《CKD患者肾内小动脉ɑSMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系 .doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CKD患者肾内小动脉ɑSMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系 .doc（9页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、CKD患者肾内小动脉-SMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系目的：通过研究各期CKD（Chronic Kidney Disease,）患者肾内小动脉-SMA的表达程度的差异，肾内小动脉-SMA的表达程度与颈动脉内膜厚度的关系，揭示肾组织-SMA的表达与肾组织病变程度的关系。方法：选取63例CKD患者。按照eGFR分为3组，CKD1期病人26例，CKD2期病人21例，CKD3期病人13例，CKD4期病人3例，分别行PSA染色，PASM染色以及免疫组化染色，观察肾间质纤维化程度、肾内小动脉的表达程度。结果：1.肾内小动脉-SMA的平均光密度：CKD1期组0.28160.0161；CKD2期组0.268
2、10.0990；CKD3期组0.21720.0512，CKD4期组0.19160.0301,肾内小动脉-SMA平均阳性面积百分比：CKD1期组22.23016.3452%；CKD2期组19.10329.3423%；CKD3期组14.340112.3427%，CKD4期组10.404911.6902%：各组之间两两比较均有统计学差异(P0.05）。2.肾小管损伤指数: CKD1期组0.12160.0161；CKD2期组0.11810.0390；CKD3期组2.21720.0541，CKD4期组3.19160.0401.前两组相比,肾小管损伤指数无统计学意义(P0.05),其余各组两两比较均有明显
3、差异(P0.05）.3.颈动脉内膜厚度：CKD1期组患者0.92120.1401mm；CKD2期组1.61370.5014mm；CKD3期组2.21470.4116mm；CKD4期组2.81470.8016mm。各组之间两两比较均有统计学差异(P0.05）。结论：1.肾内小动脉-SMA的表达的变化可能参与了CKD的发生发展。2.联合检测肾内小动脉-SMA的表达程度与颈动脉内膜厚度的关系可为CKD患者发生心血管意外的可能性提供一定的依据。关键词：慢性肾脏病；-SMA；肾小管损伤指数： 颈动脉内膜厚度；心血管事件近年来，在全球范围内的发病率逐年增加，有统计显示，我国南方大城市中，CKD 的患病率约
4、为10%，北京40岁以上人中，至少有一项肾脏指标异常的人群达到了11%。CKD发病率随着肥胖、高血压、糖尿病人数的增加进一步升高。CKD如若未得到及时治疗，可呈进一步进行性发展，并进入终末期肾衰竭（End stage renal disease， ESRD）阶段，此时则需长期肾脏替代治疗; CKD还能够增加心血管疾病的发生率，是CKD的主要死因之一。因此控制并治疗CKD，已成为全球特别是发展中国家的主要任务，可极大减少ESRD发生率, 减轻社会经济负担。1材料1.1研究对象1.1.1研究对象选择：选取2012年3月至2012年9月在河北医科大学第二医院住院，经肾活检诊断明确为慢性肾脏病患者63
5、例，其中CKD1期病人22例，CKD2期21例，CKD3期17例，CKD4期3例，留取肾组织石蜡切片备用。慢性肾脏病的分期标准：1期：肾损害：eGFR正常或升高90ml/（min1.73）。 2期：肾损害伴eGFR轻度下降6090ml/（min1.73）。 3期：eGFR中度下降3060ml/（min1.73）。4期：eGFR明显下降1530ml/（min1.73）1.1.2入选标准：（1）年龄18周岁；（2）临床或病理诊断为肾实质性疾病；2 方法2.1 肾穿刺标本的处理肾组织经过FAA固定后进行石蜡包埋后切片机连续切片，厚度为2um，在水浴箱中展片，组织充分舒展以后，载玻片捞取组织后放入恒温
6、箱60度烤片。3.2 肾组织的PAS染色步骤（1）二甲苯脱蜡至水（2）梯度酒精水化 （3）自来水清洗1分钟（4）加高碘酸氧10分钟（5）自来水清洗3分钟（6）滴加shiff氏液10分钟（7）自来水清洗3分钟（8）Mayers苏木素染色6分钟（9）自来水清洗3分钟 （10）1%的盐酸酒精分化2秒（11）自来水清洗3分钟（12）1%氨水返蓝20秒（13）自来水洗3分钟 （14）梯度酒精脱水（15）二甲苯1-2分钟（16）中性树胶封片（17）光镜下观察病理变化。3.3、 PASM染色（1）2m切片常规脱蜡至水；（2）1%高碘酸氧化20分钟（3）自来水冲洗；（4）现配制六胺银染色：60度温箱30min
7、（随时镜下观察）；（5）自来水冲洗；（6）0.2%氯化金（5分钟）；（7）苏木素复染5分钟；（8）1%的盐酸酒精分化2秒；（9）Masson红复染2min，自来水洗；（10）快速脱水，透明，封片。3.4临床检测方法：3.4.1常规体格检查：受检者于晨起、空腹、脱鞋、免冠、穿衣相同等条件下测身高、体重，并计算出体重指数。体重指数(BMI)=体重(kg)/身高2(m2)。3.4.2生化指标的检测方法:获取所有受试者知情同意的情况下，于入院后24小时内，留取血尿标本待检测。每位受试者于采血前日19:00后禁食水，次晨7:00用EDTA抗凝管抽取肘静脉血8mL，经4000r/min离心后将血清置于-7
8、0的温冰箱中以待测。留取晨起清洁中段尿，尿标本容器为清洁一次性用品，上口直径大于4厘米，1小时内检测。24小时尿留取时，于清晨8:00排空膀胱，至次日8:00所有尿液收集后搅拌均匀，准确测量总量，记录具体数值后，取10ml待检。3.4.3 cIMT的测定： 受检者仰卧位，颈部垫一颈枕，颈部侧伸45度，用PHLIPSIE33超声多普勒8-14MHz高分辨率探头，测定颈总动脉与颈动脉分叉处平均内中膜最大值，所有受检者均由同一位有经验的专业医师完成。按2003年ESC高血压治疗指南标准, cIMT110mm判断为动脉壁增厚。4 统计分析用SPSS13.0统计软件，计量资料以S表示，资料符合正态分布两
9、组间均数比较采用两样本比较t检验，非正态分布资料转换正态分布资料后为采用两样本比较t检验，多组均数比较采用方差分析，不能用方差分析的采用秩和检验，两参数间的相关性用Pearson相关分析。P0.05为差异有统计学意义。2.结果1.各组受检者相关临床资料的比较（Tab.1)Tab.1：comparison related clinical data of CKD1、CKD2、CKD3、CKD4 patients（s）指标CKD1 (n=22)CKD2( n=21)CKD3( n=7)CKD4(n=3)BMI(kg/m2)23.891.2124.931.0624.231.1323.911.25FB
10、G(mmol/L)4.651.124.940.974.571.224.710.98TG(mmol/L)2.880.642.630.35 a2.300.46 a c1.350.76b c fTC(mmol/L)5.821.615.321.77 a4.571.82 a c4.121.92 b c fHDL-C(mmol/L)1.150.261.290.311.130.450.980.51收缩压（mmHg）130.8712.23138.8010.73 a152.1411.34bd16310.54bdf舒张压（mmHg）77.089.2684.438.35 a98.169.03 bd10912.31
11、bdf血肌酐（mol）56.236.32126.2314.26276.2319.12426.2323.1224h尿蛋白定量（g/d）5.233.953.412.03b3.761.11b c2.331.43bdfCo2结合力（mmol/L）26.374.23b21.764.09b17.314.64bd13.023.89bdf血钾（mmol/L）4.411.204.621.14 a4.921.34 a c5.831.12bdeNote: vs CKD1 group，a P0.05,bP0.01；vs CKD2 group，c P0.05；dP0.01；vs CKD3 group，eP0.05；f
12、P0.05），差异无统计学意义；各组之间24小时尿蛋白定量两两比较CKD1期组CKD3期组CKD2期组CKD4 期组，且均有统计学意义（PCKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（PCKD2期组CKD3期组CKD4期组，且均有统计学意义（PCKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（PCKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（PCKD3期组CKD2期组CKD1期组，且均有统计学意义（P0.05）。而CKD1期，CKD2期，患者血钾水平虽然有明显升高趋势，但是血钾水平均处于正常范围内，CKD3期组，CKD4期患者血钾水平明显高于正常水平。2.CKD1期组、
13、CKD2期组、CKD3期组、CKD4期组患者肾组织-SMA的平均光密度值的相互比较（Tab.2)Tab.2:comparison the average optical of -SMA in Kidney tissues and carotid intima thickness of CKD1、CKD2、CKD3、CKD4 patients（s）组别动脉壁-SMAcIMT(mm)肾小管损伤指数CKD10.28160.01610.92120.14010.12160.0161CKD20.26810.0990 a1.61370.5014 a0.11810.0390 aCKD30.21720.0512
14、 ac2.21470.4116bd2.27120.0541 bdCKD40.19160.0301 ace2.81470.8016bdf3.19160.0401 bdfNote:vs CKD1 group，a P0.05，bP0.01；vs CKD2 group，c P0.05，dP0.01；vs CKD3group，eP0.05；f P0.01所有标本组化以及PAS，PASM,染色均大致为同一平面的肾组织结构，镜下观察均有2条以上肾活检组织，每张片子内肾小球数目均大于5个，平均肾小球数目188个，CKD1期患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见棕黄色的颗粒物沉积，颗粒较粗大，图像分析结果平均光密度
15、值为0.28160.0161。PAS以及PASM染色可见相应部位小动脉壁无明显增厚，动脉各层结构清晰，肾间质内可见少量炎性细胞浸润，无水肿，无萎缩，无纤维化，少量的尿蛋白以及红细胞管型。CKD2期患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色的颗粒物沉积，但动脉中层颗粒物沉积较CKD1期患者稀疏，图像分析平均光密度值为0.26810.0990。PAS以及PASM染色可见相应部位小动脉壁内膜轻度增厚，中膜增厚，内膜厚度小于中膜。CKD3期组患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色颗粒物沉积，中层颗粒物较稀疏，图像分析平均光密度值为0.21720.0512， PAS以及PASM染色可见组化染色组织相应部位小
16、动脉壁内膜增厚较明显，中膜结构欠清晰，内膜厚度小于中膜。肾间质内可见弥漫的炎性细胞浸润，间质明显水肿，部分肾小管肥大，肾小管萎缩面积可达40%。CKD4期组患者免疫组化示肾内小动脉壁各层可见黄色颗粒物沉积，颗粒物十分稀疏，染色浅，图像分析平均光密度值为0.19160.0301， PAS以及PASM染色可见组化染色组织相应部位小动脉壁内膜增厚较明显，中膜结构欠清晰，内膜厚度近似中膜。各期CKD组两两比较，动脉壁-SMA的表达平均光密度值均有统计学意义(P0.05），并且发现随着肾脏病的进展，动脉壁-SMA的表达逐渐减少。3.讨论-SMA是一种细胞骨架蛋白，主要分布于肌纤维母细胞、平滑肌、肌上皮细
17、胞以及其他基底细胞中，是构成微丝的重要组成部分1。-SMA在正常肾脏中仅有极少的表达，血管平滑肌细胞以收缩表型和合成表型两种形式存在。在胚胎时期主要是以合成表型为主，随着机体各方面的逐渐成熟，逐渐转变为收缩表型，一旦机体发生某些特异的变化，血管平滑肌细胞又可以从收缩表型转化为合成表型2。目前主要研究证实，-SMA在不同的表型中表达比例有较大差异，因而-SMA可以作为判断血管平滑肌细胞表型的重要依据3。-SMA绝大多数在肌纤维母细胞之中表达，因此可以作为肾脏上皮间质细胞和基质细胞之间转化的依据4。近年研究证实: 上皮细胞能够发生表型转分化，表达-SMA5。如小鼠的肾小管上皮细胞能够转化成肌纤维细
18、胞，在此过程之中，小鼠的肾小管上皮细胞表达-SMA的同时使基底膜脱离，转化成肌纤维细胞6。正常的肾脏发育过程中伴随着间质细胞和上皮细胞之间表型的转化; 在肾间质病变过程中也可伴有上皮细胞表型之间的转化，最终成为肌成纤维细胞，同时向肾间质移动，参与纤维化的发生发展。本研究通过免疫组化染色后发现，各组慢性肾脏病患者动脉壁-SMA表达的平均光密度值两两比较均有统计学意义(P0.05），并且发现随着肾脏病的进展，动脉壁-SMA的表达逐渐减少。表明-SMA的表达与CKD严重程度呈平行关系，提示监测CKD患者-SMA水平的变化有助于判断肾脏病变的严重程度。同时通过研究PAS以及PASM染色发现，各组患者肾
19、间质损伤指数逐渐上升，进一步证实随着慢性肾脏病的进展，其可能机制是在病理情况下，肾小管上皮细胞的外环境发生了改变，进而使维持机体生理功能的细胞因子失去平衡，抑制了保持上皮细胞基本形态特征的基因表达，使得表达肌成纤维细胞表型的基因得到释放，从而加重了CKD的发展。目前研究认为，动脉粥样硬化是一种全身性的疾病，可引起肾脏微血管动脉粥样硬化，随着损害加重，可导致肾小管萎缩、肾小球硬化、肾毛细血管襻减少和间质纤维化，并最终导致肾小球的数目不断减少，使肾功能下降和肾体积缩小7。CKD是一种全身性慢性微炎症状态，其与CKD患者动脉粥样硬化、脑卒中等多种心脑血管事件的发生有着密切的关系，cIMT已被认为是评
20、估CKD严重程度和预后的可靠指标。由于心脑血管疾病CKD患者主要死亡原因，因此对CKD患者进行心脑血管疾病预防监测显得非常重要8。有研究认为CKD患者冠心病发病率明显增高，冠心病患者超声检查颈动脉钙化程度、斑块面积及斑块表面状态是评估心脑血管疾病发生发的一个很重要参数9。另有研究得出，在颈动脉和冠状动脉粥样硬化斑块内绝大多数外膜巨噬细胞、内皮细胞、以及某些泡沫细胞、平滑肌细胞和脂肪细胞中均发现了AA表达10。Bax 等研究显示CIMT增加能够加速增龄性肾脏体积缩小和肾功能的减退，CIMT增加是肾脏健康独立的危险因素11。cIMT是一项早期反映动脉粥样硬化的无创伤指标，cIMT的改变早于斑块的发
21、生。由于颈总动脉位置较浅表易于暴露，且无其他脏器的遮挡和干扰，故检测cIMT是一种较好的无创伤方法，图像可清晰的揭示动脉粥样硬化程度12。本文的研究结果显示CKD患者随着肾功能的恶化，cIMT逐渐升高，且其升高的程度与CKD严重程度成平行关系，提示CKD患者的严重程度与颈动脉内膜病变关系密切，对判断CKD严重程度、指导治疗、评价疗效等有一定参考价值。因此，肾内小动脉-SMA的表达的变化可能参与了CKD的发生发展。联合检测肾内小动脉以及的表达程度与颈动脉内膜厚度的关系可为CKD患者发生心血管意外的可能性提供一定的依据。参考文献：1.Badid C, Desmouliere A, Babici D
22、, et al. Interstitial expression of SMA: an early marker of chronic renal allograft dysfunctionJ. Nephrology Dialysis Transplantation, 2002, 17(11): 1993-1998.2.Dugina V, Alexandrova A, Chaponnier C, et al. Rat fibroblasts cultured from various organs exhibit differences in -smooth muscle actin expr
23、ession, cytoskeletal pattern, and adhesive structure organizationJ. Experimental cell research, 1998, 238(2): 481-490.3.钱桂生.内科学M .北京：人民卫生出版社,2005:151-154.19.4.Akpolat N, Yahsi S, Godekmerdan A, et al. The value of SMA in the evaluation of hepatic fibrosis severity in hepatitis B infection and cirrho
24、sis development: a histopathological and immunohistochemical studyJ. Histopathology, 2005, 47(3): 276-280.5.Pucilowska J B, Williams K L, Lund P K. Fibrogenesis IV. Fibrosis and inflammatory bowel disease: cellular mediators and animal modelsJ. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liv
25、er Physiology, 2000, 279(4): G653-G659.6.Agarwal C, Britton Z T, Alaseirlis D A, et al. Healing and normal fibroblasts exhibit differential proliferation, collagen production, -SMA expression, and contractionJ. Annals of biomedical engineering, 2006, 34(4): 653-659.7.张磊, 韩雅玲, 荆全民, 等. 不同状态肾功能与冠心病发病率及
26、冠状动脉病变严重程度的分析J. 中国介入心脏病学杂志, 2012, 20(1): 4-8.8.Gurkan G Ozan O,Kenan B,et al. A Rare Cause of Recurrent Hematuria inChildren:Nutcracker Syndrome J.Journal of Tropical Pediatrics,2010,56(4):275-277. 9.程纯,吴士尧.普伐他汀对冠心病患者颈动脉粥样斑块的影响J.中国临床药学杂志, 2001, 10(3): 140-143.10. 霍光, 陆恩祥. 颈动脉粥样硬化与冠心病的相关性J. 辽宁中医药大学学报, 2013, 15(12): 218-219.11.BaxL ,Van der Graaf Y, Rabel in kA J,et al.Influence of ather osclerosis on age- related changes in renalsize and function J . Eur J Clin Invest,2003,33 (1):34-409.12.谢金会,周祖邦,张学兰,等.血管回声跟踪技术定量检测冠心病患者颈动脉弹性预测冠状动脉早期病变的研究J. 临床超声医学杂志, 2013, 15(2): 95-97.
