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1、主讲人：马静 班级：食品2班 学号：02,奶制品中防腐剂山梨酸和苯甲酸的测定 高效液相色谱法,主要内容,实验背景,食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素B1,还能使钙形成不溶性物质,影响人体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉,仍作为主要防腐剂加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健
2、康。,性状与性能,山梨酸,苯甲酸,无色晶体粉末，相对分子质量为：112.13，熔点132135，沸点228，耐光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。,白色晶体，相对分子质量为144.11，熔点121.7，沸点249.2，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。,食品中测定防腐剂方法的比较,食品中测定防腐剂方法的选择,检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量
3、低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。,高效液相法的测定过程,仪器及试剂,仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（100um）超声波发生器;溶剂过滤器;0.45 m滤膜;容量瓶;恒温水浴锅试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（1:1）氢氧化钠溶液（0.1mol/L）;亚铁氰化钾溶液（0.2mol/L）醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸(1mg/mL),山梨酸（1mg/mL）;混合标准工作液（苯甲酸+山梨酸）
4、0.2mg/mL,山梨酸、苯甲酸的提取,置于,加入,溶解,加入,加入,静置,液相色谱条件,柱子:Eclipse XD13-C18柱(4.6mm150mm，5m);流动相:磷酸盐缓冲溶液-甲醇(V/V90:10);等梯度洗脱;流速 0.3ml/min;保留时间 15min;柱温 35;进样量 20 ul;紫外检测波长 227nm；,实验步骤,1.混合标准液的配置分别移取混合标准工作0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml于6个容量瓶（10ml），稀释定容。2.流动相处理流动相用0.45 um水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理3.开机 出现平
5、直基线 进样4.定性分析分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液10uL,确定各个峰保留时间5.标准曲线测定分别吸取60uL的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表6.样品分析取样品60uL进样，记录保留时间和峰面积,标准色谱图,液相色谱仪使用注意事项,(1)使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。(2)必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（0.45um）。(3)流动相使用前必须脱气。(4)改变流动相时防止交叉污染。(5)不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。(6)定期清洗烧结不锈钢吸滤头。(7)防止过高压力冲击色谱柱。(8)每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐
6、沉积和样品微粒磨损阀转子。(9)严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。(10)在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀(11)色谱柱不用卸下前:a.必须洗去缓冲液；b.防止产生微生物；c.用大于10%的有机溶剂充满整个色谱柱；d.柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。,参考文献,1.祝伟霞,魏蔚,杨冀州,刘亚风高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中国国境卫生检疫杂志,2005年10月第28卷第5期 2.周毅刚,龙苏,王晓春,等.高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量.中国医师杂志,2001,13(3):184-1883.全国标准化委员会.GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苹甲酸测测定方法.北京:中国标准出版社,2003,The End,
