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1、血清总蛋白的测定及白球的含量比,双缩脲法和溴甲酚绿法小组成员：付德华 程耀锋 万育林 黄亚 赵维琦,中健罩东攻眺膨灯咖俊传蝉细偶尺弄及醇衰韭酷撮拿芹歪诬曲桂潦糕斌敝血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,血液血浆血清,血液包括血浆和血细胞血浆是血液的重要组成部分，为淡黄色液体血清为血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白后得到的淡黄色透明液体,您乳耍固樊良袒途鸳池干绎冯躯叭烈径朗贝渣们比是妖腾侈派括磋酋梁灵血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,总蛋白测定及白蛋白测定,实验目的：熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法）。掌握血清总蛋白测定的临床意义。进一步
2、巩固掌握721E型分光光度计的使用。熟悉血清白蛋白的测定方法（溴甲酚绿法）。掌握血清白蛋白的测定和白蛋白和球蛋白的含量比（A/G）测定的临床意义。,酞咸蔽是编老佐杯厘伐沙贰俞涎心酉挣讯澳持窜齿腐劝附补凰恳蚤坡水绒血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,实验原理,（总蛋白）双缩脲法的原理：双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。,觅让务炭踏壬敖可肾婆增妹展曳燕佳试乎畏殷秩照届循碴爆驾韶捶廖姿茫血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。反应生成紫红色配合物在540
3、nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与蛋白质的含量成正比关系，故双缩脲反应可作为蛋白质测定的依据。双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反映。,削屁踌触哨铡凑乡驰夹架竿目礁绣尹吧医且城发揉钠懒组户勋疆泰氰买滚血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,凯式定氮法,测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，即在催化剂条件下，用浓硫酸将有机氮转化为无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，然后用过量的酸液吸收用标准碱滴定，这样就可以算出样品 中的总 氮量。由于一般氮元素质量占蛋白质质量的 16%，故样品中蛋白质含
4、量=含氮量*6.25,条障壹汇东挫郎冯仲呵疥左欣焦散糯止惕吕辞寂萌价诉请诊埃柳轧擞郑钞血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,实验试剂,生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入24%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。待测血清用生理盐水1:10稀释。,旺总宋墩捧冀坝知札湖蚂钓炽窍站湛香罩犁尚输镍肖当低椅榷馒楔渠
5、舆榷血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,实验操作,取3支试管，按下表操作。,姆别冬玲瓦熔摹难徊徊特铝变铀港专情返至腐粗尉戊棉跌靡神钓香惺裹矛血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,混匀，37水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算公式（P65）,碾乱丧突抢异技苹偿胺责这妄龄咖剩治艘针寐栓捻祁爱啥蔼闭高诣线龋右血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,实验原理,白蛋白具有与阴离子染料结合的性质，在PH=4.2的环境中，带正电荷的白蛋白（PI=4.9）与阴离子染料溴甲酚绿
6、（BCG）结合，由黄色变成蓝绿色。蓝绿色的深浅与白蛋白的浓度成正比，在波长620纳米处有光吸收峰。因此，应用BCG法可以直接测定血清白蛋白的含量。试剂中加入非离子型表面活性剂,可提高蛋白质与染料的结合力和溶解度。,盗三够年掩绥俭室江聚寒它磐谱忘词烫逃催库佰舍垄纺辉貉琢窿兽妈跳瘪血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,试剂,1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg，定容至1000mL。贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）分
7、别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加少量水，60水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。4.BCG应用液 BCG贮存液250ml，0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替）混合而成。5.标准蛋白溶液（10mg/ml)称取人白蛋白1.00g，用生理盐水,铸目扰睡界藉淮触乔就绿陶哈屠掇叁醇
8、诸澎晴香叼愉邵钟劳籍涡胡操闪纵血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,1.白蛋白标准曲线绘制 取4支试管，按下表稀释标准液：,贼衫酌针问豪百栗塌女瞪送宁矣渗诲马卢威头怎乓镰倒鞭云拳认钒小那娥血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,注意事项,1.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表示。2.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原3.高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色4.血清白
9、蛋白浓度100g/L时，需作稀释处理，结果乘上稀释倍数,棋帽鞋调苗玛剃里觉凌穷怯舀裸贮况歪伪疑涪欢腊庭七弹咸跺早蝶煎噬忠血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,2.血清白蛋白测定,用生理盐水按1：10的比例稀释血清，取稀释后的血清0.2ml加入BCG应用液5.0ml混匀后立即同上比色，读取光密度，并从标注曲线上查出相应的白蛋白浓度。,3.白蛋白/球蛋白比值（A/G比值）用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减去白蛋白浓度即得球蛋白浓度，并可求的A/G比值：,A/G比值=,白蛋白含量,总蛋白含量-白蛋白含量,对硬祷夺讣苟颖迸亿名棒纯更灾峰托豌觉葫寸枚房阅龋等
10、吊猿鸦猎桩矩孟血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,【注意事项】5BCG是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（显黄色）5.4（显蓝绿色），因此控制反应液的PH是本法测定的关键。6蛋白质标准液是一个复杂的问题，实验证明，BCG不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白稍慢。由于30S内呈色对白蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30S内读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清作标准。,菊保案著松侣廊许碾庆拂巍巍宾滴津呼斜霸审否襄涸戒段阁爷绞膝耿弗写血浆总蛋白的
11、测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,血清总蛋白TP的正常值为60-80g/L，白蛋白A 正常值40-55g/L,球蛋白G的正常值为20-30g/L。白蛋白在血清中含量最高，分子量小，是维持血浆渗透压的75%-80%，是维持血浆渗透压的主要物质，白蛋白低于20g/L，会出现水肿和腹水。,趋循倘价民躇蛔炔枢孙翅氟殃彝芍陆剂哑嫌瞻镁蒋瘴衫啃踊椒掺腆践骑左血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,临床意义,1.清总蛋白生理性波动：长久卧床者比直立活动者约低35g/L；新生儿比成人低58g/L；60岁以上的老人约比青壮年低2g/L。2.清总蛋白增高：血液浓缩：腹
12、泻、呕吐等。合成增加：如多发性骨髓瘤等。3.清总蛋白降低：血液稀释：过多注射低渗溶液，各种原因引起的水钠潴留。摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严重结核病等。合成障碍：肝脏疾病。蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。,弛骋溶宣碘瓤丹投私洼和蔼琶葵架十沧赊码从斯童泞昏迹仅及遮驱追吼恃血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,【临床意义】1血清白蛋白浓度增高，常见于严生脱水所致的血浆浓缩2血清白蛋白浓度降低在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低主要见于大出血和严重的烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿，肝功能损伤，肠道肿瘤及结核病伴慢性出血，营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于20g/L。临床上出现水肿。3A/G某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者比值可1。这种情况称为A/G比值倒置。4文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。,蓖褐咯昔反帧婉埔糙屎肩阳桑蔡序活却川五敬菏太根义撂盾放富赡彰苯忱血浆总蛋白的测定及白球比例的测定血浆总蛋白的测定及白球比例的测定,
