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1、一、消毒与灭菌二、细菌的分类,教学要求,【掌握】消毒、灭菌等基本概念常用消毒灭菌方法及适用范围细菌种、属、菌株、标准菌株的概念，细菌的命名原则和书写规则【熟悉】消毒灭菌的应用【了解】影响消毒灭菌效果的因素,消毒灭菌技术发展历史,1847年 匈牙利人塞麦尔维斯：漂白粉洗手降低院内产褥热死亡率1867年 英国人李斯特：发明石碳酸消毒法，“腐烂是微生物引起的”1886年 德国人伯格曼：蒸汽灭菌法1890年 美国人哈斯特：戴橡胶手套,李斯特,1998年4月，深圳市妇女儿童医院共计手术292例，发生感染166例。致病菌为龟型分枝杆菌。感染原因是浸泡刀片和剪刀的戊二醛配制错误，错把2%戊二醛稀释200倍。
2、2005年12月，上海第九医院专家到安徽宿州市立医院为10例白内障患者实施手术，结果均感染绿脓杆菌，其中9名患者单侧眼球被摘除。感染原因是手术器械不能做到一人一用一灭菌，全用75%的乙醇浸泡手术器械，达不到灭菌要求。2009年10月广东潮阳区谷饶中心卫生院18例剖腹产产妇发生切口感染。原因手术器械等清洗不彻底，手术用刀片、剪刀、缝合线等用戊二醛浸泡，不能达到灭菌效果。,院内感染个案,消毒灭菌是减少院内感染发生的关键,概念,灭菌,消毒,防腐,清洁,无菌及无菌操作,概念,视频:供应室消毒灭菌,概念,灭菌(sterilization)杀灭物体上所有微生物的方法，包括芽胞在内的全部病原微生物和非病原微
3、生物。消毒(disinfection)杀死物体上病原微生物，不一定能杀死芽胞或非病原微生物的方法。,微生物，包括有哪些？,概念,防腐(antisepsis)防止或抑制细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。清洁（cleaning）通过除尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。彻底清洗是保证消毒或灭菌成功的关键,概念,“无菌物品”进入人体内部手术器械、注射器、导管；实验室所用培养基、试剂、器材等。,概念,无菌(asepsis)：不含活菌的意思。无菌操作（aseptic technique)：防止微生物进入机体或物品的操作技术。进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。,擦拭
4、法,消毒灭菌的方法,物理消毒灭菌法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法化学消毒灭菌法 原理及分类,消毒灭菌的方法,热力灭菌法（1）干热灭菌 a.焚烧 b.烧灼 c.干烤（2）湿热灭菌 a.煮沸法 b.巴氏消毒法 c.间歇灭菌法 d.高压蒸汽灭菌法,利用热力破坏微生 物的蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致其死亡。,干热灭菌,a.焚烧：b.烧灼：,红外电热灭菌器,方法：对废弃物可直接在焚烧炉内焚毁；培养用的试管或烧瓶，当开启或关闭塞子时，将试管（瓶）口或塞子，在火焰上来回旋转2-3次，实验室接种环烧灼。,适用范围：污染的废弃物、病理标本、带脓性分泌物的敷料和纸张等的处理，实验
5、室接种环的消毒灭菌；某些金属器械、搪瓷类物品急用时。,视频：灭菌操作,干热灭菌,c.干烤：160170 2小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器等。d.红外线 适用于医疗器械、食具,烤箱,湿热灭菌比干热灭菌效力大,（1）菌体蛋白较易凝固；（2）穿透力大；（3）潜热。蒸气变为液态的潜热,穿透力和灭菌效果比较,湿热灭菌,a.巴氏消毒法pasteurization：用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒 方法:71.715-30s，常用于牛奶和酒类等的消毒。,湿热灭菌,b.煮沸法：1005min杀死繁殖体；1001-2h 杀死芽胞 水中加2%碳酸氢
6、钠，可提高沸点到105c.流动蒸汽灭菌法:,是一种简单、经济、应用最早的消毒方法之一。适用于耐湿、耐高温的物品。,湿热灭菌,d.间歇蒸汽灭菌法：杀死细菌所有繁殖体和芽胞的灭菌法。适用不耐高热含糖、牛奶的培养基。,100 30min37 培养1824h 100 30min37 培养1824h 100 30min,湿热灭菌,e.高压蒸汽灭菌法：103.4kPa,121,1530min，杀死芽胞在内的所有微生物。灭菌效果最好、目前应用最广用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。,不能灭活朊粒,临床上最常用的一种灭菌法，利用高压及饱和蒸气的高热所释放的潜热灭菌。,手提式高压蒸汽灭菌器,小型全自动高压灭菌器不向
7、外排放蒸汽和热力,大型全自动高压灭菌器,下排气式压力蒸汽灭菌器,预真空压力蒸汽灭菌器,手提高压蒸汽灭菌器,灭菌效果监测,灭菌效果监测高压蒸汽灭菌法:嗜热脂肪芽胞杆菌环氧乙烷法：枯草芽胞杆菌,辐射杀菌法,a.紫外线:波长240280nm，260nm最强穿透力差，适用于实验室、无菌室、培养箱等的空气消毒及物品表面消毒。注意防护：紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用,改变DNA分子构型，干扰细菌DNA复制转录,紫外线消毒,实验室,杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。空气消毒：每10m3空间用30W紫外灯照30min物体表面消毒：紫外灯与物体的距离1.2m。应将物品 摊开或挂起，使其表面直接受到照射,生物安全柜
8、,辐射杀菌法,b.日光，微波 c.电离辐射:射线、射线（如60Co）等，用于一次性医用塑料制品，食品保存。穿透力强，可在包装后灭菌辐照食品。,滤过除菌法,滤菌器filter 薄膜滤菌器：孔径 0.1m-0.45m 硝基纤维素膜。常用0.22m深层滤器:石绵、玻璃滤菌器 用途：不耐高温灭菌的血清、细菌毒素、抗生素，以及空气等的除菌。不能除去支原体和病毒。高效空气过滤器HEPA应用于无菌手术室、生物安全柜。,高效空气过滤器：应用于无菌手术室、生物安全柜等,干燥与低温抑菌法,低温法:贮藏菌种冷冻真空干燥法-最好的菌种保存方法 加入冷冻保护剂-20-70,冻干菌种,低温冰箱,消毒剂杀菌机制,消毒剂的分
9、类,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,常用化学消毒剂,化学消毒灭菌法,如皮肤、粘膜、排泄物及周围环境、光学仪器、金属锐气和某些塑料制品的消毒。,用化学药品进行消毒灭菌的方法，凡不适用于热力消毒灭菌和不怕湿的物品均可选用此法消毒 杀菌机制：（1）使菌体蛋白质变性或凝固；（2）干扰细菌的酶系统和代谢；（3）损伤细胞膜影响通透性。,消毒剂杀菌机制,哪种消毒剂适用？,中效：杀灭细菌繁殖体、结核杆菌、真菌、病毒，但不能杀灭芽孢,低效：杀灭细菌繁殖体、部分真菌、亲脂性病毒，但不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒和芽孢,高效：能杀灭一切微生物，包括芽孢。,消毒剂的分类,1、根据物品的性能和各种微生物的特性，选择合适的
10、消毒剂。,2、严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间及使用方法。,3、消毒剂应定期更换，易挥发的要加盖，定期检测、调整浓度。,4、待消毒的物品必须先洗净擦干，全部浸没在消毒液内，并打开物品的套盖。,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,1、浸泡法,2、擦试法,3、喷雾法,4、熏蒸法,常用消毒剂类型作用机制及种类,常用消毒剂种类及使用,常用消毒剂,高效消毒剂 含氯消毒剂：次氯酸、漂白粉、二氯异氰酸尿酸钠 过氧化物消毒剂：过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯 醛类消毒剂：戊二醛（不腐蚀金属）、甲醛 环氧乙烷：800-1200mg/L 56 6h,环氧乙烷灭菌器（环氧乙烷易燃，有毒）,过氧化氢灭菌器（安全：常温、常压
11、、无毒、无残留 杀菌谱广，杀菌力强）,中效消毒剂含碘消毒剂：碘伏、碘酊醇类：乙醇7075低效消毒剂季铵盐类：苯扎溴铵（新洁尔灭）氯已定（洗必泰）高锰酸钾,常用消毒剂,高危：需进入无菌组织的物品。灭菌 中危：接触黏膜的器械。消毒低危：只接触未损伤皮肤。清洗、消毒室内空气消毒灭菌 物理消毒法：紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；滤过除菌：高效过滤装置化学消毒法：过氧乙酸或过氧化氢喷雾、熏蒸,医疗器械物品的消毒灭菌,消毒灭菌的运用,手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。,消毒灭菌的运用,免洗手消毒液,正确洗手,黏膜的消毒：过氧化氢、洗必泰病人排泄物与分泌物的消
12、毒灭菌:次氯酸钠病人污染物品的消毒:漂白粉、过氧乙酸 饮水的消毒：氯气环境的消毒,消毒灭菌的运用,影响消毒灭菌效果的因素,抵抗力：芽胞-结核分枝杆菌-病毒-繁殖体-真菌,常用杀菌因子对HIV 污染物消毒使用的剂量杀菌因子剂量热（80）72 h紫外线（15 W灯管,距10 cm 处照射）8 min含氯消毒剂（含有效氯500-5000 mg/L）10 30 min碘伏(含有效碘50100 mg/L)1030 min乙醇65%75%溶液 510 min过氧化氢3%溶液 1030 min戊二醛2%溶液 2030 min甲醛5%8%溶液2030 min煤酚皂溶液1%3%溶液1030 min季铵盐类0.1
13、%0.2%溶液30 min 以上,朊粒的灭活,朊粒：无核酸结构,但在宿主细胞内增殖感染性蛋白质对化学因子的抵抗力是所有微生物中最强侵犯中枢神经组织,可引发慢性退行性脑组织病变，如克雅氏病、库鲁病、疯牛病等 1mol/L的氢氧化钠或5%次氯酸钠浸泡1h后，134 高压蒸汽处理2h,微生物实验室的消毒灭菌,实验室哪些常用物品需要消毒灭菌？用何方法消毒灭菌？培养基（耐热、不耐热）、接种环、吸嘴、玻璃研磨器、试管等均为无菌物品。实验室配制的耐热物品常用高压蒸气灭菌法；不耐热用间歇蒸汽灭菌法。微生物室常规工作中产生的医疗废物如何处置？带菌的培养基须先在实验室内高压蒸气灭菌法处理；带菌液体用次氯酸钠（有效
14、氯1000-2000mg/L）浸泡；地面物品表面用含氯消毒剂擦拭和喷洒。,第六节 细菌的分类,细菌的分类原则与层次,细菌分类学（Bacterial taxonomy）是微生物分类学的一个分支，是对细菌进行分类鉴定命名的一门科学。分类（classification）是指根据相似性或亲缘关系，将一个有机体放在一个单元中。鉴定（identification）是指确定一个新分离物是否归属于某个已命名的分类单元的过程。命名（nomenclature）是按照国际命名法规给予有机体一个科学的名称。,分类等级：,界（Kingdom）门（Division）纲（class）目（Order）科（Family）属（G
15、enus）种（Species）,种是最基本的分类单位。但分类单元之间可加入亚门、亚纲、亚目、亚科等次要分类单位。种以下又可分为亚种、变种、型、菌株等,种 细菌分类的基本单位。生物学性状基本相同的细菌群体构成一个菌种。凡是16S rRNA序列同源性 97的两株细菌，即可确定为同一种。属 性状相近关系密切的若干菌种组成属。菌株 同种微生物不同来源的纯种培养。标准菌株或模式菌株 具有某种细菌典型特征的菌株。如：金黄色葡萄球菌ATCC25923（标准菌株）,常见的分类等级概念：,型：按某种细微特征在种内进一步区分。血清型、噬菌体型、生物型、细菌素型。用于流行病学的分析研究。群：不是固定分类单位，按某种
16、生物学特征，把相应的菌株归在一起，组成群。例如：沙门菌血清分群。例：大肠埃希菌:属于原核生物界-细菌域-变形菌门-变形菌纲-肠杆菌目-肠杆菌科-埃希菌属的一个种,分类方法,表型分类：传统分类法（“形态、生理特征”等作为分类依据）数值分类法及自动细菌鉴定法分析分类：对菌体组分、代谢产物组成等分析 质谱鉴定法基因型分类：最精确：16SrRNA序列（细胞“活化石”）分析，G+C mol%亦较常用,肠杆菌科细菌编码的检索方法举例(手工法),葡 萄 糖 赖 鸟 硫 靛 乳 卫 苯 尿 枸产 产 氨 氨 化 基 茅 丙 橼 酸 气 酸 酸 氢 质 糖 醇 酸 素 酸(A)(G)4 2 1 4 2 1 4
17、2 1-+-+-AG 2 6 0AG260 查码 结果为大肠埃希氏菌,临床常用手工细菌鉴定系统(API鉴定系统),API肠杆菌,API非发酵菌,API酵母菌,1、伯杰氏细菌鉴定学手册（Bergeys Manual of Determinative Bacteriology)，D.Bergey（美国细菌学家），1923年第1版，1994年第9版。,2、伯杰氏系统细菌学手册（Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)，Holt（美国细菌学家），1984-1989年编写完第1版共4卷，2001年开始发行第2版共5卷。,细菌分类命名系统,细菌分类命名系统,伯杰
18、氏鉴定细菌学手册（第2版伯杰系统细菌学手册(Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)，本版包括五册，共30篇，主要根据细菌的rRNA、DNA及蛋白质序列进行分类：第一册为古细菌、蓝绿藻菌、光合作用菌和具分支菌属。第二册为变形菌门（Proteobacteria）。第三册为GC比低的革兰阳性菌。第四册为GC比高的革兰阳性菌。第五册为浮霉菌门（Planctomycetes）、螺旋体门（Spirochaetes）、纤维杆菌门（Fibrobacters）、拟杆菌属（Bacteroides）、梭杆菌门（Fusobacteria）。,类，G有细胞壁的真细菌,类，G
19、+有细胞壁的细菌,命名法,采用生物双名法（binominal nomenclature）。具备拉丁化文字的形式和明确的分类等级两个特点，即由一个属名和一个种名构成。属名在前，第一个字母要大写，种名在后，第一个字母小写，斜体表示。,中文译名与此相反：种名在前，属名在后。如：Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 属名 种名 种名 属名Salmonella typhi 伤寒沙门菌 属名 种名 种名 属名,例如Salmonella typhi(沙寒沙门菌)。属名也可用第一个字母代表，如S.typhi等。有时泛指某一属细菌而不特指其中的某个细菌则可在属名之后加上sp，如Salmon
20、ella sp，即表示沙门菌属细菌(sp代表菌种species，复数用spp)；,习题,1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是：A.紫外线照射 B.煮沸5min C.巴氏消毒法 D.流通蒸气灭菌法 E.高压蒸气灭菌法2.灭菌方法错误的是:A.手术室空气-紫外线 B.饮水-氯气 C.排泄物-漂白粉 D.含血清培养基-高压蒸气灭菌 E.温度计-75%酒精3.下述不可能杀灭细菌芽胞的方法是：A.煮沸法 B.巴氏消毒法 C.间歇灭菌法 D.干热灭菌法 E.高压蒸气灭菌法,4.关于紫外线，说法错误的是:a.其杀菌作用与波长有关 c.265-266nm杀菌作用最强 b.可损坏细菌的DNA构型 d.其穿透力弱，
21、故对人体无损害 e.紫外线适用空气和物体表面的消毒5.常用于空气或物体表面的消毒 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 6.常用于基础培养基灭菌 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法7.乙醇消毒剂常用的浓度是：a.100 b.95 c.75 d.50 e.30,8.常用于手术器械的灭菌 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法9.常用于血清的除菌 a.高压蒸气灭菌法 b.滤过除菌法 c.紫外线照射法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 10.将牛奶加热6230分钟的目的是 a
22、.使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收 b.杀灭牛奶中的所有微生物 c.杀死牛奶中的病原菌 d.使牛奶不含活菌 e.防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖,11、破伤风病员用过的敷料最好的处理方法是：A.清洗后消毒 B.烧毁 C.高压灭菌 D.煮沸消毒 E.微波12、对细菌芽胞无效的化学消毒剂是：A.碘伏 B.20%的碘酊 C.甲醛 D.0.5%过氧乙酸 E.2%戊二醛13、某病人因急性肝炎收入传染病院，其信笺、钱币用下列何种消毒方法为宜A.高压蒸气灭菌B.喷雾法 C.熏蒸法D.擦拭法 E.浸泡法14、水中加入哪种药物可提高沸点,减少对金属的腐蚀性A.1%2%碳酸氢钠 B.0.1%0.2%碳酸氢钠C.3%4%碳酸氢钠 D.10%碳酸氢钠E.3%5%碳酸氢钠,复习,繁殖体:具有繁殖能力的菌体芽胞：休眠体抵抗力：芽胞-结核分枝杆菌-病毒-繁殖体-真菌 朊粒消毒要求更高,谢 谢,1E 2D 3B 4D 5B6A 7C 8A 9B 10C11B 12A 13C 14A,
