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1、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用,P、97教师：*,生物化学与分子生物学实验室 CQMU 2008,一、实验目的,学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点 学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制 实验的设计思路和方法,二、实验原理,抑制剂和底物结构相似，可与底物竞争结合酶的活性中心，阻碍酶-底物复合物形成,酶的竞争性抑制作用,抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力，以及抑制剂与底物浓度的相对比例（I/S）,HOOCCH2CH2COOH,HOOCCH=CHCOOH,FAD,FADH2,甲烯白MBH2（无色）,甲烯蓝MB（蓝色）,在无氧条件下以甲烯蓝褪色时间判断琥珀酸脱氢酶活性高低，观察竞争性抑制作用,丙二
2、酸HOOCCH2COOH,琥珀酸脱氢酶,三、实验步骤,1.酶提取液的制备 处死大白鼠，分离出肌肉。制备匀浆液。,.酶促反应及竞争性抑制作用 取试管6支，按表所列步骤操作。加液体石蜡以隔绝空气37水浴保温 随时观察并记录各管褪色时间！,3.实验记录和结果分析,酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？各管的褪色情况有何区别？为什么？丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？本实验中5号、6号试管的作用是什么？,四、结果分析,1、酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？2、各管的褪色情况有何区别？为什么？3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型 及其特点是什么？如何证明的？4、本实验中5号、6号试管的作用是什么？,五、注意事项,加试剂时看清底物与抑制剂的浓度。注意随时观察记录各管褪色时间。37水浴保温过程中，不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。实验结束后一定洗净试管内的液体石蜡。,Lets begin！,开始！,
