体视网膜疾病的治疗开辟了一条崭新的途径。本研究采用乳酸与羟基乙酸的共聚物聚乳糖酸（polylactioglycolic acid, PLGA）作为药物载体，观察地塞米松药物缓释系统、维甲酸药物缓释系统及两者联合应用对兔眼实验性PVR的预防作用，观察这两种药物缓释系统玻璃体腔植入的安全性和玻璃体腔内的药物浓度变化。材料与方法一、实验材料1.实验动物健康成年新西兰白兔61只（购自山东鲁抗医药集团有限公司），体重22.5kg，雌雄不限，山东省眼科研究所动物实验室饲养。实验动物符合ARVO有关用于研究目的动物的相关规定。2.药物缓释系统（见图1）（1）地塞米松（天津
18、药业有限公司），纯度99.9；（2）全反式维甲酸（上海第六制药厂），纯度99.81%；（3）缓释系统：载体材料为聚乳糖酸（PLGA）。每粒地塞米松缓释系统（Dexamethasone Drug Deliverary System, DexDDS）含地塞米松药量分别为3mg、1mg，药物与载体的重量比为W/W=2/3，缓释系统分别重7.5mg、2.5mg，直径1.5mm，预期释药时间8周。每粒维甲酸缓释系统（Retinoic Acid Drug Deliverary System, RADDS）含全反式维甲酸药量为1mg，药物与载体的重量比为W/W=1/3，缓释系统重4mg，直径1mm，预期释药
19、时间8周。本药物缓释系统由山东省眼科研究所与中国科学院化学研究所共同研制，由中国科学院化学研究所制作提供，维甲酸缓释系统专利号02102477.4。缓释系统单粒分装入0.5ml有色EP管中，置于暗盒，环氧乙烷熏蒸24小时灭菌（青岛市市立医院制剂室），放置1周后备用，避光保存。3. 实验用主要仪器和耗材：CO2细胞培养箱：Heraeus， BB5060型, 德国；6孔培养板、250ml培养瓶、15ml离心管等细胞培养耗品由美国Costar公司购买；玻璃体切割仪：Stoze, Premiere型，美国；裂隙灯显微镜：Topcon，SL-7F型，日本；双目间接检眼镜：Keeler，Vantage型，
20、英国；眼底照相机：Canon，CF-60UD型，日本；接触式眼压计：Mentor，Tono-Pen XL型，美国；高效液相色谱分析仪：Agilent，1100型，美国；眼电生理仪：Nwuropack ，MEB-5504K型，日本。4. 实验试剂：（1）RPMI-1640干粉培养基由美国Gibco公司购买。（2）新生牛血清由杭州江滨生物技术有限公司购买。5. 细胞培养液及试剂的配制（1）RPMI-1640培养液的制备：RPMI-1640干粉培养基10.4g加入900ml双蒸水中，再加入2.0g NaHCO3，搅拌使其充分溶解，补充双蒸水至1000ml，调整PH值至7.3，N2正压抽滤灭菌，4C冰
21、箱保存备用。（2）细胞培养液：每100ml细胞培养液中含RPMI-1640 培养液90ml、新生牛血清10ml，同时加入青霉素和链霉素，使二者的浓度达到100IU/ml，4C冰箱保存备用。（3）Hanks液：用3.5%NaHCO3 4滴滴在0.02g酚红上，使其充分溶解，然后加入NaCl 8.0g、Na2HPO412H2O 0.06g、KCl 0.4g、KH2PO40.047g，加双蒸水至1000ml，调整PH值至7.3，过滤分装于250ml瓶内，封盖，10磅气压10分钟灭菌，4C冰箱保存备用。（4）细胞传代用消化液：0.25%胰蛋白酶溶液和0.02 %乙二胺四乙酸二钠（EDTA）溶液的混合消
22、化液。二、实验方法（一）成纤维细胞培养1.兔皮肤瘢痕动物模型构建取成年健康新西兰白兔1只，盐酸氯胺酮注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司）50mg/kg、盐酸氯丙嗪注射液（上海禾丰制药有限公司）25mg/kg、硫酸阿托品注射液（徐州莱恩药业有限公司）0.015mg/kg联合肌肉注射麻醉。麻醉成功后，剪除背部5cm5cm 范围的兔毛，0.2% I型安尔碘（上海利康消毒高科技有限公司）消毒手术区，铺无菌手术巾，无菌眼科弯剪剪除其中央大约3cm3cm范围的皮肤，保留皮下组织，创面涂0.5%红霉素眼膏（山东鲁抗辰欣药业有限公司）。术后每日早晚两次以0.2% I型安尔碘消毒手术区周围皮肤，创面涂0.5%红霉
23、素眼膏。术后3天伤口皮肤开始结痂，1周后形成硬痂（见图2）。2. 成纤维细胞的原代培养按前述方法麻醉动物，麻醉成功后0.2% I型安尔碘消毒手术区，铺无菌洞巾，于手术显微镜下用无菌眼科弯剪和有齿镊小心剥开硬痂，剪取痂下柔软疏松的灰白色纤维结缔组织，用无菌生理盐水将组织块表面残余血性成分冲洗干净，置于11000妥布霉素溶液浸泡30分钟。将浸泡后的组织块于洁净工作台上取出，放置于无菌平皿中，无菌Hanks液冲洗2遍，无菌组织剪将组织块剪碎成1mm3大小，加入10%新生牛血清1640营养液10ml吹打，使组织块分散均匀，分装入无菌6孔培养板内，置于37C、5%CO2浓度的培养箱中培养。2天后于倒置显
24、微镜下观察，可见组织块大部分贴壁，有细胞从组织块周围游出。吸出培养液以及未贴壁的组织块，向各孔中加入10%新生牛血清1640营养液3ml。3. 成纤维细胞传代培养成纤维细胞原代培养7天后，倒置显微镜下观察可见大部分细胞呈长梭形，排列紧密，约占培养板底面积的90%（见图3），进行传代培养：吸出培养板各孔内的培养液，向各孔内加入无菌Hanks液2ml冲洗3遍，再加入0.25%胰蛋白酶溶液0.1ml和0.02% EDTA溶液0.05ml，轻震荡，使消化液混和并且均匀覆盖孔底，37C下放置12分钟，倒置显微镜下观察，可见细胞变为圆形，细胞间隙增加，少数细胞悬浮。立即吸出消化液及上层悬浮细胞，加入10%
25、新生牛血清1640营养液2ml终止消化，反复吹打至细胞全部悬浮后，将6孔细胞平均分装入3个容积250ml、底面积75cm2的无菌培养瓶中，置培养箱中继续培养。每日观察细胞，大约3天左右培养液颜色变黄，即更换培养液。观察细胞生长约占培养瓶底面积的90%，即按上述方法再次进行传代培养，传代时各培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶溶液1ml和0.02% EDTA溶液0.5ml。4. 成纤维细胞计数传代培养3次或4次后，可见细胞生长活跃，呈长梭形，中央见圆形细胞核（见图4）。取细胞生长面积超过培养瓶底壁90%以上者，按上述方法进行消化。取细胞悬液9滴滴入0.5ml EP管中，加入0.5%锥蓝溶液1滴，混匀，
26、室温下放置3分钟，再次混匀后，取1滴滴入计数板上进行细胞计数，蓝染细胞不计算在内。每一培养瓶计数3次后取平均值，经离心或重悬，最终使细胞密度达1.0106个/ml。 （二）动物模型构建1.术前检查裂隙灯显微镜检查眼前节；0.4倍诺喜眼水（日本参天制药株式会社，主要成分：0.4%盐酸奥布卡因）点眼表面麻醉后，用接触式眼压计测量双眼眼压；美多丽眼水（日本参天制药株式会社，主要成分：0.5%托吡卡胺和0.5%盐酸去氧肾上腺素）点眼散大双眼瞳孔，双目间接检眼镜检查玻璃体视网膜，排除眼部病变。暗适应30分钟后，按前述方法麻醉动物，0.4倍诺喜眼水点眼表面麻醉，分别行双眼的暗适应ERG检查，每眼各行10次
27、光刺激，刺激强度20焦耳，记录10次刺激后的b波波幅值，取算术平均数，以右眼算术平均数与左眼算术平均数的比值作为评价右眼视网膜功能的指标。2. 术前准备术前1天，实验兔右眼给予0.3%氧氟沙星眼水（中国沈阳兴齐制药厂）点眼4次清洁结膜囊。术前20分钟和15分钟各用美多丽眼水点右眼一次，散大瞳孔。3. 手术过程按前述方法麻醉实验兔，0.2% I型安尔碘消毒右侧面部，铺无菌手术巾，开睑器开睑，无菌生理盐水冲洗结膜囊。沿角巩膜缘剪开上方10点至2点位球结膜，分离结膜下组织，暴露巩膜，分别于颞上方及鼻上方角膜缘后2mm做巩膜穿刺口，5-0尼龙线于颞上方穿刺口做预置缝线，固定灌注管，眼内灌注平衡盐溶液（
28、Alcon公司，美国），灌注压50mmHg。放置15斜面角膜接触镜清楚显示眼内结构后，玻切头由鼻上方穿刺口进入玻璃体腔，行中轴部玻璃体切除术，切速600转/分钟，吸力100mmHg，切割时间5分钟。中轴部玻璃体切除术完成后，DDS植入组由鼻上方切口将DDS植入玻璃体腔，9-0尼龙线缝合鼻上方切口；PVR动物模型组，1ml注射器抽取成纤维细胞悬液0.2ml（大约含成纤维细胞2105个），接30Ga针头于角膜缘后2mm行玻璃体腔穿刺，将0.2ml成纤维细胞悬液注入玻璃体腔中央。调节灌注压使眼压保持正常，拔除灌注管，拉紧预置的5-0尼龙线，关闭灌注口，复位并用9-0尼龙线缝合球结膜。术毕，结膜囊涂0
29、.3氧氟沙星眼膏。4.术后处理术后0.3氧氟沙星眼膏每日涂术眼结膜囊2次，共3天。（三）地塞米松和维甲酸缓释系统预防PVR的疗效观察1.实验动物分组实验兔42只，随机分为5组，按上述方法构建PVR动物模型（均为右眼）：A组（ 6只）：术中玻璃体腔不植入DDS；B组（ 6只）：术中玻璃体腔植入空白DDS；C组（10只）：术中玻璃体腔植入DexDDS（含Dex 1mg）；D组（10只）：术中玻璃体腔植入RADDS（含RA 1mg）；E组（10只）：术中玻璃体腔植入DexDDS（含Dex 1mg）和RADDS（含RA 1mg）。2.术后临床观察术后1、2、3、5天及1、2、4、6、8周，裂隙灯显微镜
30、观察眼前节的炎性反应，以前房闪辉作为眼前节炎症反应的指标6；手持笔式眼压计测眼压；美多丽眼水点眼散大瞳孔，双目间接检眼镜观察眼后节反应，并行眼底照相。（1）眼前节炎症反应分级评价标准：0级：无前房闪辉，光束透明清亮；I 级：微弱的前房闪辉；II 级：中度的前房闪辉，可辨别虹膜及晶状体细节；III 级：显著的前房闪辉，难以辨别晶状体及虹膜细节；IV 级：严重的前房闪辉，房水呈凝固状态，伴有大量纤维素性渗出物。（2）眼后节反应分级评价标准：0级：视网膜在位，玻璃体无混浊；I 级：视网膜在位，玻璃体混浊或见纤维条索；II 级：视网膜受牵拉，血管扭曲或有局限性视网膜脱离；III 级：全视网膜脱离。II
31、级、III级病变作为发生PVR，对各组不同时间PVR的发生情况及各组发生PVR的时间进行统计学分析。（四）地塞米松和维甲酸缓释系统玻璃体腔植入的安全性观察1.实验动物分组实验兔18只，随机分为2组，按上述方法进行中轴部玻璃体切除术，术中不向玻璃体腔注射成纤维细胞：F组（9只）：术中玻璃体腔植入DexDDS（含Dex 3mg）；G组（9只）：术中玻璃体腔植入RADDS（含RA 1mg）。2.术后临床观察术后1、2、3、5天及1、2、4、6、8周，裂隙灯显微镜检查眼前节的炎性反应，笔式眼压计测量眼压，美多丽眼水点眼散大瞳孔，裂隙灯显微镜检查前部玻璃体的炎症反应，双目间接检眼镜观察玻璃体视网膜并行眼
32、底照相。3. 暗适应ERG检查术后4周和8周时F、G组动物中各随机选取6只，按前述方法进行暗适应ERG检查，以右眼与左眼暗适应b波波幅比作为评价右眼视网膜功能的指标。4. 组织病理学检查实验结束后，过量麻醉处死动物，取全眼球及部分肝脏、肾脏，10%甲醛固定液固定24小时，梯度乙醇脱水，60二甲苯透明处理1小时，石蜡包埋，每一标本连续切片45张，层厚4m，二甲苯脱腊，梯度乙醇水化。随机选取15张切片，苏木素伊红（HE）染色，显微镜下观察DexDDS和RADDS对视网膜及肝脏、肾脏是否存在毒性作用。（五）地塞米松和维甲酸缓释系统植入后玻璃体腔药物浓度检测1. C、D、E组动物术后1周和8周时各随机
33、选取4只，抽取玻璃体腔液0.3ml，高效液相色谱分析法检测Dex和RA的药物浓度。2. F、G组动物术后1、2、4、6、8周时各随机选取4只，抽取玻璃体腔液0.3ml，高效液相色谱分析法检测Dex和RA的药物浓度。三、统计学分析数据统计运算采用SPSS 10.0 for Windows数据统计软件包进行处理，其中呈正态分布的计量资料采用One-Way ANOVA检验, 呈非正态分布的计量资料和计数资料各组比较采用KruskalWallis检验，组间比较采用MannWhitney检验，以P0.05作为差异具有显著性意义。结 果一、地塞米松和维甲酸缓释系统预防PVR的疗效观察1.术后AE组裂隙灯显
34、微镜和间接检眼镜检查结果：术后AE组在观察期内角膜、晶状体保持透明，其它观察结果如下：A组（空白组）与B组（空白DDS组）观察结果相似：术后第1天前房炎症反应重，前房闪辉IV级，瞳孔后粘连（见图5），眼底窥不清；术后第3天前房闪辉III级，渗出消失，瞳孔仍然后粘连，可以窥见玻璃体混浊，两组6眼中各有5眼可见视网膜脱离，眼后节反应分级为III级；术后第5天前房炎症反应进一步减轻，前房闪辉IIII级，玻璃体混浊重，可以窥见有纤维条索，两组全部发生全视网膜脱离（见图6，7）；至术后第2周时，前房闪辉III级，视网膜脱离进一步发展，表现为视网膜脱离呈闭漏斗状（见图8），甚至与晶状体后囊相贴（见图9）；
35、其后眼前节炎症反应稍有减轻，但至观察期结束仍然存在较为明显的前房闪辉（见图10）。C组（DexDDS组）：术后第1天前房炎症反应轻，前房闪辉III级，无瞳孔后粘连，玻璃体混浊，前玻璃体内可见大量细胞，部分聚集成团，并有细胞团沉积于视网膜前，眼后节反应分级为I级（见图11）；术后第3天前房反应无明显变化，玻璃体内有纤维条索形成，4眼可见下方发生视网膜脱离（见图12），2眼可见髓线抬高，血管扭曲；术后1周时有4眼发生全视网膜脱离（见图13），其余髓线抬高及血管扭曲进一步发展（见图14）；术后4周有7眼形成全视网膜脱离；至术后8周7眼形成闭漏斗状脱离（见图15），另外3眼亦有局限的视网膜脱离。D组（
36、RADDS组）：术后第1天前房炎症反应较重，前房闪辉IIIII级，瞳孔均有后粘连，隐约可见玻璃体混浊，有纤维条索形成，但无视网膜脱离发生；术后3天内前房反应无明显变化，有1眼在第3天发生视网膜脱离；术后1周左右前房反应才明显减轻，玻璃体混浊亦减轻，可见纤维条索更加明显（见图16），1眼发生全视网膜脱离，5眼发生局限性视网膜脱离或者明显的血管扭曲抬高（见图17），后节反应达到III级；至术后第4周时有9眼发生II级或III级的后节反应（见图18），此后至术后第8周后节反应略有发展（见图19）。E组（联合用药组）：术后第1天前房反应轻，前房闪辉III级，无瞳孔后粘连，玻璃体可见纤维条索和成团分布的
37、细胞，视网膜在位；术后35天前房反应进一步减轻，于术后1周时前房闪辉0I级，玻璃体混浊亦减轻，视网膜在位（见图20）；此后前房闪辉基本消失，至术后第8周时大部分术眼前房闪辉为0级；后节反应亦稍有减轻（见图21），只有1眼在术后第6周时发生视盘血管的扭曲抬高，其余9眼至观察期结束后节反应皆在0I级。（1）各组间前房闪辉的比较见表1、2、3、4。表1：术后第3天各组前房闪辉比较A组B组C组D组E组0级00000I级00709II级12221III级32180IV级22000各组比较：229.226，P0.000；组间比较：PA,B0.818，PA,C0.002，PA,D0.368，PA,E0.00
38、0，PB,C0.005，PB,D0.713，PB,E0.000，PC,D0.001，PC,E0.436，PD,E0.000。E组、C组分别与A、B、D组之间比较差异皆有显著性意义； 其余各组之间比较差异无显著性意义。表2：术后第1周各组前房闪辉比较A组B组C组D组E组0级00000I级229410II级23140III级21020IV级00000各组比较：215.574，P0.004；组间比较：PA,B0.818，PA,C0.056，PA,D0.713，PA,E0.031，PB,C0.056，PB,D0.713，PB,E0.031，PC,D0.052，PC,E0.739，PD,E0.023。E
39、组与A、B、D组比较差异有显著性意义；C组比A、B、D组等级低，但差异无显著性意义；其余各组之间比较差异无显著性意义。表3：术后第4周各组前房闪辉比较A组B组C组D组E组0级00105I级22965II级43040III级01000IV级00000各组比较：220.750，P0.000；组间比较：PA,B0.818，PA,C0.022，PA,D0.428，PA,E0.005，PB,C0.022，PB,D0.313，PB,E0.005，PC,D0.089，PC,E0.143，PD,E0.007。E组与A、B、D组比较差异有显著性意义；C组与A、B组比较差异有显著性意义，比D组等级低，但差异无显著
40、性意义；A、B、D三组之间比较差异无显著性意义。表4：术后第8周各组前房闪辉比较A组B组C组D组E组0级00307I级34663II级32130III级00010IV级00000各组比较：218.572，P0.001；组间比较：PA,B0.699，PA,C0.073，PA,D0.875，PA,E0.003，PB,C0.181，PB,D0.792，PB,E0.007，PC,D0.063，PC,E0.105，PD,E0.001。E组与A、B、D组比较差异有显著性意义；C组比A、B、D组等级低，但差异无显著性意义；其余各组之间比较差异无显著性意义。（2）各组间后节反应的比较见表5、6、7、8、9。表
41、5：术后第3天各组后节反应比较A组B组C组D组E组0级00000I级004910II级12610III级54000各组比较：232.058，P0.000；组间比较：PA,B0.699，PA,C0.002，PA,D0.000，PA,E0.000，PB,C0.007，PB,D0.000，PB,E0.000，PC,D0.063，PC,E0.023，PD,E0.739。C、D、E组分别与A、B组之间比较差异皆有显著性意义；E组与C组比较差异有显著性意义；其余各组之间比较差异无显著性意义。表6：术后第1周各组后节反应比较A组B组C组D组E组0级00000I级000410II级00650III级66410
42、各组比较：232.220，P0.000；组间比较：PA,B1.000，PA,C0.056，PA,D0.002，PA,E0.000，PB,C0.056，PB,D0.002，PB,E0.000，PC,D0.043，PC,E0.000，PD,E0.023。D、E组之间比较及D、E组分别与A、B、C组之间比较差异皆有显著性意义；C组比A、B组等级低，但差异无显著性意义。表7：术后第2周各组后节反应比较A组B组C组D组E组0级00001I级00019II级00460III级66630各组比较：230.887，P0.000；组间比较：PA,B1.000，PA,C0.220，PA,D0.022，PA,E0.
43、000，PB,C0.220，PB,D0.022，PB,E0.000，PC,D0.218，PC,E0.000，PD,E0.000。E组与其他四组之间比较差异有显著性意义；D组与A、B组比较差异有显著性意义，比C组等级低，但差异无显著性意义；A、B、C三组之间比较差异无显著性意义。表8：术后第4周各组后节反应比较A组B组C组D组E组0级00002I级00018II级00350III级66740各组比较：230.458，P0.000；组间比较：PA,B1.000，PA,C0.368，PA,D0.056，PA,E0.000，PB,C0.368，PB,D0.056，PB,E0.000，PC,D0.218
44、，PC,E0.000，PD,E0.000。E组与A、B、C、D组之间比较差异有显著性意义；A、B、C、D组之间比较差异无显著性意义。表9：术后第8周各组后节反应比较A组B组C组D组E组0级00003I级00016II级00341III级66750各组比较：228.789，P0.000；组间比较：PA,B1.000，PA,C0.368，PA,D0.118，PA,E0.000，PB,C0.368，PB,D0.118，PB,E0.000，PC,D0.393，PC,E0.000，PD,E0.000。E组与A、B、C、D组之间比较差异有显著性意义；A、B、C、D组之间比较差异无显著性意义。（3）各组发生
45、II级后节反应的时间见表10：表10：各组发生II级后节反应的时间组别发生II级后节反应的时间（d）中位数（d）A3, 3, 3, 3, 3, 33B3, 3, 3, 3, 3, 33C3, 3, 3, 3, 3, 3, 5, 7, 7, 73D3, 7, 7, 7, 7, 7, 14, 14, 14, 567E42, 56, 56, 56, 56, 56, 56, 56, 56, 5656各组比较：234.115，P0.000；组间比较：PA,B1.000，PA,C0.220，PA,D0.002，PA,E0.000，PB,C0.220，PB,D0.002，PB,E0.000，PC,D0.005，PC,E0.000，PD,E0.000。除A、B、C三组之间差异无显著性意义之外，其余各组之间差异皆有显著性意义。2.术前术后各组眼压的变化术前及术后各时相测得各组术眼眼压见表11。各组术前与术后8周的平均眼压比较，PA0.002，PB0.000，PC 0.531，PD0.094，PE0.896。除A、B组眼压降低差异有显著性意义外，其余各组手术前后眼压差异无显著性意义。眼压变化的趋势见图22。表11：术前及术后各时间点各组术眼平均眼压（单位：mmHg）组别术前术后1w术后2w术后3w术后4w术后6w
