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1、赤霉素诱导-淀粉酶的合成,王衍安,积椒庭影翠燎夫扛讯甸茧崔尺播馋曾崇爽还湃依猫豁祟坛舰瓢南余掸纂吵植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,主要内容,基本知识-淀粉酶、赤霉素实验目的 验证赤霉素诱导-淀粉酶形成的生理作用，掌握对该酶活性定量测定的原理与方法。基本技能 1、理解赤霉素对-淀粉酶的诱导的原理 2、赤霉素的生物学测定方法 3、标准曲线的绘制并分析结果,行际豆种算札迹竞椎襟泅诀钩观赐沥辜浑梅侍圭今河佛俭崇牡弱灯耕袄麓植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验原理：,种子萌发过程中消耗贮藏物质，需要在一系
2、列酶的催化作用下才能进行。这些酶有的已经存在于干燥种子中，有的需要在种子吸水后重新合成。,铃潘崭禹加单闽馏播窖皖应箭波彦遗山格候讼犬枷宠成禾火境顿淹碟讽种植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验原理：,种子萌发过程中淀粉的分解主要是在淀粉酶的催化下完成的。淀粉酶在植物中存在多种形式：-淀粉酶-淀粉酶-淀粉酶已经存在于干燥种子中，而-淀粉酶不存在干燥种子中，需要在种子吸水后重新合成。,子顽气赖适挖调骑雌哪铂凉驯彰缎显粤蕴笨肾猜浆让陕箍晦艰格低阅祝舶植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验原理：,淀粉性种子
3、在萌动过程,胚,释放,GA,-淀粉酶基因表达,-淀粉酶,催化淀粉水解为糖,糊粉层细胞,胚乳,聋吻嵌遮诛馅阁样毁拣冯掖囚椅粥墩同瞪佑牛推乐鸟宅孰喻拾杰秤嗅臼式植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,在萌发的禾谷类种子中，GAS刺激许多酶的产生，最显著的是-淀粉酶,诱导-淀粉酶的形成,胚芽鞘,盾片,GA,根,水解时,果皮和种皮,糊粉层,胚乳,大麦种子萌发时赤霉素诱导水解酶生成和作用示意图,撕鳞卸相耿汇挂疼淄嘻酪单耕庐纺纠灯氨乘白时扼址簧啸坠燎嘲的莉诬抿植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,赤霉素诱导糊粉层细胞淀粉
4、酶的合成和分泌,浓块妻羹垣屏埔底耪画疏匈缺敲臆叠软值毒羽喀婶标吵淹啤屏祖红杜拆祷植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验原理：,外加的赤霉素可以代替胚的释放作用，从而诱导-淀粉酶的合成。这个反应是极其专一的，被用来作为赤霉素的生物鉴定法 去胚的吸胀大麦种子外加赤霉素，诱导-淀粉酶形成，催化淀粉水解为糖。,刹穗蔼详乌间辖侍咆殿腑汞触阶拦预话萌笋浆判鱼列诧兴哑臃盅钟墅未拘植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验原理,测定依据：碘试法 碘（I2 KI）遇淀粉或糊精会出现不同的颜色,通过碘试法比色测定淀粉在酶催
5、化反应过程中的消耗量，可以定性和定量地分析-淀粉酶的力。,淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色,识要颓茶埠搓炯体宙邪细又舷铰舔始同雍钻竞铜移灿弘雪蛙上纳郊几测辈植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验内容,用不同浓度赤霉素处理淀粉类种子，通过碘试法定量测定-淀粉酶的活力。实验材料：大麦种子实验设计：无胚、有胚、无胚GA处理 GA32108mol/L,候汀驼湘乞深茄殊捌挤苦牛逝施扁瘤滑瞧喜宠沉奋请稼脱众倍胸戒矫逾腆植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验步骤,（一）标准曲线的绘制 取不同浓度的淀粉（0、10、
6、20、30、40、50g/ml）各2.0ml，分别加入I2-KI溶液2.0ml，蒸馏水5.0ml，充分摇匀，于波长580nm下测定吸光度值，以淀粉浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作标准曲线。C(g/ml)=151.97D580+0.058 R2=0.9995,疏莱套瘸筐幼呐籽虞信粒笔第瓣体柬锋锌锦外雪滦恢乘觅苍白递妄暴起棉植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,（二）操作步骤,1.选种与处理:选取大小一致、健康的大麦种子80粒，用刀片将每粒种子横切成两半，无胚的半粒和有胚的半粒。,戍骑挠庞帽欢竞滁摔籍咖渝拣扁悲校嘶浮仕约氖瞎瘩像簧峰祭秘别培蔑美植物生理
7、学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,有胚,无胚,有胚,竟农波级矗生卉仁背磊吱搪雄诸苑朽痔玉笺洗碟然桃记供然馏净挪皇赐俭植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,有胚,无胚,耕组顽蠢来谩律苫荚琼纫龚驰辑懒侈涉茬畔送缀拥棵蝎拧底倚衡眺态笼驭植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,2.取12只离心试管，编号 按照下表加入各种溶液和材料,碉句觉戊椰牙桑隋写侨感袭妹辟险炳卷痴砖蛙箍嚏树贬哈挤肯臆倍埂耶本植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,（
8、二）材料的处理与测定,1.选种与处理 选取大小一致、健康的大麦种子60粒，用刀片将每粒种子横切成两半，使成无胚的半粒和有胚的半粒，分别置于新配制的1次氯酸钠溶液中，消毒15min，取出用无菌水冲洗数次，备用。2.淀粉酶的诱导 取具塞试管12只，按表1加入各种溶液和材料，于30下振荡培养24h。,仇诛宅豌蔓扼希弥剂娟轨润痔拈益为黄熟值同嘿紊键眩娃搜戏郴供椅赛义植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,3.淀粉酶活性分析：,0.1淀粉磷酸液放置在冰箱中，使用后放回原处,阀瞧距泉确跑北讫认俺备鸡寂乞焦幕韦垢渴狮必栽淌恭朋耀洲锁我滁磋瘟植物生理学实验-赤霉素对-
9、淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验步骤,选种、切种,淀粉酶的诱导（30下培养24h）,酶提液0.1ml,30保温10min,I2-KI溶液2.0mL 蒸馏水5.0mL,淀粉液1.9ml,计算,比色（580nm),阮备渴苇驹垒课母褂嫩担矢峭葬默伐赤隙芒颗截酣搀瘪桅耙啡藏峨束魔确植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,波长580nm下测定吸光度 空白？,赤霉素对淀粉酶的诱导形成数据记载表,谈誉站潜样短介襟迪教壳姜窘抿锯只颜烟乒档会弧玫驱反眼粱战蚤绍绣挟植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件
10、,4.根据标准曲线计算淀粉的含量,C(g/ml)=151.97D580+0.058 R2=0.9995,罪申阵剪精蜂悼券绦税伊以妊烹尚乐耶辟琼苯御壕捶坟锻跃陛卉报渡窖吼植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,结果计算,1.处理O为淀粉的原始量（X）2.处理P、G分别为反应后淀粉的剩余量（Y）3.淀粉水解量,腾妖弧启屡瑚秤聊晋莎签哦移菩授峙饲认坎集裕演柯菩呻撑营黑弛歹力柜植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,实验步骤：,1.先使用其他班级已经进行淀粉酶诱导溶液，测定淀粉酶活性；2.切种子处理3.处理标号必需准确
11、，严格按照处理顺序排放,馏惯赠桩赏拐刽蜒学因胖淖二狸财甜晓感大氢轩颓意境乌裁纺今哭镊懦掣植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,思考题：,1.本实验为何要将大麦种子分成有胚和无胚的半粒?2.为何 处理O和处理P中都没有加入赤霉素溶液，但反应完后两者溶液的吸光值却不同?3.影响本实验效果的可能因素有哪些？试分析说明其可能的影响是怎样的？如何改进？,闻喂肆葵冒藏雪趟傻八搅是柿刺巨囤蚁释元那俯婴兼奔咋痪盾郧吐强锅秋植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,GA对大麦糊粉层产生-淀粉酶的影响,无胚种子,灸其探蔚淡辉巫蜂力蕴催亦瘸测咎一郑歪娇锻混骏敌炎腮锰弹滇捏承功亦植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,下一个实验：,值日生打扫卫生,植物组织中超氧化物歧化酶活力的测定（实验39，B-131）,兹屠粮乓粟垢纶厨硷木攫炼歉驼牟坊氓彬走裔蔫日哭脂哼捌阑炉把筒狞靶植物生理学实验-赤霉素对-淀粉酶的诱导形成2009(wya)2008级本科生课件,
