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1、综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务二 水中大肠菌群数的测定,水中总大肠菌群的测定,检验依据：GB/T5750.12-2006方法：多管发酵法,总大肠菌群,总大肠菌群37、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌 粪大肠菌群（耐热-）总大肠菌群 非粪大肠菌群,EC肉汤44.5士0.5,总大肠菌群,MPN（most probable number）最可能数或最近似数总大肠菌群MPN100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数,指示菌（总大肠菌群）,指示菌应具有的条件,和肠道致病菌的来源相同在外界环境中的生存时间长检验方法比较简便,实验目标,掌握生活饮用水总大肠菌群的测定
2、方法掌握水源水总大肠菌群的测定方法判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量,实验内容,1,乳糖发酵试验,4,证实试验,5,结果分析与报告,1,培养基制备,2,乳糖发酵试验,3,分离培养,实验器材,水样生活饮用水、水源水培养基乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基试剂革兰氏染色液、稀释剂等,实验器材,其他无菌工作台、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等,培养基制备,乳糖发酵管双料管单料管伊红美兰平板,放置小倒管并排气,检验程序,生活饮用水接种,乳糖发酵试验,分离培养,证实试验,结果报告,水源水稀释与接种,一、乳糖发
3、酵（初发酵）试验,自来水直接接种10mL水样于双料培养基，每个水样共接种5管水源水加大稀释度，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管,各10ml,1ml,各1ml,水样,1:10稀释水,各1ml,乳糖发酵试验,一、乳糖发酵（初发酵）试验,培养36士l24h士2h观察产酸产气情况不产酸产气产酸产气,第二天,二、分离培养,产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区划线）36士l24h士2h,第三天,三、证实试验（复发酵试验）,观察EMB平板菌落形态深紫黑色、具有金属光泽的菌落紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落淡紫红色、中心较深的菌落,一半进行涂片、染色、镜检,另一半进行接种（证实试验用）,三、证实试
4、验（复发酵试验）,只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管36士l24h士2h,第四天,四、结果报告,观察乳糖发酵管产气情况产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在查MPN 检索表根据证实为总大肠菌群阳性的管数报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）,四、结果报告,5管法结果见表1，15管法结果见表2,四、结果报告,表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN),四、结果报告,表2 总大肠菌群MPN检索表(部分）（总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样）,四、结果报告,稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数表2采用3
5、个稀释度（10mL、1mL 和0.1mL),每个稀释度5管表2内所列接种量如改用100mL、10mL和1mL时，表内数字应相应降低10倍；如改为1mL、0.1mL和 0.01mL时,则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。,四、结果报告,所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大肠菌群未检出。,注意事项,1.无菌操作。2.每递增稀释一次，即换一支1mL灭菌吸管。3.培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。4.接种量在1ml及以下时用单料培养基，接种量超过1ml时用双料培养基。5.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min。,习题作业,1.判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。2.总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。,习题作业,3.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min，为什么？4.单料和双料培养基有什么区别？什么时候使用双料培养基？5.生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？,
