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1.目的基因分离克隆,一 目的基因的化学合成,特点：35合成，合成长度200bp过程：推出基因序列后，用DNA合成仪合成作用：合成引物,二 PCR合成目的基因,定义：分离纯化出的目的片段用PCR仪扩增（详见主要技术）引物设计原则长度：15-30bp退火温度：,序列：少相似，防错配引物3末端：避免为A（易错配）CG含量：40%-60%未知序列时：用近缘生物对应片段参考,RT-PCR间接合成：以mRNA为模板逆转录出 cDNA，再以cDNA为模板 PCRcDNA：定义：以mRNA为模板逆转录合成的无内含子 单链环状DNA特点：无内含子、单链环状，逆转录酶属于 DNA聚合酶，需引物,三 基因文库分离目的基因,基因组文库的建立：,cDNA文库的建立：,四 基因图位克隆,染色体步移法：,染色体登陆：,本章总结,
