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1、实验六 沙门氏菌检验(二),一、实验器材(每组的量,由班长分发),赖氨酸脱羧酶培养基试管:5支/组对照培养基试管(不加赖氨酸):1支/组尿素琼脂培养基斜面:3支/组蛋白胨水培养基试管:6支/组 余下的作为空白实验前准备:(尿素)琼脂培养基融化后冷至50 55,加入经过滤除菌的尿素溶液(10ml尿素溶液/100ml培养基),分装于灭菌试管内(约34ml/管),放成斜面。,二、实验步骤,首先标记挑取的可疑菌落产H2S是“”还是“”1.赖氨酸脱羧酶试验挑取可疑菌落,接种赖氨酸脱羧酶培养基试管(包括对照培养基),每人接种一支,36 1,培养18h24h2.尿素酶试验挑取可疑菌落,接种三支尿素琼脂斜面,
2、36 1,培养24h3.吲哚试验挑取可疑菌落,蛋白胨水试管每人接种一支,36 1,培养1d2d,三、实验结果,1.赖氨酸脱羧酶试验赖氨酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色;阴性者因葡萄糖产酸,培养基变为黄色。对照管应为黄色2.尿素酶试验尿素酶阳性者由于产碱,培养基变为红色。3.吲哚试验(蛋白胨水试管)加入数滴乙醚,摇动,静置;沿管壁徐徐加入欧-波试剂(吲哚试剂)数滴,在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。,反应序号A2:补做甘露醇和山梨醇试验,按下表判定结果:,反应序号Bl:补做ONPG。若ONPG(),为大肠埃希氏菌,若ONPG(),为沙门氏菌。同时,沙门氏菌应为赖氨酸(),但甲型副
3、伤寒沙门氏菌为赖氨酸()。,7,赖氨酸脱羧酶试验从左往右依次为 对照、阳性(紫)、阴性(黄),沙门氏菌常用生化试验,三糖铁TSI,沙门氏菌常用生化试验,Urease Test尿素酶试验:,urea尿素,ammonia氨,Indol test 吲哚试验tryptophan色氨酸indole吲哚玫瑰吲哚 Kovacs reagent吲哚试剂(对二甲基氨基苯甲醛),-+,E.coli,蛋白胨水试管,中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003,TSI(排除A/A H2S结果),靛基质,尿素,KCN,赖氨酸,H2S 靛 尿KCN 赖(或一项不符),沙门氏菌血清学试验,H2S 靛 尿KCN 赖,H2S 靛 尿KCN 赖/,非如左述的各种反应结果,沙门氏菌血清学试验,沙门氏菌,非沙门氏菌,