《【SN商检标准】snt 1016.12001 出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验方法 气相色谱法.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【SN商检标准】snt 1016.12001 出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验方法 气相色谱法.doc（5页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、Method for the determination of carbadox residues in meats and meat productsGfaosrcehxrpomrattographySN/T 1016.1 2001前言本标准是按照GB/T 1.1 1993标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定及SN/T 0001 1995出口商 品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定的要求编写的，其中测定方法是参考国内外有关文献，经研究、改进和验证后制定 的。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国际上对肉及肉制品中卡巴氧及其代谢
2、物残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的。 本标准的附录A是提示的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：郑自强、唐红芳、朱晓雨、朱宏、丁慧瑛。 本标准首次发布。1 范围 本标准规定了出口肉及肉制品中卡巴氧残留量检验的抽样、制样和气相色谱测定方法。 本标准适用于出口猪肉中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)残留量的检验。2 抽样和制 样2.1 检验批以不超过2 50为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征。如包装、标记、产地、规格和等级。2.2 抽样数量批量/件最低抽样数/件125126100510125
3、010251500155011 000171 001 2 500202.3 抽样方法按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件中取一袋作为原始样品，其总量不少于2 k。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交 实验室。如每件中无小包，或有小包装但每袋质量超过2 k者，可用灭菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于100原始样。混合原始样的质量不少于2 k。加封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备，g 混合后置于洁净容器内，作为混合出口肉及肉制品中卡巴氧残留量 检验 方法气相色 谱法从所取全部样品中取出有代表性样品约1 k，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容
4、器内作为试样。密封并标明标 记。2.5 试样保存3 测定方法将试样于-18以下冷冻保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。用碱水解法将卡巴氧代谢物喹喔啉-2-羧酸(QCA)从样品中分离出来，接着用乙酸乙酯抽提并用pH 6.冲液反抽提，用离子排斥色谱法分离。用乙酸乙酯抽提柱洗脱液，浓缩提取液，用甲醇化的硫酸使QCA衍生化，所得甲酯衍生物经再抽提后用电子俘获气相色谱法测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 甲醇。3.2.2 浓硫酸。3.2.3 乙酸乙酯。3.2.4 柠檬酸：C6872。3.2.5 氢氧化钠
5、。3.2.6 浓盐酸。3.2.7 盐酸溶液：1 mol/，用水稀释83.3 m浓盐酸至1 000。mL3.2.8 氢氧化钠溶液：3 mol/，溶解120氢g 氧化钠于适量水中并稀释至1 000。mL3.2.9 柠檬酸溶液：1 mol/，溶解21.0柠g 檬酸一水合物于1 000水mL中。3.2.10 柠檬酸缓冲液(pH6.0)：0.5 mol/，L 用5 mol/氧化钠溶液(约5.5 mL调节100 mL 1 mo柠l/檬L 酸溶液至pH6.0，加水到200 m。3.2.11 甲醇-水(10+90)：用水稀释10 m甲醇至100 m。3.2.12 甲醇-硫酸(97+3)：用经无水硫酸钠干燥过的
6、甲醇稀释3.0 m硫酸至100 m当天制备，在加入酸以前将甲醇用冰浴冷却。3.2.13 无水硫酸钠：650灼烧4，h 置于干燥器中备用。3.2.14 AGM-P50树脂：100目200目。3.2.15 喹喔啉-2-羧酸(QCA)标准品：已知纯度97%。3.2.16 喹喔啉-2-羧酸标准溶液：准确称取适量的喹喔啉-2-羧酸标准品，用甲醇配成浓度为100 /mL喹喔啉-2-羧酸的标准储备液，根据需要再用 甲醇稀释储备液，配成适当浓度的标准工作液。3.3 仪器和设备3.3.1 气相色谱仪：配有电子俘获检测器。3.3.2 组织捣碎机。3.3.3 离心机。3.3.4 分液漏斗：125 m。3.3.5 旋
7、转蒸发器，具温控水浴。3.3.6 浓缩瓶：250 m。3.3.7 锥形瓶：150 m。3.3.8 离心管：具塞，10 m25 m。3.3.9 离子排斥柱：25 c10 mm (i玻d)璃柱，下端垫一小团玻璃棉。将7.0 g AG-M5P0 (10目200目)树脂于1 mol/酸中调成浆，并将其移入3.1 方法提要柱中，用一根玻璃棒将柱子装填至10 c高，并用玻璃棉盖住树脂床。保持液面在树脂的上面。3.4 测定步骤3.4.1 提取和净化将碱性水解产物于冰浴中冷却，用4 m浓盐酸酸化至pH1(至酸碱试纸呈深红色)。于酸化的水解产物中加30 m乙酸乙酯，加塞，振摇提取30s，静置分层，将上层液体滤入
8、一125 m分液漏斗中。待分层后，将下层水相放回样品瓶中，再加20 m乙酸乙酯，加塞，振摇提取30将上层液体并入分液漏斗中。静置分层，弃去水相。，s 静置分层，于乙酸乙酯提取液中加5 mL 0.5 mo柠l/檬L 酸缓冲液(pH6.0)，振摇，放置使下层清晰(10 min将水相收集于25 m具塞离心管中。另用5 mLpH6.0的缓冲液再提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并水提取液于同一离心管中，加2 m浓盐酸，混匀，供下述柱层析分离用。将酸化的水提取液移入离子排斥柱中。放出提取液使液面至树脂床顶部。用20 mL 1 mo盐l/酸L 淋洗离心管和树脂，经柱放出。另用20 mL 1 mol/L盐酸
9、再淋洗柱子，弃去流出液。用75 m甲醇-水(10+90)洗脱，此时可将柱子放净，收集洗脱液并转入一125 m分液漏斗中。流出液的流速约为 1.2 mL/mi。n洗脱液中加1.0 m浓盐酸，用350 m乙酸乙酯提取。收集乙酸乙酯提取液于250 m底烧瓶中，于50水浴旋转蒸发器中蒸发至干。3.4.2 酯化用3 m甲醇将残渣洗入10 m心管中，在60水浴氮气流下吹干。加0.2 m鲜配制的甲醇-硫酸(97+3)，加塞，于5560水浴中保温30min。取出，加1.0 m正己烷涡旋混匀30，s 离心(2 000 r/min) 5 ，m取in0.1 m正己烷溶液稀释到1.0 m，供气相色谱测定。3.4.3
10、标准物酯化吸取1.0 m喔啉-2-羧酸标准工作液置于10 m心管中，在60水浴氮气流下吹干。加0.2 m鲜配制的甲醇-硫酸(97+3)，加塞，于5560水浴中保温30 mi。提取和稀释(110)的操作均按3.4.2步骤进行。酯化标准与酯化样品应同时进行。3.4.4 测定3.4.4.1 色谱条件a) 色谱柱：HP-5，15m 0.53 mm (id)1.5 熔融石英毛细管柱或相当的色谱柱；b) 柱温：170（ ）10200(10 min；c) 进样口温度：250；d) 检测器温度：280；e) 载气、尾吹气：氮气(纯度99.999%)；载气流速：6 mL/mi；n 尾吹气流速：40 mL/mi；
11、nf) 进样方式：填充柱进样口进样；g) 进样量：2 L。3.4.4.2 色谱测定根据样液中喹喔啉-2-羧酸含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的响应值均应在仪器检测的称取约5 样g 品(精确到0.1 g)于150 mL三角瓶中，加10.0 mL 3 mol/L氢氧化钠溶液，松松加塞，将其置于100水浴中，加热30 min，浴中水浴面应高于组织试样。线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下喹喔啉-2-羧酸甲酯的保留时间约为4 miA1。3.4.5 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。3.4.6 结果计算和表述用色
12、谱数据处理机或按式(1)计算试样中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)的残留含量： ( 1 )式中：X试样中卡巴氧代谢物(喹喔啉-2-羧酸)的残留含量，mg/kg；A样液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的峰面积，mm2；As标准工作液中喹喔啉-2-羧酸甲酯的峰面积，mm ；2标准品的色谱图见附录A中图c标准工作液中喹喔啉-2-羧酸的浓度，；V样液最终定容体积，mL；m最终样液所代表的试样质量，g。 注： 计算结果需扣除空白值。4 测定低限和回收率4.1 测定低限 本方法的测定低限为0.03 mg/k。g4.2 回收率猪肉中喹喔啉-2-羧酸添加浓度及其回收率的试验数据： 在0.03 mg/k添g 加水平时，回收率为98.3%；在0.10 mg/k添g 加水平时，回收率为93.6%；在0.30 mg/k添g 加水平时，回收率为93.4%。附录（提示的附录） 标准品色 谱图图 A1喹喔啉-2-羧酸标准品衍生物的气相色谱图
