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1、专题2 细胞工程 单克隆抗体制备,导弹,功能:导向目标，并摧毁目标,导弹的弹头荷载弹药用来摧毁目标；由导向系统控制导弹飞行轨迹。,强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞,抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。,温故知新,B淋巴细胞,效应B淋巴细胞,记忆B淋巴细胞,分化,抗体的传统生产方法,抗原,反复注射动物,从动物的血清中分离抗体,该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,如何解决这个问题呢？,单克隆抗体！,单克隆抗体的概念,读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念,为了解决传统方法制备单克隆
2、抗体的缺点，人们经探究发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体,问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。,单克隆抗体的制备,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞,BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）,（一选）HAT选择培养基：只有杂交瘤细胞才能存活,获得产生
3、相应抗体的B细胞,（二选）：先在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后筛选出能产生专一抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔培养,杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。,为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？通过什么方法诱导细胞融合？会有几种融合方式？（只考虑两两融合的情况）杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？,单克隆抗体的优点及应用,应用于诊断试剂准确、高效、简易、快速,单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。,生物导弹单克隆抗体药物单抗导向，药物为弹头,应用于治疗疾病和运载药物,主要用于癌症治疗，单克隆抗体
4、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。,一个过程:,单克隆抗体制备过程,二个“一”,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高、可大量制备,课堂小结,重点,三个原理,动物细胞培养原理,动物细胞融合原理,免疫原理,单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？,你学会了吗？,【例1】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞【例2】单克
5、隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A B淋巴细胞 BT淋巴细胞 C骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞,A,初试牛刀,D,【例3】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体,B,初试牛刀,右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是_。（2）图中为_过程，常用 作为诱导剂。该细胞继承了，因此不
6、仅能分泌，还有 本领。,不能,没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的B淋巴细胞,细胞融合,PEG或灭活病毒,双亲细胞的遗传物质,特异性抗体,大量增殖,制备单克隆抗体,（3）该方案的目的是_。,(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）d过程是一个_过程，该过程的进行常用_或_的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是，其特点是_。,效应B,抗原,细胞融合,聚乙二醇 灭活的病毒,选择性,3,既能无限增殖又能产生特异性抗体,杂交瘤细胞
7、,(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）_。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_。,特异性强、灵敏度高,有丝,无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境,习题（1）单克隆抗体是指。,（2）制备单克隆抗体的步骤：将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤获得的B淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在_的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_的能力，又具有_的本领。检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。,化学性质单一，特异性强的抗体,抗原,聚乙二醇,选择性,无限增殖,产生专一抗体,（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得10g/mL的抗体；动物体内诱生法可获得520mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是。,（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为 产生，解决这个问题的方法是_。,大量生产选，小规模生产选,效应B,蛋白质,异物,免疫反应,采用人的效应B细胞制备,谢谢,
