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1、实验一 MS培养基的配制,一、实验目的,了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。初步掌握培养基母液配制方法。,二、实验原理,植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。,在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即
2、可。,三、实验材料与器具,1、用具器材 灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。2、药品试剂 蒸馏水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。,四、实验步骤,1、母液配制（1）配制10倍1 L MS大量元素母液NH4NO3 16.5 g KH2PO4 1.7 gKNO3 19 g CaCl22H2O 4.4 gMgSO47H2O 3.7 g,配制成200倍1 L母液，依次称取:KI 0.166 g Na2MoO42H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO45H2O 0.005 gMnSO44H
3、2O 4.46 g CoCl26H2O 0.005 gZnSO47H2O 1.72 g,（2）配制MS微量元素母液,配制成200倍l L铁盐母液，依次称取:EDTA二钠（Na2EDTA7H2O）7.46 g FeSO47H2O 5.56 g,（3）配制MS铁盐母液,配制成200倍1 L有机母液，依次称取：盐酸硫胺素（VB1）0.02 g烟酸 0.1 g盐酸吡哆醇（VB6）0.1 g,（4）配制MS有机母液,（5）配制MS有机母液,配制成200倍1 L有机母液：肌醇 20.0 g,（6）配制MS有机母液,配制成200倍1 L有机母液：甘氨酸 0.4 g,0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25m
4、g的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。0.1mg/mL 2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。,（7）植物激素的配制,2、培养基的配制（以1L培养基为例）,1、计量 根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量 mL=培养基中物质浓度（mg/L）1000mL/母液浓度（mg/L）。母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数2、移液 取大烧杯（1L）一只，按照计算吸取母液的量依次
5、吸取各母液置于烧杯中备用。3、称取 称取10g琼脂，30g蔗糖备用。,4、融化 用搪瓷量杯量取600700mL 的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。5、混合 将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到1000mL。6、调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH 或HCl溶液调pH 为6.0。,共分4组，每组配750mL培养基，每瓶倒25-30mL，共接种28瓶左右每瓶编号1（1/2/3/4）n号,分组情况,3、培养基的分装和灭菌,溶化的培养基应该趁热分装。分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约25 mL-30 mL。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并编号。灭菌：121，15-20 min。,五、注意事项,配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热20-30min），调pH值至5.5，防止FeS04结晶析出。,六、作业与思考,1植物培养基为什么要分成母液分开配制。,
