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1、注射剂生产的无菌管理,陕西省药品不良反应监测中心王 力2010.11海口,讲座的内容,无菌药品生产中污染的来源无菌药品生产、控制中的质量保证各个方面,“无菌”的含义?,一个不含活体的产品是无菌产品没有活性微生物的产品或物体无菌产品意味着“完全无菌”但是即使你检测了每一桶也无法证明真正的无菌,问题:在不均一的产品中取样(例.:无菌灌封,灭菌柜中),操作者对机器运行的干扰房间内的状况(各种活动),样品,好不好,一般取样数量是20个一个批次可包含100,000个,“无菌”的含义?,USP注射剂无菌测试结果,试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法,GMP
2、的要求,流通蒸汽灭菌法不能保证杀灭所有芽胞，是非可靠的灭菌法。采用流通蒸汽灭菌法生产的无菌制剂为非最终灭菌的无菌制剂。,GMP的要求,无菌药品生产中污染的来源,小容量注射剂生产的无菌管理,无菌药品生产中污染的来源,无菌药品生产中污染的来源,无菌药品生产中污染的来源,无菌药品生产中污染的来源,药品可以通过各种方式被污染。如，无效的清洁规程可能会残留产品或清洁剂在设备上。生产操作人员自身带来的污染。,无菌药品生产中污染的来源,生产工人在运输一种物料从一个区域到另一个区域时没有采取适当的预防措施而将污染物带到第二个区域，再或者是浮游粒子通过设施传到生产区域。,人员&无菌生产,以下健康问题禁止进入无菌
3、区域大面积开口的损伤或烧伤（伤风发热时的）唇疱疹严重的头皮屑皮炎,湿疹晒伤(起皮)痤疮真菌/细菌感染咳嗽流鼻涕或者打喷嚏结膜炎,人员&无菌生产,非生产人员的无菌操作意识不强而导致环境、设备、药品的污染；目前的无菌防护装置无法保证人员本身带来的污染。,人员&无菌生产,无菌操作人员不及时消毒或者进入百级操作区域未消毒；无菌操作人员的运动或动作过大会带来尘埃、人体排泄物以及微生物的增加和污染。无菌操作人员可能穿越无菌生产区域净化死角而被污染。,人员&无菌生产,动作过多；人数过多；操作人员经常待在A级洁净区；无菌工艺操作人员在取沉降碟时接触到了地板，未进行手消毒，然后立即实施了干扰操作；,人员&无菌生
4、产,操作人员将无菌镊子拿出无菌区（100级），带入10000级背景区域，放在10000级房间的推车上。这是无菌操作仅有的灭菌镊子。然后，操作人员又在无菌工艺生产线上再次使用这把镊子处理无菌产品。,设备&无菌生产,除菌过滤设备可能存在如下风险：滤芯的除菌效果没有验证；在完整性测试中忽视了过滤系统的完整性测试；在滤芯灭菌后安装过程可能带入污染；,设备&无菌生产,采取一道过滤滤芯，如果破裂后会造成加大的损失；采用一道过滤滤芯，如果放在无菌区可能会对无菌环境引起微生物污染；滤芯的重复使用没有经过充分的验证。过滤操作未尽可能靠近灌装点,设备&无菌生产,一般情况下隧道烘箱有如下风险：隧道内传送带下有许多碎
5、玻璃和微粒；隧道进出口的压差设计不合理，会影响隧道内的热风流向；排风口没有防倒灌设施，在停产时会有外部空气进入污染；远红外加热方式的灭菌隧道内部温差可达到50以上，而且远红外石英管有可能脱屑产生微粒的污染。,设备&无菌生产,湿热设备存在如下风险：有的采用工业蒸汽灭菌，多脏污，有热源；没有进行不同装载方式的灭菌验证，尤其是比较拥挤物品最内部的验证。如一包胶塞、一盒铝盖；空气过滤器的完整性没有测试，穿透后外部空气进入灭菌箱内污染已灭菌的物品；,设备&无菌生产,灌封设备存在如下风险：设备自动化程度不高，人员的污染会加大；设备运行不稳定，会增大微生物污染的机会；设备清洁不净，会出现交叉污染和微生物污染
6、。,设备&无菌生产,无菌操作区灌封管路和器具存在如下风险：软连接长时间使用易老化，难以处理；器具长时间拆卸清洗会对系统密封效果造成影响；灭菌后的存放不当有可能污染；拆卸清洗后安装有可能被人员和环境污染；,工艺&无菌生产,干热灭菌工艺存在的风险如下：干热灭菌验证不彻底，无法确定灭菌箱和所选灭菌条件的除热源效果；灭菌的装载方式影响灭菌效果；隧道灭菌时间控制不好，无法保证灭菌时间；百级泄漏可能造成污染；灭菌隧道的观察窗密封不严密。,工艺&无菌生产,干热灭菌工艺的验证没有考虑刚开始和最后的玻璃瓶的除菌除热源效果，因为此时玻璃瓶后面的隧道是空的，风流流向和温度都不同于满载时的情况；,工艺&无菌生产,湿热
7、灭菌工艺存在的风险如下：装载方式影响灭菌效果，有些物品内部蒸汽无法穿透灭菌；没有进行不同装载方式的验证；,工艺&无菌生产,过滤工艺存在的风险有：没有采用层级过滤，导致终端过滤器微生物数量多，可能出现微生物漏过的可能；采用超滤膜除菌不能达到除菌的要求；有的企业选用 0.2um 的滤膜和滤芯，没有考虑到是绝对孔径的除菌过滤，有可能是相对孔径的滤芯；没有进行除菌过滤滤芯的微生物挑战试验。,工艺&无菌生产,清洗工艺的主要风险有：清洗不彻底，会加大微生物污染风险，导致灭菌不彻底；残留药品清洗不彻底会引起交叉污染。,工艺&无菌生产,无菌操作环境清洁与消毒存在的风险有：清洁与消毒工艺没有经过验证，制定不科学
8、，有可能带来微生物污染；消毒剂不轮换，微生物易产生耐药性；,工艺&无菌生产,环境消毒不到位，死角地方易于滋生微生物；消毒剂对芽孢的杀灭效果需要注意；消毒剂本身、消毒容器具都可能带有微生物；消毒剂长时间存放后消毒效果下降。,工艺&无菌生产,非热灭菌物品的除菌或消毒工艺存在的风险：电子产品和精密仪器受灭菌方式影响很大，可能无法保证无菌水平；物品的退出也有可能污染无菌的物品。,物料&无菌生产,药液在无菌过滤中主要存在的风险有：药液除菌过滤前微生物水平很高，有可能导致过滤后的药液含有微生物；药液如果营养成分比较高，清洁不彻底，有可能致使环境、设备滋生细菌；药液中的微生物种类也有可能导致除菌过滤不彻底。
9、,物料&无菌生产,玻璃瓶的除菌过程中存在的风险有：玻璃瓶有可能在高温下或碰撞挤压下出现肉眼无法观察的裂痕，而染菌。玻璃瓶的灭菌前微生物水平影响灭菌效果。玻璃瓶如果质量不好，高温下易破碎，而影响灌封效果，间接导致药品的污染。,厂房设施&无菌生产,无菌生产环境方面存在的风险主要有:万级背景的局部百级设计，会致使存在很多难以净化的死角，从而引起微生物污染；生产路线过长无菌室、无菌生产区域过大，会增加微生物污染机会；灭菌后的物品不在百级下面运输和存放，会大大增加微生物污染的概率；人流物流以及进出的通道没有分开，会导致污染和交叉污染。,厂房设施&无菌生产,回风口的主要风险有：有许多企业将总回风口放在初效
10、前，当新风压力大、停电时很有可能导致新风倒灌污染无菌区。有许多企业认为采用了电动阀来控制法门防止倒灌，但是还是不能做到万无一失。,厂房设施&无菌生产,无菌生产区域区和非无菌生产区域采用同一回风口，这样非无菌生产区域的非无菌空气有可能进入无菌生产区域而导致污染。,厂房设施&无菌生产,很多企业对于回风口和回风竖井卫生不重视，很长时间也不进行清洁。由于空调风会带走很多尘埃和微生物，这些尘埃和微生物很有可能在回风口和回风竖井沉积，如果不经常清洁，无法保证不会对无菌生产环境产生污染。,厂房设施&无菌生产,高效过滤器的主要风险有：高效过滤器生产厂家仅用钠焰法检漏是不够的，不能完全证明其完整性的合格；安装后
11、有可能安装位置密封不好，仅采用尘埃粒子检测仪扫描不能完全保证安装效果。一般采用采用DOP 法、PAO 法来检测系统的完整性。,厂房设施&无菌生产,无菌生产区域采用局部百级，当停产时不开风机，百级内不能充分自净；高效过滤器使用中的监测不到位，出现泄漏后无法及时发现。,厂房设施&无菌生产,无菌生产区域气流流向不好可能导致的风险有：万级背景局部百级设计房间的气流流向很乱，多个地方存在死角，容易导致尘埃和微生物的聚集，从而污染经过的人员和物品。,厂房设施&无菌生产,房间密闭性存在的主要风险有：穿墙电管下端密封不好，污染物很有可能经过穿墙的电管直接进入无菌生产区域。一般需要进行里外两头的密封；墙体内电源
12、、插座内部密封不好，这也是污染源之一。,厂房设施&无菌生产,目前墙面与地面的连接处一般采用密封胶来密封，但是密封效果不好。可能导致水、药液直径经过墙面与地面的连接处进入无菌生产区域而污染，也可能导致水和药液在连接处存留而滋生微生物而极大的污染无菌生产区域。有的企业发现灌封室内出现恶臭，后经过检查发现是配制室的水经过连接处流到回风竖井内，时间长后回风竖井内长霉发臭。,厂房设施&无菌生产,地漏可能带来的风险有：液封高度不够，极易干涸，使排水管道内的臭气返入室内。扣碗可以轻易取出，或由于管道内的正压引起扣碗上浮，液封易被管道内形成的负压抽吸破坏，都会使液封遭到破坏，导致臭气溢出。地下管道里爬上来的带
13、有病菌的蟑螂等害虫和大部分病菌容易通过地漏进入洁净区而污染洁净区。地漏处理不干净，易于残留残渣、微生物等。,厂房设施&无菌生产,压缩空气等气源可能存在的风险有：没有经过除菌过滤会带来微生物的污染；过滤滤芯没有经过完整性检测或者检测的频率不够，无法保证滤芯的过滤效果。,无菌工作服&无菌生产,无菌工作服存在着以下的风险：多次灭菌有脱落物；破裂；或无法阻隔人体的污染；与人体不匹配过于宽松出现污染物排放的缝隙；,无菌工作服&无菌生产,过紧人员不舒服；灭菌后被污染，在生产过程中会污染环境和产品；无菌服管理不当，已穿、未穿、已灭菌会交差污染。,无菌手套&无菌生产,无菌手套存在如下的风险：轻微破裂无法肉眼观
14、察，会引起操作污染；手套太紧，容易出汗，有可能带来污染；手套的后处理很关键，内部污染物较多。,口罩&无菌生产,口罩存在着如下的风险：戴的宽松，口腔中污染物会随气流进入环境；过滤效果不好，不能阻隔口腔中污染物；太密，操作人员呼吸不好；材质不好，本身脱落物多；口罩的重复使用灭菌问题。,清洁工具&无菌生产,清洁工具存在的微生物风险主要有：短丝易掉毛的抹布一般较厚，这样微生物容易残留其中，不易清洁和灭菌；海绵吸头由于内部小孔很多而且厚度很大，微生物和尘埃特别易于在内残留和滋生，要清洁基本是不可能的。一般情况下海绵不能在高温下灭菌，所以消毒剂浸泡也不能完全保证海绵吸头的无菌。,清洁工具&无菌生产,拖把的
15、手杆由于很长和内部为空的，而且有很多塑料件，所以选用高温灭菌也不太可能，消毒剂擦拭和浸泡也不现实，这样也易于带进微生物污染。,消毒剂&无菌生产,酒精存在的微生物污染风险主要有：酒精配制没有采用无菌过滤，导致配制出来的 75酒精可能含有微生物；酒精的除菌过滤器没有针对性的选择疏水性滤芯，可能导致除菌过滤效果不好；酒精不是采用无菌的容器、也不是在无菌区域存放，可能会带来后期的微生物污染；酒精的存放没有规定时间，没有考虑到挥发性，致使酒精的浓度达不到消毒效果。,无菌药品生产、控制中的质量保证各个方面,小容量注射剂生产的无菌管理,无菌药品生产的管理要点,防止微生物污染防止热原或细菌内毒素的污染防止产品
16、中有异物装量准确,污染是可以控制的,大多数污染可以通过如人流和物流的合理设计，清洁工艺的适当规划和应用，综合员工培训，防护服和空气过滤等措施控制在一个可接受水平。,*包括设计及维护,QA/QC,日常无菌保证,消毒操作,偏差&环境控制趋势,HVAC/公用工程,工艺 人流 物流 布局,无菌工艺 生产线,厂房/房间,人员,培养基灌装,无菌制剂影响产品质量主要环节,注射剂产品工艺研发、设计和转移 注射剂溶液配制操作 注射剂溶液除菌过滤 注射剂培养基灌装 湿热灭菌操作与控制 干热灭菌柜和除热源操作 干热隧道灭菌和除热源操作 无菌操作区域更衣 注射剂包装容器灌装与密闭操作注射剂检验和取样操作,环境监测,方
17、法表面监测应当对产品接触表面、地面、墙以及设备进行定期监测接触碟 用于平整表面取样面积25cm2培养基要凸起，高于碟子边缘培养基中含有中和剂表面擦试法-用于非规则表面擦拭面积大约为25cm2定性或定量表面取样必须遵循无菌取样操作（使污染生产过程的关键表面的风险最小化）擦拭法和接触碟法都可以使用,环境监测,方法浮游菌监测撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪必须取一定体积的空气（取样体积必须有代表性）仪器必须经过校验沉降菌监测沉降碟在空气中的暴露时间为30-60 分钟（时间过长可能导致琼脂干掉），在灌装过程中需要更换。只能给出定性和半定量的数据数据必须结合空气浮游菌的取样结果进行评价,环境监测,取
18、样地点必须基于微生物污染的风险取样点必须在产品或组件暴露的区域周围取样，比如：在灌装针头处冻干机产品装载处胶塞锅部件无菌连接操作部位操作人员活动频繁处（但不会影响生产进程）低级别的区域以较低频率进行监测并监控趋势,环境监测,每次进入，手套都必须取样（但不能在消毒过后马上取样）定期的对着装的其他部位进行取样洁净室的操作人员必须定期的验证来表明自己在更衣时衣服未受污染（更衣资质确认）。,环境监测,污染水平与趋势GMP法规上的限度值仅供参考。企业必须根据不同的区域制定警戒和纠偏限度值。必须考虑单个结果值-平均值可能掩盖了不可接受的情况必须要有书面的操作规程规定数据回顾和超过限度所采取的行动趋势分析报
19、告对于人员和环境的短期和长期结果分析报告环境监测结果必须归档在批生产记录里微生物菌群的明显改变必须引起重视。,环境监测,消毒剂消毒剂的适用性、有效性、局限性以及消毒规程程都必须评估必须制定最少接触时间对于A/B级区的消毒剂必须是无菌级别的，包装在无菌容器内，并在明确的效期内使用必须证明对工厂内的常规菌群有效必须使用杀孢子剂（如果在环境中发现孢子），可以“喷雾”的形式消毒部件和设备消毒的操作规程必须足够的详尽，以确保重现性配制，工作顺序，接触时间从不良趋势中检出的微生物必须检测它们对于日常使用消毒剂的耐受性。,环境监测,制药用水如果条件允许，需检测大肠菌群及或假单胞菌群（该菌群可能会导致生物膜的
20、产生）。非肠道用药制剂用水必须检测热原。限度必须小于0.25 EU/mL水的微生物检测用R2A 琼脂（此种培养基对于水中的微生物的复活提供低养分）在30-35C 至少培养5天。取样程序必须遵循生产过程中的操作规程。压缩空气/氮气/CO2必须监测非活性粒子和微生物。取样时使用减压口以提供稳定的气流，验证时必须考虑这些要求,无菌检测,无菌检测是无菌产品释放时进行的一项质量控制检测该方法有有显著统计学局限性 只能检测大范围的污染取样药典中规定了检测样品的数量及体积。在无菌工艺生产的产品，必须对灌装过程的前、中、后以及生产过程有干扰和中断后生产的产品进行取样。对于最终灭菌的产品，必须在先前识别的冷点处
21、进行取样。取样数量必须能够满足复检。,无菌检测,解释和复试不应检出污染菌除非能够证明实验失败是由于与产品无关的原因引起的，方能进行复测欧洲药典标准(a)无菌检查时环境监控结果不符合要求(b)回顾无菌试验过程，发现使用了可疑的方法，导致结果不符合要求(c)阴性对照有微生物生长(d)供试品中生长的微生物经鉴定后确证是因无菌试验中所使用的物品或无菌操作技术不当引起的。,无菌检测,解释和复试当出现情况(a),(b)或(c)时应中止试验如果试验结束进行的抑制试验未出现挑战菌的生长，也认为试验无效出现情况(d)时必须用细菌鉴定的方法证明无菌试验分离的微生物经鉴定来自试验物料（例如培养基）和/或环境必须使用
22、遗传学（基因）鉴定方法取相同样品数进行复试复试中有任何微生物生长，判产品不符合规定,人员&无菌生产,1.着装正确的衣服尺寸不能混淆衣服类别(一次性&非一次性)穿戴未损坏的衣服不能戴珠宝(包括结婚戒指)不能化妆不涂指甲油(包括假指甲)不戴手表,人员&无菌生产,无菌操作人员的更衣可能是非常大的微生物污染风险，因为在更衣过程中保证更衣室的无菌水平也很困难，而且人体污染源在更衣过程中很有可能污染无菌服。因此，两套无菌服非常重要，外面的无菌服要求严格做到在无菌的更衣室更衣，并且确保不被人体污染。关于更衣过程有很多种，从减少微生物污染的风险角度而言，建议戴手套和戴口罩在穿好内层无菌服之后进行，然后再穿上外
23、层无菌服。,人员&无菌生产,手套用70%异丙醇有规律的喷洗手在碰到任何物体前和后都需要喷洗在继续进行操作前使双手干燥(约10秒)在进行手指微生物监测前不要对手套进行消毒损坏的手套必须在无菌区域外立即替换眼睛保护在无菌区域几乎所有时间都需要配戴护目镜，不能戴在头部，配戴时不能有角度。在更衣室用异丙醇擦拭来对护目镜进行除雾允许在护目镜下配戴近视/远视镜,人员&无菌生产,姿势不能靠在表面上不要挤压工作服使身体远离产品身体站直以最小化破坏气流保持手臂在腰线或以上动作深思熟虑的的,缓慢的，平滑的不能奔跑避免不必要的动作当不参与工艺操作时，操作者应站或坐,人员&无菌生产,讲话无不必要的谈话不能大声呼喊除非
24、确实需要不能通过洞口，进出口 或气闸进行交流如果打喷嚏远离产品,人员&无菌生产,行为不能触摸地板。当有物品跌落，如果不会产生风险的话可以在日清洁结束时去除。关键区域设备在离开该区域后，在重新进入生产状态时需要再灭菌或再清洁，如有需要。如有需要使用灭菌的工具。,人员&无菌生产,8.数量人员数量应该经过验证证明对无菌环境的相关指标没有影响才能确定最大的人员数量。,人员&无菌生产,9.非生产人员的进入实际上，无菌生产区域污染最大的人员不是操作人员，而是非生产人员，比如参观人员、设备维修人员、质量检验人员等。,人员&无菌生产,非生产人员由于没有经过专业的微生物知识、无菌更衣要求和无菌操作要求培训，在更
25、衣过程以及无菌生产区域的操作等很有可能会给无菌生产区域带来微生物的污染。因此应该严格控制非生产人员进入无菌生产区域，如果需要进入，应该经过仔细培训并有无菌生产区域人员带领和监控。,人员&无菌生产,10.人员资质对于无菌生产区域的操作人员建议选择有耐性的女性、中专以上学历。因为无菌生产区域要求严格，需要操作人员长时间坚持按照SOP 和相关要求工作，因此女同志更加合适。而且无菌操作涉及到的知识很多，因此需要具备医药背景的具备中专以上的人员，这样该无菌操作人员易于理解和接受相关的知识。,清洁&消毒,所有产品接触部分必须清洁，干燥然后消毒或灭菌CIP&SIP(在线清洁&在线灭菌)状态标识避免已清洁和未
26、清洁物品的潜在混淆所有的员工都必须时刻按照SOP定义的程序进行操作,清洁&消毒,需要确定正常生产时房顶、墙面、地面、设备表面和内部的清洁与消毒方法与频率，以及环境破坏时的清洁与消毒、停产时的清洁与消毒等。一般情况下采用消毒剂进行擦拭消毒，确保环境的无菌水平。消毒剂需要定期轮换。,清洁&消毒,对于那些不能经过干热灭菌、湿热灭菌的物品，如电子产品、检测仪器、消毒剂等，在进入时如果不能经过充分的灭菌或消毒，所可能带来的微生物污染是相当大的。针对这些物品，应结合物品的可灭菌或消毒的要求选择相应的灭菌或消毒工艺，来保证无菌水平。如检测仪器，如果仅采用75酒精擦拭表面和紫外灯照射，其内部的无菌无法保证；消
27、毒剂最好采用除菌过滤工艺。,传统单桶系统,2nd Bucket,3rd Bucket,Biocide,Clean Water,Waste Water,三桶系统,1st Bucket,消毒剂,消毒剂废弃物e 水r,双桶操作,除菌过滤设备,采用2 道除菌过滤滤芯来保证除菌效果，防止1 道滤芯破裂或泄漏而导致微生物污染的潜在风险。应采用0.2um 或更小孔径的除菌过滤级滤芯。滤芯的使用前后需要进行完整性检测确保其除菌效果。,干热除菌设备,建议采用灭菌隧道，可以减少人员转移物品过程中的污染。灭菌隧道的加热方式有远红外方式和热风循环加热方式两种，建议选择热风循环加热方式好。,湿热灭菌设备,对于无菌生产区
28、域的包材（胶塞与铝盖）、无菌工衣、管路和器具等宜于采用湿热灭菌，为了保证最终使用的干燥，最好采用脉动真空湿热灭菌箱。,灌封设备,灌封设备目前很多，质量参差不齐。灌封机的好坏，运行的稳定程度，直接影响到产品无菌水平。尽量采用自动化程度高，灌装、下塞、盖塞、压盖联动的设备，并且有屏蔽门，能采用全屏蔽设施的更好。,无菌操作区灌封管路和器具,无菌操作区的管路一般采用软连接和硬连接，有条件的建议采用硬连接，这样易于处理和灭菌。无菌操作区管路和器具处理有在线清洗和灭菌、拆卸清洗和灭菌等，考虑到风险程度，采用前者较好。,无菌生产环境的设计,对于无菌生产环境的设计原则主要有如下几点：a)无菌操作区为所有无菌的
29、物品、人员、设备、环境的集大成者。b)灭菌后物品尽量在单向层流的环境下运输和存放。c)生产路线尽可能短。d)无菌生产区域尽可能小。,无菌生产环境的设计,e)人流、物流分开。f)人流和物流的进出通道分开。目前在国内，通常设计为万级背景的局部百级，新版GMP提升为B 级背景的A 级灌装。,隔离器/限制进出隔离系统的使用,洁净室(传统),RABS非完全封闭,A,Isolator全封闭式消毒,A,CorD,B,RABS:Restricted Access Barrier System 限制进出隔离系统,A,B,高效过滤器,采用DOP 法、PAO 法来检测系统的完整性。（气溶胶实验，DOP为邻苯二甲酸辛脂，PAO为聚a-烯烃）,地漏,洁净区地漏的处理有如下要求：a)在每天生产结束后需要进行清洁。b)生产结束后需要用消毒剂液封。c)长时间不用时，要经常检查并加消毒剂。,电话：,谢谢,参考文献,陈西勇 无菌药品生产发生微生物污染的因素分析催福德 药剂学,
