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1、血栓止血检验基本方法,河北医科大学第二医院检验科 郭辉,授课专业：血液学检验教学大纲要求：使同学了解和掌握主要凝血因子检验方法正常参考值和临床意义。,教学重点和难点：凝血的纠正实验、因子活性及含量、常见凝血因子异常的血栓止血性疾病诊断。讲课提纲：凝血因子检验项目 1内源性凝血途径（Intrinisic pathway IP）2.外源性凝血途径（Extrinisic pathway EP）,一内源性凝血因子筛选试验,1全血凝固时间（CT）2复钙时间（RT）3硅化管凝血时间（SCT）4.活化凝血时间（ACT）,5活化部分凝血活酶时间（APTT）6凝血酶原消耗及纠正实验7凝血活酶生成实验（B-TGT
2、）8单个、因子测定,二外源性（共同通道）凝血筛选试验,1血浆凝血酶原时间（PT）2肝促凝血酶原激活时间（HPT）3稀释蛇毒实验（RVVT）4蝰蛇毒磷脂实验（RVVCT）5蝰蛇毒复钙实验（RVVRT）6凝血酶原时间延长与纠正实验7单个因子、测定,一内源性凝血途径（Intrinisic Pathway）,1.全血凝固时间（CT）1）普通试管法 7.341.27 本方法不太敏感,只能检出因子:C2%的患者。2）塑料试管法 10-20min,临床意义：延长见于、水平低下者及VDW，严重如肝病、新生儿出血、肠道灭菌综合症、应用肝素、低（无）纤维蛋白血症、DIC抗因子抗体等。缩短见于：高凝状态如DIC高凝
3、期、促凝血物质入血、因子活性增高、血栓栓塞性疾病如心梗、不稳定心绞痛、肺栓塞、血栓、脑血管病变。,2复钙时间（RT）,延长的复钙时间有两种，能被1/10量正常血浆纠正为抗凝物质增多。NP 2分18秒4分17秒 临床上为区别复钙时间延长原因,3硅化管凝血时间（S-CT）,NP 23分54秒4分32秒（15.4932.08分）甚敏感可检测F：C45%患者 临床意义:,4.活化凝血时间(ACT),NP1.700.76min(1.1432.08min)较为敏感，可以检测出因子:C45%的患者，本法临床上主要用于体外循环中肝素用量的检测，转流期间ACT维持在450600s，鱼精蛋白中和后ACT130S。
4、,5.活化部分凝血活酶时间（APTT）,在37时以白陶土（硅藻土）等作为活化剂激活因子，以部分凝血活酶、脑磷脂代替血小板提供凝血的催化表面在钙离子参与下观察其血小板凝固所需时间，是内源性凝血敏感而常用的筛选实验。NP：与正常参考值延长10s才有意义。临床意义：同全血凝固时间（CT）,6凝血酶原消耗（PCT）及其纠正实验,原理：生理情况下，血液在凝固的过程中，大部分的凝血酶原（因子）转变为凝血酶而被消耗，故血清中仅剩少量凝血酶原。若在病理情况下F或PF3明显减少时，因内源性凝血活酶生成发生障碍，凝血酶原的消耗明显减少，故血清中剩余的凝血酶原增多，因此血清凝血酶原时间缩短。本实验主要用于检测内源性
5、凝血因子缺陷第一阶段有无异常敏感的实验，也可作为PF3有无缺陷的筛选试验。,PCT异常的纠正实验,原理：若PCT20秒给于已知凝血因子后，消耗不佳的血清凝血酶原时间得以纠正并且恢复正常，则反映凝血酶原酶生成不佳（障碍）的原因是由于缺乏此种凝血因子所致，用红细胞素作为血小板磷脂代用品作纠正实验时，还可以诊断PF3缺乏症。,结果和临床意义：25s以上者为纠正。1、2为患者血清、血浆凝血酶原时间；3纠正者为缺乏；4纠正者为缺乏；第5管纠正者提示PF3 3、4、5都不纠正，同时也不被正常血浆纠正者提示有抗凝物质。,7Biggs凝血活酶生成实验（B-TGT）,原 理：在血浆中，血浆凝血因子，PF3和钙离
6、子的共同作用下，可以生成凝血活酶（凝血酶原酶），据此将病人和正常人吸附血浆、血清、血小板悬液（或人脑部分凝血活酶）进行各种组合以形成混悬液，混悬液使正常基质血浆凝固所需要的时间，即可反映混合液中凝血活酶的活性。若缺乏血浆中某一凝血因子即可影响凝血活酶生成，从而了解受栓者血浆中缺乏的凝血因子。,NP：1.4-6分中最短时间应为9-11秒,5秒以上为异常。2若制备标准曲线，受检与正常比60s为正常。8单个凝血因子测定（全自动血液凝固分析仪）,二外源性凝血途径（Extrinisic Pathway,EP）,1.血浆凝血酶原时间（PT，Quick一期法）原理：在受检血浆中加过量的组织凝血活酶（人或兔脑
7、浸出液）和钙离子使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，观察血浆凝集所需时间。PT是外源敏感和常用实验,NP：1.以秒表示:11-14s3秒 2.凝血酶原比值PTR=患者PT(S)/正常人PT(S)1.000.05 3.国际正常比值(INR)=PTRISI(ISI为国际敏感指数,ISI值越低越准确)如两各实验室 PT:40S ISI:1.00 40/12=3.51.0=INR=3.5 PT:20S ISI:1.70 20S/12=1.71.7=INR=3.5,临床意义:PT延长:先天性缺乏症,如肝病纤溶亢进、维生素K缺乏、抗凝物后口服抗凝剂。PT缩短 血栓前状态和高凝血栓病；先
8、天性因子增多，长期口服避孕药。,2蝰蛇毒时间（RVVT或Stypven时间）,原 理：蝰蛇毒是一种强烈的因子激活物，它只需要与F和PF3结合，即生成外源性凝血酶原，而不需要参与。RVVT是在适量的蝰蛇毒及血小板存在下检测血浆复钙时间。,NP：13-14s（3 s有价值）临床意义 区别因子,F缺乏时,RDW正常,F缺乏时RVVT延长.RVVT延长还见于F、和PF3缺乏,血小板少,血液循环中有抗凝物质(肝素、口服抗凝剂、FDP等)RVVT缩短见于血小板增多，高脂血症、血栓性疾病。,3蝰蛇毒磷脂凝固实验（RVVCT）,原理：RVVCT原理与RVVT基本相同，但RVVCT是在充分提供外源性磷脂的条件下
9、，观察蝰蛇毒使之血小板、血浆凝固所需要的时间；RVVT是蝰蛇毒直接使PRP血浆凝固所需要的时间。NP：RVVCT 9.71.4S 临床意义:同蝰蛇复钙时间(RVVRT)时间,4.蝰蛇毒复钙时间(RVVRT),原理:与RVVCT相同。但RVVRT是应用PRP观察血浆在蝰蛇毒作用下的复钙时间。NP：19.22.8S 临床意义:1.RVVCT延长:缺乏 2.RVVCT、PT均延长，见于缺乏。3RVVCT正常，PT延长，见于缺乏。4RVVCT正常，RVVRT延长，见于PF3缺乏症。5凝血酶原时间延长的纠正实验。,原理：在已知延长的血浆中加正常血浆（）、正常血清（）、正常吸附血浆（）、所得的不同结果借以
10、区别外源性几种凝血因子。PT延长 正浆正常 正清异常 正吸异常 为 因子缺乏PT延长 正浆正常 正清正常 正吸异常 为 因子缺乏PT延长 正浆正常 正清异常 正吸正常 为 因子缺乏6肝促凝血活酶实验（HPT）与6基本相同7单个因子含量测定,三 第三阶段凝血实验,1血浆纤维蛋白原（Fg）定量检测1）半定量2）快速3）双缩脲法4）免疫扩散NP 2-4g/L 4.0为异常临床意义,2F的筛选试验,原理：F缺乏时，不能形成不溶性纤维蛋白，只能形成可溶性纤维蛋白的聚合体，聚合体可溶于5mol/L(30%)的尿素中。NP：正常血浆凝块加5mol/L(30%)的尿素溶液，24-48小时不发生溶解，溶解则为缺乏。,3F亚基抗原检测4F活性检测,
