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1、实验三,人体x-染色质的观察,一.实验目的,观察与区别X染色质：通过实验初步掌握简易方法，识别其形态及所在部位，为进一步研究人体染色质的畸变与疾病提供参考条件。,1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞核间期有一个凝缩的深染小体，而在雄性的细胞中没有。后来了解，在雌体中的两条X染色体在间期时有一条(或这条的大部分)处于凝集而不活动状态，从而形成了这种X-染色质(或称性染色质、Barr小体)。,二.实验原理,1932年美国遗传学家首先在果蝇中发现了剂量补偿效应，并把它看作是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特有的一种遗传效应。剂量补偿效应：在XY型性别决定机制的生物中，使性连锁基因在两种性别中有
2、相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。,进一步研究发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体；Lyon假说：1961年由Lyon提出，又称单个活性X染色体假说。1正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一条有活性(activation X,Xa)，另一条失活(inactivation X,Xi)；2失活是随机的；3失活发生在胚胎发育的早期；4杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。,人类正常的男女体细胞中，分别有XY和XX性染色体，女性的两条X染色体中，在间期也有一条不表现活性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以显示，成为便于观察的X-染色质（Barr小体）。在个别的雌或雄体中
3、，有多于2条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余都将形成X-染色质，以维持剂量补偿。,X-染色质的形态：,1.结构致密的浓染小体，轮廓清楚；2.大小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠近内侧；3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形及双球形；,MALE,FEMALE,三.实验材料,1.女性口腔颊部黏膜细胞2.毛发根部细胞,四.实验仪器及试剂,仪器:显微镜 试剂:1M盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红,五.实验方法和步骤,1.口腔颊部黏膜细胞的观察：a.刮取口腔黏膜细胞:漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞，原位刮2-3次，分别涂抹在干净载片上，每次可涂1-2片，涂抹范围约盖片大小(男性做对照)
4、。b.染色:待稍干后，滴加1-2滴改良苯酚品红，染色10-15分钟。,c.压片:加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。d.镜检:镜下检测典型的可数细胞，标准是：核质呈网状或细颗粒状分布；核膜清晰、无缺损；染色适度；周围无杂质。,2毛发根部细胞的观察：拔取一根带有毛根的头发，自基部截取2cm左右置载片上，再加一滴1M盐酸解离5-7分钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水清洗3-5次，滴加一滴染液染10-15分钟，吸取多余的染料，再覆以盖片，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。,六.实验结果,1.观察50个女性可数细胞，同时观察50个男性者为对照，分别计算显示X-染色质细胞所占的百分比。2.观察中选绘4-5个典型细胞，示明X-染色质的形态部位。,Barr小体,Barr小体,Detection of sex chromatin by Thionin stain 400,七.实验分析与讨论,1.分析此次实验成败的原因。2.此次实验有哪些地方可以改进?,八.思考题,为什么雄性的一条X-染色体不浓缩？它的合理的解释是什么？它的遗传学意义是什么？,九.参考文献,1.遗传学实验 高等教育出版社2.遗传学实验方法和技术 高等教育出版社,
