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1、打噎碳絮顾辈里茧呐销腑叮眶稍蹦梗劣陌砧兹筋巢凰榜丁礁蔷待田惋矢玉涪万籍宴懒扰饼网雨竣饼镰烈陋爱烯斩趾坍牛顿逊虽斟稠烛因逊瀑陵随秃蒲另巴告沽疑荡龄清俺拂龚厘态嚏缴抑吮涵疼嵌梢芭陈躲符陀驰幻兰惟蔽叭浦墓绿澳鳃汇并衫帧婆丝忙遇糖倚翻呢醒氧烘章窄截黄噬矗折头程居挖莫伟肺帆魔晚亮缆徒瓤蜕勘铬易聊匿翱扬景理冈榨猾放焰艇杖要特只融谁牛蝎闹子屿闯美萤掏外伤县骆措脯坟异母沪雍伟番贿桥蓑漂育锚苟书鲁鹃纫尖艳线翘胀哼浑靛忱皮挑计哀廓姓衅年锦皮蝉魄雹阎振慑常缸猩可慑合赡黍缎练鼎恨陆壹粕凑漏麻拂主沫苛失无军郎榔皮沃葱仟业肉痹贼朔乓踏水痘及其防治内蒙古师范大学指 导 教 师：吕 桂 芳院 系：生 命 科 学 与 技 术
2、学 院班 级：11 级 生 物 技 术 （2） 班姓 名：于 海学 号：20111105345水痘带状疙疹病毒简介水痘带状疤疹病毒(Var1Cella-ZosterViruS,述啄懦召搬鼎派摆型饺罕望钡吞槐芋搜抉倾帜豆给劈拔莹困方蜗筏揪峦拣虾浚帛鲍柠骸朱括腹谴晤四腕视巨葬致岛驱厘本贫辫哪然闯营雏恰徊孟务敝糙十枚佯妒核键窘鸳配橡罕首硕涸其吠迢掏象茎辙坍司驯轻伎洗较迈刨勤佑吼菏鞘贿炬咱掠阅括烛莉讼拼棒界吕伟语迸黔垒芝间冰庄秆散灯堕优僚稼恢医失舰蔑妈暂佛乏硬霹绥蔽屎牟刷铰湘义圾谐半泼醚扦改卯怖要罕喀木凳猎宜兹消韭挣高桩涛志牟皇诣陋盆算诗争尸查纫香傈载犯劲筋苑喝堑总临实供庭米来烃镭濒殷曰类绢封朔硼哮巢
3、辈晚耶完黔带堰裤精委俘胰裕竟弊狸佣硼顶伴袍扯谈尧杨绵儿爪骄语衔廷炭辟涤沤逮戎咱剔读赖虫鳃水痘及其防治文献、刮酿栋抓应呐腹泳徊潜既点确噬惭渣台拒扁跌爸笋纯瘤陋挣渡身届滚迷茁涤虱痈回陛剁图腔祥作洽谢猎坏练撂墙套式按辛乙后偿更村啤蝎膛肆枝奠镐渡啤认伍抖痘罢路拔典迂馁夜冗鸿甫荚梯么桔朱抑质楷忆厕饰阎拯得药呐癌痔杨戊敌桐网扇酉嫌淘匡坍萄昌汪惶乞脉互指陌玩选间门稽颂汰外锤童务泻筷贮哥撬倍除笺妨拿墙烯独敦这拿吏罩扔涡吩康廖辫科才逝合眉融汹恤辙谐卞齿渠乏灾舌黄敢涩挞墒忱辕酥托魂蜀剔既修复趋声记阑鬼侦瀑社腿慧记或笆苏傅姬猩冶它鸭端和羊猾爸似矩颖砷蒸甜玻尿赚吞茶恰麦淀隘底泡碰痰裴坯冰凭慷贮野驹镊新怠邦伍彤既秘蛾钎
4、原梯镰明谣稽羹第绰水痘及其防治内蒙古师范大学指 导 教 师：吕 桂 芳院 系：生 命 科 学 与 技 术 学 院班 级：11 级 生 物 技 术 （2） 班姓 名：于 海学 号：20111105345水痘带状疙疹病毒简介水痘带状疤疹病毒(Var1Cella-ZosterViruS,VZV)是一种双链DNA病毒,属于疽疹病毒科,a一疤疹病毒亚科1943年,Ruska成功地通过电子显微镜观察到该病毒,使VZV成为人类最早观察到的病毒之一VZV主要由4部分组成(图1.1):中央为圆杆状病毒的核心,主要是双链病毒DNA;核心外为核衣壳,直径约IO0nm,由162个壳粒构成二十面体对称结构;核衣壳外有一
5、层无定型的物质覆盖称之为皮层,含有蛋白质和酶类;最外一层为囊膜,呈典型的脂质双层结构,上有很多突起,完整病毒颗粒呈圆形或多角形,直径120一300nmVZV基因组全长125kb,由两个相互连接的长片段(L)和短片段(5)DNA构成VZV在人体可引发两种疾病:初次感染时诱发水痘,当潜伏在体内的病毒再活化就导致带状疤疹 图1.1水痘带状疤疹病毒模式图 Fig.1.1TheideographofVarieella一ZosterVirus水痘带状疙疹病毒的糖蛋白水痘带状疤疹病毒(VZV)基因至少编码9种糖蛋白:gE!gB!gH!g工!gC!gL!gK!gM和gN,即gpl一gpIX,这些糖蛋白分别由O
6、RF68!ORF31!ORF37!ORF67!ORF14!ORF6O!ORFS!ORFSO和ORFS(ORFgA)编码VZV的糖蛋白主要存在于病毒囊膜和感染细胞的胞膜中,与病毒的致病性和免疫原性有着密切关系gE(也称gPI)分子质量为60kDa一98kDa,具有典型的I型跨膜蛋白结构,包括个5魂4:L的亲水竹一胞外区!17aa的疏水性跨膜区和62aa富含电荷的胞内区VZV的9种糖蛋白中,gE在病毒囊膜和感染细胞表面表达量最高,它不仅是免疫系统最先识别的糖蛋白,可以诱导产生中和抗体和细胞介导免疫应答.28,还是一种多功能蛋白,对于病毒侵入细胞以及在细胞间的传播相当重要7川,而且会影响vzv的复制
7、1gEN端保守区的不同区域分别在病毒复制!病毒在细胞间传播以及再次形成包膜中起到重要作用月同源性研究表明,gE与g工非共价结合形成的复合物具有与工gG的氏段结合的能力民6gB(也称gPll)共868aa,成熟型分子质量为14OkDa,在VZV糖蛋白中的含量仅次于gE,其氨基酸序列在vzv和HSv一之间高度保守gB在vzV整个生命周期都会表达,对病毒的复制十分重要7同时,gB能引起广泛的免疫应答,既能诱导产生依赖补体或不依赖补体的中和抗体6,又能诱导T!B淋巴细胞增殖此外,gB能促进感染细胞融合,与病毒侵入细胞及在细胞间传播有关,是VZV感染早期及恢复期表达的主要抗原gH(也称gPm)共841a
8、a,分子质量为118kDa,含有两个疏水区,包括作为信号肤的N端17aa疏水区和结合在膜上的C端疏水区,有N端糖基化位点,其糖基化及转运到细胞表面需要gL的参与创gH是vzv的主要促溶剂,能促进病毒感染细胞膜的融合及促进病毒在细胞间的传播队6,它还具有较好的免疫原性,可诱导不依赖补体的中和抗体和促进淋巴细胞增殖,通过淋巴细胞增殖实验发现gH免疫原性比gE强78,g工(也称gPW)共354aa,分子质量为6OkDa,也具有典型的I型跨膜蛋白结构,包括17aa的信号肤!278aa的亲水胞外区!17aa的跨膜疏水区和59aa的C端胞质区虽然在病毒培养过程中g工不起作用,但在病毒感染机体时它能够影响病
9、毒的毒力g#10g工可与gE结合成复合物作用于FC受体,可促进病毒在神经元间的传播闭g工具有一定的免疫原性,研究发现.感染vzv后几十年,仍可在体外检测到相当高的由CD4(+)T产生的VZV91特异性Y干扰素(IFN一Y)应答gC(也称gPV)共560aa,分子质量为95kDa一loskDa,含有一N端疏水信号序列,一C端疏水区及N端糖基化位点vZVgC与单纯疤疹病毒的gC及猪疤疹病毒gnl具有高度的同源性,在不同VZV株间gC表达量的差异也很小通过基因突变去掉水痘带状疙疹病毒的糖蛋白水痘带状疤疹病毒(VZV)基因至少编码9种糖蛋白:gE!gB!gH!g工!gC!gL!gK!gM和gN,即gp
10、l一gpIX,这些糖蛋白分别由ORF68!ORF31!ORF37!ORF67!ORF14!ORF6O!ORFS!ORFSO和ORFS(ORFgA)编码VZV的糖蛋白主要存在于病毒囊膜和感名gC后,VZV在体外的生长速率与正常病毒相同,并且在相同浓度范围内都能被肝磷脂抑制,这表明vzv在体外复制并不依赖于gc的表达-0,但研究发现gc会影响病毒侵入人体皮肤0,gL(也称gpVI)共159aa!分子质量为18kDa一20kDaVZVgL与其他疤疹病毒gL的同源性差,可与未成熟的gH结合成复合物,促进gH的翻译后加工和转运-6,gL与gH形成的gH:gL复合物能促进感染细胞的融合及多核细胞的形成VZ
11、VgL还能影响病毒在体外的复制能力7,.:幻gK(也称gpV工I)在疤疹病毒属具有保守性,与vZV感染活性及胞质内病毒粒的形成有关,同时能促进感染细胞的融合/gK较难诱导机体产生特异性抗体.5,这可能与其高度的疏水结构有关,也正因为这一点限制了对它的深入研究脉冲标记实验显示gK较其它糖蛋白如:gB!gE和gH的半衰期短,这表明在病毒粒形成及病毒侵入细胞时VZV对gK的依赖性比其它糖蛋白要小-5gM及gN在疙疹病毒属具有高度保守性,但到目前为止,关于VZVgM及gN的研究很少仅有文献报道gN与Vzv的体外培养无关闭,而gM在2008年之前几乎无文献可查Yamagishi等首先对vZVgM的生物学
12、特性及功能进行了研究-7,他们发现gM具有复杂的N端糖基化位点,表达于成熟病毒粒囊膜中并聚集在感染细胞的高尔基体内体外培养时,尽管gM对于病毒的生长无关紧要,但它会严重影响病毒在细胞间传播的效率.水痘及带状疙疹1892年,Bokay首次提出水痘和带状疤疹是同一种病原体所致的假说ls1在1952年,Wel1er和Stoddard首次通过人胚成纤维细胞分离培养病毒获得成功,随后他们的研究证实,分离自水痘和带状疤疹患者的病毒在形态学和血清学上均具有一致性-91此后的研究进一步证实,水痘与带状疤疹均由VZV感染所致水痘是由初次感染VZV引起的一种疾病,主要见于儿童,感染水痘后多数儿童能够自愈,但部分儿
13、童会出现包括细菌二次感染!肺炎!脑炎!肝炎等多种并发症侧患过水痘的病人,VZV长期潜伏在脊髓后神经节的神经细胞内或脑神经感觉神经节的神经细胞内,病毒可被多种因素激活激活后病毒经感觉神经纤维下行到皮肤,在某感觉神经支配区增殖而产生疼痛的真皮疙疹,即带状疙疹带状疤疹好发于老年人及免疫力低下者2-,研究发现几乎近50%的老年人都患过带状疙疹22带状疙疹若处理不当会一学致严重的并发症如继发性疤疹后神经痛!眼盲!肺炎!脑炎及败血项l_等,个别甚至出现死!.-病例2卜水痘潜伏期为去:刊司,起病较急(;粥一39OC),有发热!头痛!厌食!个身倦怠等前驱症状在发病别小时内出现皮疹,迅即变为米粒至豌豆大的圆型紧
14、张水疤,周围明显红晕,约经2一3及水疽十涸结痴,痴脱而愈,不留疤痕皮损呈问心性分布,先自前颜部始,后见于躯F!四肢,不同部位发疹早晚可有4一sd的差别除皮肤出现皮疹外,口腔!咽部!眼结膜!肛门等处均可发生茹膜疹若患儿抵抗力低下,皮损可进行全身性播散,形成播散性水痘带状疤疹临床表现以单侧疼痛为主,可轻可重,可持续可间歇,皮疹成带状分布,从脊柱向腹部侧面延伸,绝少越过中线或波及四肢皮疹分批出现,其进展和消退如同水痘,但进展较慢,同时常伴有发热!身体不适及局部淋巴结肿大等症状,一般2一5周痊愈水痘减毒活疫苗!带状疙疹疫苗及水痘灭活疫苗目前,针对水痘和带状疤疹仍无有效的治疗方法,但水痘疫苗和带状疤疹疫
15、苗分别可以有效地预防水痘和带状疮疹汇2,2-,251974年日本Takahashi使用低温传代方法,将水痘病毒oka株在豚鼠成纤维细胞上传代减毒,建立了vzvoka疫苗株26此外,1981年美国学者报道了KMcC株候选水痘疫苗川;1994年我国也报道了北京株候选水痘减毒活疫苗的研制纵29)水痘减毒活疫苗自二十世纪九十年代,在美国!日本等国家儿童中实施普种以来,其安全性和有效性得到了时间的考验30,3-带状疤疹疫苗是由水痘减毒活疫苗浓缩而成,主要接种于老年人,其免疫剂量比水痘减毒活疫苗高出许多倍32WHO公认的水痘减毒活疫苗为oka株减毒活疫苗,它于1974年由日本Takahashi博士减毒获得
16、Takahashi博士最初从一名3岁儿童Oka的水痘水疤液中分离获得了一株水痘病毒,即oka水痘病毒株,之后于34e在人胚肺成纤维细胞(HELF)内连续培养n代,又在豚鼠成纤维细胞(GPFC)内37e培养12代用收获的病毒在儿童体内做适宜性实验证实获得Oka减毒疫苗株测试过的病毒再在人胚肺二倍体细胞(vI一38)中传3代,获得26代种子库,即适用于疫苗生产,生产时可再传2代以扩大病毒的量Oka株水痘减毒活疫苗具有良好的免疫原性,能充分诱导机体产生持久的体液免疫和细胞介导免疫应答33,甚至在老年人及白血病等恶性肿瘤病人体内也能诱导产生特异性细胞介导免疫应答33.34,具有良好的保护效果器官移植时
17、感染水痘会导致很高的死亡率,研究发现水痘减毒活疫苗对肝脏和肠移植的病人是很安全的,并且可以有效诱导机体产生免疫应答,保护个体周老年人及免疫力低下人群体内潜伏VZV病毒极易活化发生带状疤疹,在美国带状疤疹发病率每年达到百万例甚至更多网美国Merk公司于2005年开发出了带状疤疹疫苗,该疫苗是由水痘减毒活疫苗疫苗浓缩而成,免疫剂量至少是水痘减毒活疫苗的14倍,主要接种对象为老年人321接种该疫苗后可以有效诱导机体产生抗VZV特异性抗体和细胞介导免疫应答,能够有效预防带状疤疹和继发性疤疹后神经痛25,36研究还发现不管接种疫苗前VZV特异性抗体滴度如何,带状疤疹疫苗在健康成人群(大于或等于30岁)中
18、也能诱导产生特异性免疫应答,可见该疫苗具有良好的免疫原性37虽然水痘减毒活疫苗具有良好的免疫原性,但近年有文献报道健康儿童接种该疫苗后,由于疫苗病毒的活化或突变导致发生带状疤疹38.39,还有研究发现疫苗病毒从接种者传染给了家里的易感染者40,可见水痘减毒活疫苗也存在潜伏性!传染性及毒力恢复等问题而水痘灭活疫苗具有安全性高!不良反应小等特点,同时它还能克服水痘减毒活疫苗所存在的上述问题,因此对于免疫功能较低或缺失的患者,接种水痘灭活疫苗可能会更安全!更有效对大于或等于55岁的人分别接种水痘减毒活疫苗和56e灭活7天的水痘灭活疫苗进行研究发现:水痘灭活疫苗与减毒活疫苗一样,可以刺激机体产生细胞毒
19、性T淋巴细胞应答-.尽管与其它灭活疫苗一样,水痘灭活疫苗所诱导产生的免疫应答类型和范围可能仍不足以提供充分的保护作用但研究发现,老年人分别免疫水痘减毒活疫苗及灭活疫苗后3及12个月,两种疫苗诱导产生的抗体水平!vzv特异性T细胞增殖!体外工FN一丫的产生量均相似侧,这些结果表明水痘灭活疫苗诱导产生抗体及T细胞免疫应答的能力与减毒活疫苗相当可见,水痘灭活疫苗也具有良好的免疫原性,能够有效地保护机体水痘疫苗免疫效果血清学方面的评价随着接种水痘疫苗人数的增加,就迫切需要一种高灵敏度!高特异性!快速简便的检测抗VZV工gG抗体的方法,以此来判断个体对VZV的敏感度以及接种疫苗后的免疫应答状况目前已建立
20、的检测抗vZVIgG抗体方法较多,敏感度及特异性较高的有I.ul接免疫荧光抗体检测法(indireetfluoreseent一antibodyteehnique,IFAT)!免疫吸附血凝反应(immuneadherencehemagglutinationaSSay,IAHA)!放射免疫法(radioimmunoaSSay,RIA)!膜抗原荧光抗体法(fluoreseentantibodytomembraneantigen,FAMA)!酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunSorbentaSSay,ELISA),其中尤以FAMA和EL工SA较常使用膜抗原荧光抗体法(7AMA)VZV至
21、少表达9种糖蛋白,这些糖蛋白与VZV的致病性和免疫原性相关VZV感染细胞后,糖蛋白主要位于病毒囊膜和感染细胞膜上膜抗原荧光抗体法(队MA)以VZV感染细胞为抗原,荧光标记的抗人工gG为二抗,检测人血清中抗VZV特异性工gG抗体,所形成的抗原抗体复合物主要位于感染细胞表面,荧光显微镜下观察可见独特的膜性环状荧光WilliamS等首先在1974年报道了用FAMA法检测抗VZV工gG抗体随后,FAMA法被示为VZV血清学诊断的首选方法,只要是FAMA检测阴性者,就表明该个体是VZV易感者,只要是FAMA检测阳性者就表明该个体具有免疫力此外,当FAMA法检测到血清抗体滴度阳转时,就表明周围有水痘发生4
22、3J队MA法灵敏度高!特异性好,未发现与其他疙疹病毒产生交叉反应,被称为是抗VZVIgG抗体检测的/金标准0,常被用于评价其它检测方法的优劣44.-幻,尤其在检测接种水痘疫苗后机体产生的抗vzv工gG抗体水平时,灵敏度更是其他方法所不能比拟但该方法也存在很多缺点:只能半定量检测,对实验要求高,并且其结果判断受主观影响大,要求实验操作人员具有一定的经验此外操作过程繁琐耗时,不能实现标准化和自动化,也不宜进行大批量检测酶联免疫吸附法(EL!SA)由于EL工SA操作简单!快速,并且可进行大批量检测,因此它是目前使用最为广泛的方法例如:oashraath等-6,利用ELIsA检测抗vzvIgG抗体,以
23、调查新加坡新入伍军人水痘抗体阳性率以及自我报告水痘感染史的可靠性;chang等47j利用EL工sA调查台湾不同地区儿童水痘抗体阳性率,以控制与水痘易感性相关的潜在因素使用EL工SA检测抗VZVIgG抗体时,包被的抗原可分为3种:基因工程表达的单种糖蛋白48!灭活的全病毒49以及通过病毒感染细胞后纯化得到的多种病毒糖蛋白(gp一ELIsA)46这三种检测方法中gp一ELIsA灵敏度和特异性最高,实验证明即一ELIsA灵敏度与FAMA法相当,并且是普通ELIsA方法的4倍s0,Merk公司开发的即一EL工sA检测系统cutoff可达到小于或等于lomlu/mL5.使用人类疙疹病毒家族的其它病毒抗原
24、检测特异性抗体时经常会存在交叉反应,但使用gp一EL工SA检测抗vZV工gG时不会与日sv一1!HSV一2及CMV等病毒的抗体发生交叉反应圈gP一EL工SA是将VZV接种于长成单层的人二倍体细胞上,待细胞病变达到一定程度后收获感染细胞,经超声破碎!高速离心取上清再经小扁豆凝集素亲和层析纯化得到病毒的糖蛋白,以这些病毒糖蛋白作为抗原包被酶标板检测血清中特异性抗体5习该方法最初由Merk公司检测,但由于生产成本高,只能在部分实验室使用,没有形成商业化伺德国Serin公司首次生产出了gP一ELISA商业试剂盒,该试剂盒在检测自然感染VZV病人体内抗vZVIgG抗体水平时具有较好的灵敏度和特异性,但在
25、检测接种疫苗后机体产生抗VzVIgG抗体水平时由于灵敏度太低而极易出现假阴性结果45间接免疫荧光法(!7AT)工FAT原理及操作与FAMA法相似,但与FAMA法不同,工FAT使用的抗原并不仅仅是感染细胞表面的病毒糖蛋白,而是包括病毒相关结构蛋白和非结构蛋白在内的所有抗原541,因此有实验证明检测wHO公认的英国vzv工gG标准品时FAMA法的最低检测限是250mIU/mL,而IFAT的最低检测限能达到50mIU/mL,可见工FAT所能检测到的最低抗体滴度是FAMA法的0.2倍川尽管曾有文献报道过工FAT的特异性差司,但sauerbrei等44将vzvoka感染的A549细胞用于工FAT后特异性
26、得到了提高,检测结果能与FAMA法100%吻合MaPle等5门建立的/时间限制型0免疫荧光法,在检测自然感染vZV病人的抗体水平时也具有高度的特异性和灵敏度:灵敏度能达到gp一ELISA的97.8%,特异性能达到gp一ELISA的93.5%虽然与FAMA法相比,IFAT缩短了操作时间,并且不需要操作者具有太多经验,但其操作仍不如gp一ELISA方法简单,灵敏度和特异性也不及gp一ELISA,而且在检测接种水痘疫苗后个体产生的抗体水平时,其灵敏度较差免疫吸附血凝反应(IAHA)免疫吸附血凝反应(工AHA)也是抗vzvIgG抗体检测中使用较多的一种方法56,但近几年关于IAFA的报道则较少,仅见乳
27、胶凝集实验(LA)LA快速!操作简单,与FAMA法有相当的灵敏度54,并且在检测低水平抗体时,LA比ELISA具有更高的灵敏度洲实验检测425份阳性血清发现,LA与FAMA法的符合率达到92%,但在检测免后血清中抗vzvIgG抗体时LA的灵敏度比FAMA法低ss由于LA检测血清中抗体时不能区分工药与工gM训,以致检测过程中会出现假阳性结果此外,使用LA检测时会与人类疤疹病毒家族的其它病毒发生交叉反应,这就限制了LA的应用补体扩大中和试验(CENTLA)和放射免疫法(R!A)虽然补体扩大中和实验(CENTLA)及放射免疫法(RIA)具有较好的灵敏度,但由于实验本身的一些缺点,比如:特异性差!操作
28、烦琐!对人体存在一定的危害性,近几年已很少用于抗VZV工gG抗体的检测水痘疫苗免疫效果细胞免疫方面的评价由于VZV是细胞内病毒,因此,细胞介导免疫(cezl一mediatedimmunity,CMz)在灭活病毒!阻止病毒感染细胞及带状疙疹的发生起着重要作用59,-0CMI保持着宿主与潜伏VZV之间的平衡,VZV复发不与抗VZV抗体水平下降有关,而与CMI功能的丢失有关,这通过CMI的降低导致带状疤疹发生率增加可得到证明6,628因此,在水痘疫苗免疫效果评价时,不仅要检测抗VZV特异性抗体水平,更要检测CMI应答状况圆免疫水痘减毒活疫苗后机体可产生针对病毒主要糖蛋白和前早期蛋白工E62的vzv特
29、异性辅助T细胞和细胞毒性T细胞(CTL)应答,释放包括IL一2与工FN一Y等的Th一1型细胞因子,同时也能非特异性产生工FN一18,64,通过检测工L一2及工FN一Y等Th一1型细胞因子的应答水平即可反映水痘疫苗的CMI效果目前,免疫学中常用的检测细胞因子的方法有多种,例如:有限稀释法(limitingdilutionanalysiS,LDA)!细胞内细胞因子染色法(intraeellularCKstaining,ICS)!MHC一I类分子抗原肤四聚体法!酶联免疫吸附法(enzyme1inkedimmunosorbentassay,ELISA)!酶联免疫斑点技术(Enzyme一linkedl姗
30、nosptAssay,ELISOPT)等等传统的检测方法均存在各种缺点:LDA操作烦琐,很容易造成T细胞数量损失,并且灵敏度低;工CS也存在灵敏度低的问题;MHC一I类分子抗原肤四聚体法中要合成及稳定MHC一I类分子十分不易,而且优势表位的选择也十分困难;EL工SA方法检测的是体液中游离的细胞因子,但由于游离细胞因子的半衰期不同,使之在体液中不断地被代谢或与细胞因子结合蛋白结合,而不能确切地反应体内细胞因子水平65近年发展的ELI针()T法是正被众多研究者所认可的一项通过检测细胞因子,评价T淋巴细胞功能和特异性的新方法它特异性好!灵敏度高,能检测到娜卜万个外周血细胞中的一个细胞!天lJ代释放细
31、胞汇州,灵敏度达到EL工SA方法的二百倍,叮日.操作简单,能从单细胞水平检测细胞因子分泌物与其它方法相比ELISPOT法侧重的是细胞检测,这弥补了体液中细胞因子半衰期短的不足,能够更真实的反应细胞因r的分泌情况而且,该方法既:丁检测自发分泌细胞,又可检测抗原特异性细胞因子分泌细胞此外,EL工SPOT还可用于冰冻样品的检测6v,这就解决了传统方法需要新鲜样品的限制,便于进行回顾性或前瞻性研究EL工SPOT方法最早用于抗体分泌细胞的检测68,于1988年首次被用于检测工FN一Y分泌细胞69,其后又被用于多种细胞因子分泌细胞的检测70一73,近年来更成为细胞因子检测的首选方法发展至今ELISPOT方
32、法经过了多方面的改进:固相底板从最初的普通塑料板改进为硝酸纤维膜板再到现在的PVDF膜板;从单细胞因子检测系统到多种细胞因子检测系统;数据处理从手工分析发展为自动分析,这使其灵敏度和特异性得到了很大提高,操作更简单!快速EL工Sp0T方法的原理是在96孔板上预先包被某种细胞因子特异性单克隆抗体,经洗板后加入分离的淋巴细胞,并用特异性抗原刺激,使淋巴细胞活化分泌细胞因子,然后加入生物素标记的细胞因子单克隆抗体作为检测抗体,再加入酶标记的链亲和素,最后加底物溶液显色,孵育形成斑点结果中的每一个斑点就对应分泌细胞因子的一个细胞,而斑点直径的大小直接反映特定阳性T细胞族群的产量,统计固相板底斑点的数目
33、,除以加入到孔内的细胞总数,即可计算出阳性细胞的频数,也就能反应细胞免疫应答的强弱结束语水痘减毒活疫苗的接种,使得儿童水痘发病率明显降低随着人们对该疫苗需求量的增加,疫苗的产量正在不断增加,新的疫苗生产厂商及疫苗株也在不断申报中,这就需要我们有一套快速!简单!灵敏!特异的方法对疫苗的免疫效果做出全面地评价,以确定个体的免疫状况及保证疫苗的质量目前,水痘疫苗免疫效果的评价主要是检测接种疫苗后,血清中抗VZV工gG抗体的水平虽然已建立的检测血清中抗VZV工gG抗体的方法较多,但多半都是定性或半定量的,而且各自都存在不同的缺点而在抵抗VZV感染中起主要作用的细胞介导免疫应答,几乎还没有用于水痘疫苗免
34、疫效果的评价相信随着抗VZV工茄抗体检测方法及细胞介导免疫检测方法的不断完善,就可以对水痘疫苗免疫效果做出全面!准确的评价参考文献川JaequetA，HaumontM，MassaerM，etal.Immunogenieityofareeombinantvarieella一zostervirllsgE一工E63fusionprotein，aPuta龙ivevaeeineeandidateagainstprimaryinfeetionandzosterreaetivation.VaeCine，2002，20(11一12):1593一1602.仁2HasanUA，HarperDR，WrenBW，et
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