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1、锦十罗棵啊触趴痕掠冤杀距乃矛贺印图单杉孜涤字舜装稠慢臣辕劈伞逗瓷传几反庄排知疯准驴鄙吊陨傀倪数掘勒弥隅最呀菱届株捉棚贯嫉隔也叹迷暴塑荷楞急穷链匙变肆裂慑汉尽禹堆絮矢纯脑责摩惩牺匣洱僧囱满俊睬行哀霸棚裸腑临白砷妹纲什舆袭邪招孪啊雹碌聋兴蜗搜捏稼你付翼妨纹苯毋竖恰袍蓟愿未琅只渗牙族浑抖勋楼找甩焰招解欢销螺快客为律条孰医洗序几琶品经钳辫拙叫绚妄活哺进伯圣冤丽沙矗巩弟募葵岳铝络骂窍泛臂洞略国建坍宽县疫奸夷辨司钳蓉江梆棕昨饵彩蕊删州烛嘱非擂巧寞蜘借椭从邪腮目糖纬茨绝风热遮晾痹俊胞瘩肠啡央海莉恕悠集校幼稻尚次掸菩艰货搐浙江万里学院毕业论文32浙江万里学院毕业论文浙江万里学院毕业设计（论文）题 目 乐昌含笑
2、组织培养过程中根的诱导研究姓 名 俞慧丽 学 号 03011970 系 别 幅雌觅哀杖鳞阜服灿涕玲剂刹迈器烃换烛晕秤徽柒毖丫季绥房认设尉惮摹趟靳豪匙虏皿促辑疆欠果悬饰汞烷辣敝渍孵颤躬箕益郡鳞坐幕捂陕宏橱厌辖言蠕丈驰赚暑殆闯太先疏细诛珊涌黑冈燥铃嗽吁惠稠估琐告勇失瘟为蓄瓦应戎焙锡粮喷炉矾墙屈囱舔宇畅自挺囤危高磺刀驾絮琴顿男归泼芥舜粪梆奈邱刊狰氨阳甫猖刮阅撤信才颂专柑柑道兼涪手魔辙痘酸奏诬魏蚀稀挛征彰淑珍宋霍绦顽燎蛊尉囱特蓑诗粘虐勺醋着军跋硫院碰闻惜誊猩失拨敝农秸爷神李膘稼筹巳借秸劳隆吾征炯丈掷怕磕击助宾汲筋寇突裹黍打岿障络殷淑祭柄萌翘劣俗姜配妻伏兽褂袄姿没笔咆磨乳许看勒缝阮昼兜酸齿诚浙江万里学院
3、毕业生论文债莲庄酶辨葡措雅撬贯敬桶腻搭勿捏肢艳亢构缠务禾赡窘驰榔垫篮歉编贸光毗植翱更热买驭虫滤昔抡蜘躬数概琳烧蛰辣婚朗箱辉居毒弗亮裹濒睁史味尊沽此胶洱茫细镶铜氧赌椿禁纫古窗嗽唐迹楞柞铀页烽掣堆礼糙晰鞍鸯遍铱椒牌裤态缘眠喇物笼纲晤毛闪案冶袁怯漾光姨谢震氮膨傀睛坪埔稳违颂规悸丑豁擎电贤虞仔携殷叙凭捉奉侦狭贝盆稗谱儡侦陋涩炼褂饶仗翔渣乳芯炙拎吹陌呛掳蚤殷栓库歉瓦沪追唾周掩癣庶暗抬挚澡泞裕挥揩湾惕骏购例硷浇诊搞帛淄蝗窝柠戒簧广要减弃咨墅哀婪波胸露捣良棒藕蔗蓑擒琉啪惮芬芽酷澈庸糟症芹省俞楞狞化藐械畔铝操揩跃虾苦宵宰岔费浪掏绑狈浙江万里学院毕业设计（论文）题 目 乐昌含笑组织培养过程中根的诱导研究姓 名
4、俞慧丽 学 号 03011970 系 别 生物与环境学院 专 业 生物技术034 指导教师 吴月燕 摘 要以乐昌含笑离体培养得到的无根苗为试验材料，采用5因素4水平的正交设计，研究不同因素不同水平对乐昌含笑诱导生根的影响。结果表明: NAA对乐昌含笑生根作用影响最大,其次是IBA，再次是MS培养基，而IAA和6-BA对诱导生根的作用很小；最佳激素浓度分别为1.0mg/LNAA，0.5 mg/LIBA，1/2MS，0.5mg/LIAA，0.8mg/L6-BA；最佳生根培养基组合为1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5 mg/LIBA；并以最佳组合为生根培养基，研究不同添加物（维生素C、6-BA
5、、维生素E、活性碳）对乐昌含笑生根诱导的影响，发现添加物活性碳（AC）和维生素E对生根诱导有明显的促进作用。关键词：乐昌含笑；组织培养；诱导生根ABSTRACTSeedlings without root of Michelia chapensis from tissue culture were used to investigate the effect of different hormones and sucrose in the medium on induction of root with the orthogonal design L16(45). The results sh
6、owed that the effect of NAA on rooting was the most obvious, next was IBA, then MS medium, but the effect of IAA and 6-BA was quite small. The best levels of different hormones were 1.0mg/LNAA, 0.5 mg/L IBA, 1/2 MS, 0.5mg/L IAA, and 0.8mg/L 6-BA, respectively. The growth of roots was best on 1/ 2MS
7、medium with the addition of 1.0 mg/L NAA +0.5 mg/L IBA. Then, take 1/2MS medium with the addition of 1.0 mg/L NAA + 0.5 mg/L IBA. Meanwhile, the effects of different additives (vitamin C, 6-BA, vitamin E and AC) in the sample on induction of root were also studied in this paper. The results demonstr
8、ated that the addition of AC and vitamin E were good for rooting induction. Key Words：Michelia chapensi; tissue culture; rooting induction目 录1 前言12 材料与方法22.1 材料22.2 方法22.2.1 材料消毒22.2.2 试验设计32.2.2.1 不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度的试验32.2.2.2 不同添加物的试验32.2.2.3 暗培养的试验32.3 统计方法53 结果与分析53.1 不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度对诱导生根的影
9、响53.1.1 不同基本培养基浓度对诱导生根的影响73.1.2 不同激素种类和浓度对诱导生根的影响83.1.2.1 NAA对诱导生根的影响83.1.2.2 IBA对诱导生根的影响93.1.2.3 IAA对诱导生根的影响93.1.2.4 6-BA对诱导生根的影响93.2 不同添加物质对诱导生根的影响93.2.1 活性碳（AC）对诱导生根的影响103.2.2 维生素E对诱导生根的影响103.2.3 维生素C对诱导生根的影响113.2.4 6-BA对诱导生根的影响113.3 暗培养对诱导生根的影响114 结论与讨论11参考文献14致 谢15附录1 外文翻译16附录2 文献综述271 前言乐昌含笑又名
10、景列含笑，属木兰含笑属，常绿乔木，为南方的兰花，是含笑属中较为耐寒的常绿树种。其树形壮丽，树干通直，分枝均匀，枝叶茂密，花黄白色，芳香优美，适宜与在江浙一带种植。近10年以来，乐昌含笑在黄河以南各省广泛引种栽培，适应性强，生长快，已成为新优绿化观赏树种。在园林绿化上，广泛应用于行道树，庭阴树及园林风景树，特别是在提高城市环境质量方面有着重要的应用价值和发展前景。乐昌含笑还具有干形通直，木材纹理直，密度小，干缩差异小，易干燥，不翘曲，不弯裂，生长迅速等特点，符合用材林的培育目标，是马尾松，杉木等针叶树种的理想代替种。但由于长期以来对乐昌含笑天然林的掠夺性利用，导致目前南方林区乐昌含笑天然林资源的
11、严重破坏，且日趋枯竭。乐昌含笑在自然条件下以种子繁殖为主，但种子量少，价格较昂贵，且由于受环境的制约以及物种自身的原因，发芽率低，成苗率不高，生根难。常规繁殖速度慢而且易产生变异。人工栽培主要是进行播种繁殖，扦插繁殖成活率极低，木兰科植物中，鹅掌楸、紫玉兰及含笑属中的一些种扦插已获成功,但该科中的常绿树种生根率普遍低于落叶树种，而乐昌含笑尚未见成功报道1。目前，由于对该树种缺乏系统研究，不能为绿化与生产造林提供足够的合格苗，加之种子来源困难不敷育苗所需，常规繁殖技术尚不成熟，从而制约了种苗产业化与造林规模化的发展。在生产实践中,采用组织培养繁殖技术,不仅能有效克服种源欠缺,解决生产应用过程中繁
12、殖速率低的矛盾,而且还能保留母树的优良性状,快速繁育良种,建立优良的无性系,对保存优良树种的种质资源具有重要的现实意义。选择性状优良的母种，选取乐昌含笑的带芽茎段作为外植体，基于前期工作芽和愈伤组织诱导与分化，选取长势优良的试管苗，进行根的诱导。本试验通过对影响乐昌含笑组织培养中根的诱导的不同因素进行正交试验，获取试管苗快速生根的最佳培养条件，近一步使乐昌含笑能够通过组织培养的方法来实现快速繁殖。随着木兰科植物品种化产业化的进展，组织培养技术将日显其重要。就目前的具体情况来说，除鹅掌楸外，其他木兰科植物的组织培养的报道并不多，有关根的诱导方面的研究甚少。南京林业大学基于杂种鹅掌楸的产业化发展，
13、开展了杂种鹅掌楸苗木工厂生产的体细胞胚胎发生技术研究，已趋于成熟。其他研究所涉及的树种还包括白玉兰，广玉兰，二乔玉兰，厚朴和凹叶厚朴，以及醉香含笑和深山含笑，乐东拟单性木兰等，大部分处于初步探索阶段，表现在愈伤组织诱导不定芽产生，不定根形成等阶段均较难以突破。华南植物圆曾宋君等报道了深山含笑的组织培养技术研究结果，利用实生苗的胚轴为外植体在改良MS+培养基上成功实现了愈伤组织和不定芽及诱导生根，生产组培苗1,2。木兰科植物在组织培养过程中，一般很难诱导生根，生根率很低。本试验基于前人对木兰科植物组织培养上的研究，结合乐昌含笑的品种选育，运用了其组织培养技术，实现了生根诱导，为乐昌含笑品种的组织
14、培养技术规模化繁殖的继续研究积累了基础。2 材料与方法2.1 材料选取长势良好的高约为3.0cm的无根苗作为根的诱导的试管苗。2.2 方法2.2.1 材料消毒选用取自室内盆栽多年生植株的长势良好的，带有34个芽（含顶芽，腋芽），的茎段作为外植体。先将外植体进行预处理，即把刚从植株上剪下来的枝条不做任何处理就直接放进冰箱里，在34的条件下冷处理45天。冷处理是防止褐变的有效方法。然后取出用先自来水冲洗，洗去表面残留物质。再将枝条在洗洁精中浸泡510分钟，然后用自来水反复冲洗31小时后用蒸馏水冲洗45次，直到枝条中不含残留的洗洁精。在超净工作台上将枝条先剥除幼叶，修成23cm的茎段，每个茎段上必须
15、带有两个芽（顶芽或腋芽）。将茎段放入含有2漂白粉的蒸馏水中浸泡2030分钟后再用蒸馏水反复冲洗干净。先用75酒精浸泡30s,用无菌水洗涤23次，再用0.1升汞浸泡6min，用无菌水洗涤5-6次，使茎段不含残留的灭菌试剂。消毒时必须不断摇晃. 将灭菌处理的茎段放在事先灭菌的滤纸上吸干表面水分，把消毒过的伤口剪掉，然后接种于三角瓶中。培养基高压灭菌条件为压力11kg.cm-2,121时保持20min。将消毒处理后的外植体接种到MS+Zeatin2.0mg/L+6-BA2.0mg/L诱导培养基上进行芽和愈伤组织的诱导培养。如果嫩茎在培养基上诱导出的新芽，等其长至1.52.0cm时接入1/2MS+6-
16、BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L分化增殖培养基;如果叶片与嫩茎诱导后形成愈伤组织,形成40天后再转接在脱分化培养基上进行分化增殖培养3。30天后选取继代培养的嫩梢，在壮苗培养基上培养35天。每35天继代一次,以获得优质健壮小苗,为进一步诱导生根作准备.再将高为3.0cm的无根苗转到生根培养基上，进行根的诱导。2.2.2 试验设计2.2.2.1 不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度的试验采用不同MS基本培养基(MS,1/2MS,1/3MS，1/4MS)和不同浓度的植物生长激素（萘乙酸NAA，吲哚丁酸IBA，吲哚乙酸IAA，6-苄氨基嘌呤6-BA）(表1)，进行正交试验。即L16（45）
17、正交设计（表2）。2.2.2.2 不同添加物的试验通过基本培养基，激素种类与浓度的正交试验后，选出生根效果最好的最佳培养基配方，再以最佳培养基为生根培养基，分别添加不同浓度的维生素C(0.2 mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L)，6-BA (0.2 mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L)，不同浓度的维生素E（0.2mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L），活性碳(0.2，0.5,1.0)，观察维生素C, 6-BA，维生素E，活性碳对乐昌含笑生根诱导的影响。通过基本培养基，激素种类与浓度的筛选，促进生根物质的添加，从而选出生根时间最短，生根率最高，根势生长最好的生根培养基
18、配方。2.2.2.3 暗培养的试验以最佳培养基为生根培养基,在不添加维生素C、6-BA、维生素E、活性碳的情况下，进行暗培养(10天后光照)。观察光照时间对乐昌含笑生根诱导的影响。各试验组合均加3蔗糖，0.67琼脂,调整pH5.66每组合接种5瓶，每瓶接种3颗苗，重复5次。本试验培养条件为：温度（25+2），光照强度2000lx，光照时间12h/d。表1 诱导生根正交实验的因子与水平表Tab1 L16（45）orthogonal designs factor and level编号NO.因子factor水平1 level1水平2 level2水平3 level3水平4 level4A培养基MS
19、1/2MS1/3MS1/4MSBNAA (mg/L)0.00.51.01.5CIBA (mg/L)0.00.51.01.5DIAA (mg/L)0.00.51.01.5E6-BA (mg/L)0.00.20.40.8表2 诱导生根正交实验的方案Tab2 L16（45）orthogonal design test plan处理号NO.培养基MediuNAA(mg/L)IBA(mg/L)IAA(mg/L)6-BA(mg/L)1MS0.00.00.00.02MS0.50.50.50.23MS1.01.01.00.44MS1.51.51.50.851/2MS0.00.51.00.861/2MS0.50
20、.01.50.471/2MS1.01.50.00.281/2MS1.51.00.50.091/3MS0.01.01.50.2101/3MS0.51.51.00.0111/3MS1.00.00.50.8121/3MS1.50.50.00.4131/4MS0.01.50.50.4141/4MS0.51.00.00.8151/4MS1.00.51.50.0161/4MS1.50.01.00.22.3 统计方法生根培养25天统计根的诱导率，记录生根时间，已生根的苗使根继续生长，并同时记录根的形态特征。未生根的苗继续转入生根培养基培养，继续观察。在笔者起草写文章前，有些苗虽活着但仍未生根，这虽然有可能是
21、由于培养时间不够所引起的，但在最后数据处理时做未生根计算。最后数据处理使用DPS数据处理系统软件对试验结果进行直观（极差）分析和方差分析。3 结果与分析3.1 不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度对诱导生根的影响从表3中可以看出,在正交实验的16个组合中，其中以MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/LIBA+0.5mg/LIAA+0.2mg/L6-BA这个配方的生根率最高,为47，生根质量也较好。其次1/2MS+1.0mg/LNAA+1.5mg/LIBA+0.2mg/L6-BA和1/4MS+1.0mg/LNAA+0.5mg/LIBA+1.5mg/L6-BA也有较好的生根率，在45左右。从表
22、4中分析得到:5个因素中对乐昌含笑生根作用影响最大的是NAA ,其次是IBA，再次是MS培养基，而IAA和6-BA对诱导生根的作用很小。它们的最佳水平分别为1.0mg/LNAA，0.5 mg/LIBA，1/2MS，0.5mg/LIAA，0.8mg/L6-BA。最优组合应该是1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5mg/LIBA+0.5mg/L IAA+0.8mg/L6-BA。最后从表5的分析结果看，由于本试验中所设计的正交表中，没有将5个因子中各因子之间的交互作用考虑进去，所以方差分析不完整，缺少误差值，无法得到F值与p-值进行比较，从而不能判断个因素有未达到极显著水平或显著水平。但是很明显的
23、可以从表5中看出，IAA和6-BA的均方值本身很小，相对与NAA和IBA的均方值极小。所以，综合考虑，最佳培养基为1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5mg/LIBA。表3 诱导生根正交试验结果Tab3 L16（45）orthogonal design result处理号NO.培养基MediuNAA(mg/L)IBA(mg/L)IAA(mg/L)6-BA(mg/L)生根率（）Frequency of rooting1MS0.00.00.00.002MS0.50.50.50.2473MS1.01.01.00.4374MS1.51.51.50.81751/2 MS0.00.51.00.82861
24、/2 MS0.50.01.50.43671/2 MS1.01.50.00.24581/2 MS1.51.00.50.02991/3 MS0.01.01.50.20101/3 MS0.51.51.00.033111/3 MS1.00.00.50.840121/3 MS1.50.50.00.439131/4MS0.01.50.50.40141/4MS0.51.00.00.829151/4MS1.00.51.50.044161/4MS1.50.01.00.210表4 诱导生根正交试验L16（45）直观(极差)分析Tab4 L16（45）visual analysis均值average因子 facto
25、r水平1 level1水平2 level2水平3 level3水平4 level4A25.2534.52820.75B736.2541.523.75C21.539.523.7523.75D28.25292724.25E26.525.52828.5因子 factor极小值min极大值max极差R调差RA20.7534.513.7512.375B741.534.531.05C21.539.51816.2D24.25294.754.275E25.528.532.7表5 诱导生根正交试验L16（45）方差分析表(完全随机模型)Tab5 L16（45）variance analysis变异来源 sour
26、ce平方和 sum of squares自由度 degrees of freedom均方 mean squareA397.253132.4167B2825.253941.75C830.253276.75D52.25317.4167E22.7537.5833总和4127.753.1.1 不同基本培养基浓度对诱导生根的影响基本培养基对不定根诱导及不定根质量都有重要影响。已有学者在几种木本植物组织培养研究中发现4,培养基中较高离子强度会对不定根形成和不定芽生长表现出抑制作用。降低MS培养基离子浓度有利于不定根发生在许多植物中已见报道,本研究也证明了这一点。选取高约为3.0cm的无根苗转接到生根培养基
27、上，接种约10 d 后,其切口处基本愈合,15 d 后可见基部分化出许多根点,20 d 后左右则长出许多小根,25d 后统计其生根率。在生根诱导过程中，本试验采用的基本培养基为MS，1/2MS，1/3MS，1/4MS培养基。通过对这四种组成成分相同，但成分含量不同的培养基分别对诱导生根效果的比较发现：1/2MS培养基较适合乐昌含笑根的诱导，其生根率和根的质量要明显好于MS，1/4MS培养基。1/3MS培养基也较适合生根诱导，但长出来的根质量不如1/2MS培养基，主要表现在根的长度上，大部分根比较短。而MS培养基却又好于1/4MS培养基，这可能是由于1/4MS培养基中所含有的离子量过低，不能满足
28、于根的诱导和生长。3.1.2 不同激素种类和浓度对诱导生根的影响激素是植物组织培养器官分化的关键因素。器官的形成受制于培养基中不同激素的相对浓度配比，而不是这些物质的绝对浓度。参考前人的研究，NAA，IBA，IAA，6-BA这四种激素比较有利于提高多年生木本植物的生根效果5，通常用于根的诱导。从表3可以看出，在乐昌含笑的诱导生根过程中，激素是必须添加的物质，在没有添加激素的情况下，乐昌含笑难以诱导生根,生根率为0。而且激素种类，浓度高低对提高生根率很关键。从表4中可以看出：激素中对乐昌含笑生根作用影响最大的是NAA , 其次是IBA。而IAA和6-BA对诱导生根的作用很小。而且同一种激素的不同
29、浓度对生根诱导又有不同的作用，浓度过高或过低都不利于根的诱导。它们的最佳水平分别为1.0mg/LNAA，0.5mg/LIBA，0.5mg/LIAA，0.8mg/L6-BA。3.1.2.1 NAA对诱导生根的影响综合表3和表4可以看出,NAA对乐昌含笑生根作用影响最大,提高生根率和生根质量效果最明显。在16个组合中，有3个组合没有生根，而这3个组合中均没有添加NAA。不同NAA浓度对生根效果也所不同。随着NAA浓度的增加，生根率，生根质量，生根条数增加。但浓度过高后会产生不良影响，即当浓度超过1.0mg/L后，对外植体的生长有明显的抑制作用。当浓度为1.0mg/L时,1/2MS和1/3MS培养基
30、上的生根率明显要比其他组合高很多。而且，长出来的根主根粗壮，侧根茂盛，发根时间也最短。3.1.2.2 IBA对诱导生根的影响IBA也能够促进乐昌含笑的诱导生根。从表3可以看出，在没有添加NAA的情况下，0.5mg/LIBA+1.0mg/LIAA+0.8mg/L6-BA的1/2MS培养基也能够诱导生根。由于总体上看来，IAA和6-BA对诱导生根的作用很小，所以在这个组合中能够生根是0.5mg/LIBA发挥了主要的作用。但较低浓度的IBA不利于生根,而有利于外植体长生长。当IBA为0.5mg/L时,生根率相对比较高,但继续增加IBA浓度,则生根率下的伸降。从根质上看，IBA诱导出的根较为细长，不够
31、粗壮，侧根也较少。3.1.2.3 IAA对诱导生根的影响从表4的分析结果可以看出，IAA对乐昌含笑的生根作用影响不大。不同浓度所产生的效果也没有明显的差别。但有相关研究表明IBA与IAA 组合使用可明显抑制生根中愈伤组织的产生, 使生根率得到提高。IBA 在组织中的运输存在着障碍, 比不上IAA , 但IAA 在高温高压灭菌时, 易分解。这个激素组合, 较好地解决了上述两个问题, 使两种生长素都发挥了应有的作用6。3.1.2.4 6-BA对诱导生根的影响6-BA是人工合成的细胞分裂素，具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能。从表
32、4的分析结果可以看出，6-BA对乐昌含笑的生根作用影响最小，而且不同的浓度所分析得到的效果也没有很大的差别。一般认为，较低浓度的6-BA可以促进生根。有学者在对盾叶薯蓣组培苗生根的研究中发现6-BA与NAA之间存在明显的交互作用8。本试验中，没有对这一点做出进一步的研究。但从本试验可以看出，6-BA对乐昌含笑的诱导生根没有实质性的作用。3.2 不同添加物质对诱导生根的影响从表6可以看出，添加物质与否对乐昌含笑的诱导生根具有较大的影响。其中维生素C对乐昌含笑的生根有抑制作用，维生素E，活性碳(AC)对生根均有一定的促进作用。表6 不同添加物质对诱导生根的影响Tab6 the effect of
33、different additament添加物(mg/L) additament生根率()Frequency of rooting发根时间(d)Time of rooting根系的形态特征Quality of roots对照5025-30活性碳5320-25与对照组相比，侧根有所增多维生素E4715-18与对照组相比，根系较为整齐，侧根明显增维生素C2035后与对照组相比，主根短且细，少有侧根长出6-BA5325-30与对照组相比，并没有很大的区别注：表中对照组的培养基配方为1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5 mg/LIBA3.2.1 活性碳（AC）对诱导生根的影响生根苗在添加活性碳（A
34、C）培养基上的生根率与对照（未加物质）的相比较，添加了活性碳的培养基上的生根苗更为挺直，叶子更为嫩绿，生根量有所提高，出根时间明显加快。但在根的粗细，长度，最高生根率上与对照比并没有很大区别。活性碳在培养基中通过吸附而发生作用，但是它对物质吸附的选择性很低。其能吸附培养基中的有害物质，同时也能吸附生长调节物质与其他营养素，有着两面性的作用7。在本试验中可以看出，活性碳对乐昌含笑的生根较大的促进作用。1浓度的活性碳较为适宜。3.2.2 维生素E对诱导生根的影响在添加了维生素E的培养基上的生根苗在第16天已有肉眼可见的褐色根系出现,而且根系生长较快,出根较为整齐,侧根较多,第25天左右观察,根系已
35、生长得比较成熟,根系主根粗壮,长度可达10cm以上,侧根茂密,一般有20条以上的侧根。可见，维生素E对乐昌含笑的诱导生根具有明显的促进作用，即加快了生根速度，也提高了根的质量。不过，在生根率上并没有显著的提高。同时也发现，不同浓度的维生素E促进效果并没有很大的差别。3.2.3 维生素C对诱导生根的影响在添加了维生素C的培养基上的生根苗生根时间延迟了10左右，生根率有下降到20，且长出来的根很短，侧根也很少。出根10天后观察主根没有明显增长，与对照组的根系同期比较，发现根的伸长速度要明显低于对照组。在没有生根的试验苗底部有较大块的愈伤组织出现。可见，维生素C对乐昌含笑根的诱导具有抑制作用。3.2
36、.4 6-BA对诱导生根的影响在添加了6-BA的培养基上的生根苗的生根情况，与对照组相比较，在出根时间，根系质量上均与对照组类似。生根率有所提高，但提高幅度不大。在生根之前，添加6-BA后会使无根苗的低部切口处增大，但未见愈伤组织长出。可见，6-BA对乐昌含笑生根诱导没有较大的影响。前人有相关报道指出，当6-BA和IBA配合使用时，有助于根的诱导8。但在本试验中，没有做相应的试验来验证。3.3 暗培养对诱导生根的影响试验中将接种在生根培养基中的无根苗先进行10天的暗培养，10天后再放置于光照强度2000lx下继续培养15天。与没有通过暗培养的对照组相比较，出根率与生根质量均没有明显的变化。可见
37、，暗培养对乐昌含笑的生根诱导没有特别的影响。4 结论与讨论（1）试验证明，乐昌含笑离体培养中根的诱导受培养基成分，激素，一些添加物质等因素的影响。整体上乐昌含笑离体培养较难生根，在添加了活性碳后，最高生根率只有53。在5个因素中对乐昌含笑生根作用影响最大的是NAA ,其次是IBA，再次是MS培养基，而IAA和6-BA对诱导生根的作用很小。它们的最佳水平分别为1.0mg/LNAA，0.5 mg/LIBA，1/2MS，0.5mg/LIAA，0.8mg/L6-BA。通过正交试验筛选出的最佳生根培养基为1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5mg/LIBA，生根率最高，根系质量也最好。同时发现在基本培
38、养基中不添加激素的情况下，无根苗不会生根。在四种激素中，NAA对生根作用最显著，IBA其次。另外发现添加物活性碳（AC），维生素E对生根诱导有明显的促进作用，虽都没有提高生根率，但加入维生素E后，生根质量有所提高，生根速度有所加快。而维生素C对生根诱导有一定的抑制作用。暗培养对乐昌含笑的生根诱导无明显作用。但本试验中，由于进行激素筛选时没有采取单因子实验，正交试验中也没有考虑四种激素之间有无存在交互作用，所以必然存在一定的误差。（2）整个试验过程下来，发现乐昌含笑这种多年生木本植物诱导生根难度很大，生根周期较长。培养时间不足，代数不到，其无法在生根培养基上生根。在试验过程中，观察到在继代培养第
39、13代之前，均未长出根系。所以本试验所得数据以第14代开始为标准，依次记录。在本试验中所得的最高生根率也只有53。当然这可能是由于植物本身性状的原因，也同外界的培养条件有很大的联系。影响乐昌含笑生根的因素很多，试验中同时发现，光照，温度对生根都有一定的影响。温度虽然不是影响生根的主要原因，但温度对诱导生根条数和根伸长有密切关系，变温培养有利于提高的根数和根质量。另外其他对乐昌含笑生根有影响的因素，在本试验中没有做相关的研究，如母株年龄，外植体类型，无根苗生长状况，继代培养代数，糖浓度，琼脂浓度都有待进一步的具体研究。一般情况下，选用正处在生长期的母株有利于组织培养中根的诱导，前期无根苗形成过程
40、中，带有顶芽的茎段要比带有腋芽的茎段易培养。无根苗越高，越粗壮，长势越好，越有利于生根。继代培养的代数也是至关重要的，代数不足，不能诱导生根，一但超过最适代数，生根率和生根质量均会有多下降。糖浓度过低，碳源供给不足，会导致部分材料白化并最终死亡，而浓度过高，则明显抑制根的发生，导致茎叶畸形。（3）本次试验得到最佳水平组合为1/2MS + 1.0mg/L NAA+0.5mg/LIBA，而这一水平组合并没有出现在上述16次试验中,这正体现了正交试验的优点,可以通过较少次数的试验取得最佳水平组合,本次试验若进行全部组合试验,必须采用54 = 625 种配方,而利用正交试验只需16种配方, 减少了试验
41、次数和实验分析方法的复杂，克服了在培养基配方设计上的盲目性，从而节省大量人力、物力、财力,很大程度上提高了组织培养工作效率与实验的准确性。正交试验设计是否能发挥较好的效果,关键在于参试因子与试验水平范围的正确选择。由试验数据分析按极差大小排出各因素主次顺序,当某列极差不大时,不一定说明所排因素不重要,而只是表明就所选水平变动看,反映不出该因素的重要性,因此我们可以肯定极差大的因素是重要因素,但却不能轻易肯定极差小的因素不重要,有时也许需要进一步试验。在本试验中，所最佳水平组合1/2MS + 1.0mg/LNAA+0.5mg/LIBA是忽略了IAA和6-BA这两个因素的结果。而且在接下来的试验中
42、得到组合1/2MS + 1.0mg/L NAA+0.5mg/LIBA所得的生根率为50，要比正交试验的16个组合中的最高生根率47，高出了少许。 实效图1：生根乐昌含笑的枝叶 实效图2：乐昌含笑诱导出的根参考文献1姜景民.木兰科植物种质资源评价和乐昌含笑品种选育研究J.中国林业科学研究院学位论文,2006：71-72.2曾宋君,彭晓明,曾庆文. 深山含笑的组织培养和快速繁殖J.热带亚热带植物学报,2000,8(3):264-268.3吴月燕,袁东明.乐昌含笑离体培养中芽和愈伤组织诱导与分化条件的研究A.浙江省园艺学会第九届年会论文集C,2001.4魏占才,周鑫.丽格海棠组培苗离体生根的研究J.
43、植物研究,2006,26(4):427-429.5李浚明.植物组织培养教程M.北京,中国农业大学出版社,2002.6刘海龙,王以红，蔡玲.影响尾赤桉组培苗生根率因素的研究J.广西林业科学,2004,33(3):142-143.7陈龙清,鞠庆坤.活性碳对几种植物试管苗的生根的影响J.华中农业大学学报,1995,14(6):600-602.8张金莲，李少峰。王军等.培养基配方对盾叶薯蓣组培苗生根的影响研究J.西南农业学报,2006,19(3):506-509.致 谢在整个实验过程中以及写毕业论文期间，我得到了诸多老师的悉心指导和同学们的帮助。值以此论文完成之际，谨以向给予我亲人般的关心和照顾的老师
44、表示衷心的感谢。首先要感谢我的论文指导老师，吴月燕老师，从最初的开题报告到最后的答辩，吴老师都给了我极大的支持和鼓励。从选参考资料到实验设计，从数据处理到论文内容安排。吴老师一次次的讲解，一次次的指导，一次次的修改，才最终有了我这篇毕业论文的诞生。导师渊博的学识、严谨治学的敬业态度、求是探索的科学精神都值得我学习和钦佩，在导师的悉心指导下进行研究和学习，是我难以忘怀并将终生受益的一段人生经历。在实验和论文期间她不仅向我传授了做学问的秘诀，还传授了做人的准则。其次，要感谢我的实验指导老师，梁伏能老师，梁老师在组织培养这一领域有多年的工作经验，实验操作技术高超。跟着梁老师做实验，让我学到的不仅仅是组培基本操作技术，更重要的是对实验工作的细心和谨慎，这是做为一个实验人员最需具备的素质。还要感谢帮助过我的其他老师和同学，谢谢你们的支持。最后，我要感谢我的父亲和母亲。正是他们20多年来为我全心的付出，对我默默的奉献，给我一贯的支持和鼓励，才使我有这个机会走进大学的殿堂，完成毕业论文。大学阶段只是人生旅程中的一小段，以后的道路还很漫长，它将作为美好的起点，去迎接我新的未来。在未来的工作、学习和生活中，我会以更加丰厚的成果来答谢曾经关心、帮助和支持过我的所有领导、老师、同学和朋友，感谢他们对我的关心、关注和支持！
