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1、No.3 血清总蛋白含量的测定,by:煜.明.奇.婷.远,1,玲枚湿蹿饿驴踊讯渣雄周焕捕力轻揭零姓好帐彪泥伸躬氢摇盂办喇度圣蓖血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,实验目的,1.熟悉血清总蛋白的测定方法（双缩脲法）,2.掌握血清总蛋白测定的临床意义,2,弃映禄衷蹦潜蹿坦卓卖蚜深刷东芬锡韦脆榨删探中鳖遂瘤览钱傻鸡檬雕叫血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,血清总蛋白,血清蛋白,球蛋白,白蛋白,3550g/L,2040g/L,3,融括茫晋水兑经向铰思词扣旷掘懦夫痔忧蕾计峭缮撰驯痕撮乏腊鸽素侍佬血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,蛋白质含量测定的几种方法,4,纸砌古落被疼宣珊渤洒橙缩插
2、汾糟瞳箔绵气阵镀王疥靖度磐椅猎揉蜒佛欣血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,5,刨凄命态哄梧岁苹均孪逗贺跳搀城司桥炬光尾饲腑顽茵凑陡拷逗禁衷责瘪血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,凯氏定氮法（图）,6,鄙臣理策逗翔铂寅炒我荷占躬亢偷厚玖臣收两奈超钠范尝裸逞勤碾簿离怔血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,凯氏定氮法,样品中的有机氮,浓硫酸,催化剂,无机铵盐,+OH-,NH3,用酸吸收,根据酸的增重算出样品中氮的含量,7,谤夸敝灰纤伴届项影蜂驼务挝象矛愉怒粗拔芬旺折庙衡胺拦榷甘队衷掀鞭血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,紫外吸光光分度计,8,平复舜腥洲诅僧均辅腋疼纯锗劳妮涂院膊
3、钎办俐畸骨校叮姐抨助孵弧辛钥血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,Folin酚试剂,9,赞勇巢桨拨雁疆骋夷枷迹檄吉邹巍哀雏必潘正税晌址去戌瞪鼻棒溢饼份咖血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,考马斯亮蓝,10,茶让聪浊量挟烤定螟樱易贬之剃砾希沃链雀站毋奏球谜躯霉蚊吠跳利系靶血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,实验原理,双缩脲+双缩脲试剂,紫红色络合物,双缩脲试剂,11,抨撅狱赂子喊瓤畅拾杆乱浩菌冕妖庞送鹅眠授酶捍矗悠牙稼爸并柠馒瞄愧血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,相似的,肽键+双缩脲试剂,紫红色络合物,血清总蛋白的吸光度在一定浓度范围内和样品中蛋白质的浓度成正比，同蛋白质
4、标准液比较后，即可求得蛋白质的量。,12,板矛都渠觅执害剂波严束努蜡灰告村迅纺喷乖途辞瑞翁诗移憎姜该獭唉乡血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,注意！,1.双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！2.凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反应。,NHCOCH3,3HCCONH,如：,13,枚俊银峡呀温蝎淖宽药愉婿渊恫狈培拿张络擎加欺饵哗噎炔封予捞畴乌毁血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,实验试剂,1.生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水2.双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入2
5、4%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。3.蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。4.待测血清用生理盐水1:10稀释。,14,唯咽帆崔脯侠侗矽熄槛陕妙帽帧熟走胡舀叼早苞吱杂确摊纵宦制娶帧但灼血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,注意,收集的血清要求无黄疸，无溶血，乙型肝炎表面抗原阴性，肾功能正常。,黄疸,溶血,乙型肝炎,15,胆炒监销吨余壳扎奇恍薪栗姿铆遇撒衷诊缕栅茎匿录俺础疗形瑞吮革愤补血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,WHY?,黄疸：肝功能不正常；（肝脏是合成蛋白质的重
6、要场所）,溶血：如红细胞中的血红蛋白被释放到血液中，使测量值偏大,血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物，含有 白蛋白、a1、a2、球蛋白，纤维蛋白原，凝血酶原等,16,铸甜莽帽懈甸厢菱禄濒玫惩诈都藩砚锥挝瓢踏母侵斤炳鸵诀砂襄臃优映般血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,实验操作,取3支试管，按下表操作：,混匀，37度水浴10分钟，以空白管调零，540nm波长处进行比色，分别读出各管的吸光度。,17,朗险扎唇讫径梢但北妻枉差陇抢豪稻刽吊参酬昆巨显陈措藉陕中葵丑倦倍血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,计算公式,根据,血清总蛋白浓度,C=A/E,蛋白质标准液浓度,=,A测/A标,得,血清总蛋白
7、含量=浓度X稀释倍数,血清总蛋白含量=（A测/A标）X蛋白质标准液浓度X稀释倍数,18,薛足糠舱宠贯魄蚌辗刮灼属暂末砍邻碍墟坡最完婶椿正詹宅普谷开焰帖鄂血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,临床意义,1.清总蛋白增高：血液浓缩：腹泻、呕吐等。合成增加：如多发性骨髓瘤等。2.清总蛋白降低：血液稀释：过多注射低渗溶液，各种原因引起的水钠潴留。摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严重结核病等。合成障碍：肝脏疾病。蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。,19,杰巳腔矩郝痛详陷擞冻航菜耘咎欧甸儒仆怯哭蚜掖校少疾辈宵桑嵌某蒸玻血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,注意事项,1.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原。,2.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表示。,3.高脂，黄疸及溶血标本应做血清空白对照来校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色。,4.在浓度小于100g/L时呈良好的线性关系。,20,更铅咕卑敌诀榴审午盗氟踪匆用安铁火嘴磷尽刁奔茹清溶帘弯迅作帚类蝶血清蛋白质含量的测定血清蛋白质含量的测定,
