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1、2023/7/14,褚云卓,1,艾滋病机会性感染及性病实验室检查,中国医大一院 检验科 褚云卓,2023/7/14,褚云卓,2,讲授内容,一、机会性感染病原学检查二、性病实验室检查检查,2023/7/14,褚云卓,3,一、机会性感染病原学检查,1、病毒感染2、细菌感染 3、真菌感染 4、原虫感染,2023/7/14,褚云卓,4,1、病毒感染 CMV感染,细胞学检查 从尿液、脑脊液或受感染的肝、肺、胃等组织标本中，用姬姆萨或瑞氏染色法进行染色，可见核内和（或）胞质内含包涵体的巨大细胞，其周围有一条明亮带。,2023/7/14,褚云卓,5,病毒分离 CMV病毒分离是诊断CMV感染最直接的方法，CM
2、V具有种属特异性。采取新鲜尿液、唾液、子宫分泌液、肝活检或尸检标本、外周血白细胞等，将标本接种于人胚肺二倍体传代细胞株上，培养24h后染色可见包涵体，而细胞病变需26周才能查见。虽然病毒的分离能证明有CMV感染的存在，但并不一定能证明与疾病有病原学联系。,1、病毒感染 CMV感染,2023/7/14,褚云卓,6,抗体检测 补体结合试验（CF）、间接血凝试验（PHA）、免疫荧光试验（IF）、免疫印迹试验（IB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及放射免疫试验（RIA）等。全自动快速微粒子酶免疫检测法（MEIA）可对IgG和IgM作出定量分析。,1、病毒感染 CMV感染,2023/7/14,褚云卓,
3、7,IgM阳性提示患者为现症感染或处于CMV感染活动期。IgG阳性提示既往感染或潜伏感染。IgG抗体滴度呈4倍或4倍以上增长时，表示有近期CMV感染。严重的艾滋病患者血清抗CMV抗体可能阴性，故对艾滋病患者来说，CMV血清学检查阴性不能排除CMV感染。,2023/7/14,褚云卓,8,抗原检测 早期抗原免疫荧光检查（DEAFF）：将肺泡灌洗液、血液白细胞、尿液沉积物、活检或尸检样本接种于成纤维细胞，培养24小时后用荧光标记的单克隆抗体直接测定CMV的和蛋白，该法不仅快速而且敏感性和特异性均较高。,1、病毒感染 CMV感染,2023/7/14,褚云卓,9,CMV白细胞抗原血症检测：用免疫细胞化学
4、的方法在外周血白细胞核中对65kDa低基质磷蛋白（65kDalow-matrix phosphoprotein，pp65）进行检测，或利用流式细胞仪荧光标记的单克隆抗体测定白细胞中的CMV抗原，计数细胞病毒抗原的百分比，能提供定量数据。该方法可在症状出现前检测到CMV病毒，可定量，以预测和区分CMV活动期和无症状感染。可评价抗病毒治疗的效果以及检测中枢神经系统感染的艾滋病患者的脑脊液白细胞中CMV，其检测结果与用白细胞或血浆中CMV DNA扩增结果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活动性CMV感染的诊断成为可能，该方法简便、快速且敏感性高。,2023/7/14,褚云卓,10,免疫组化检查 将
5、外周血白细胞用抗CMV单克隆抗体进行免疫组化染色也可快速作出诊断。免疫荧光检测标本中的CMV早期抗原，阳性时提示CMV活动性感染。,1、病毒感染 CMV感染,2023/7/14,褚云卓,11,CMV核酸检测 检测和定量CMV DNA以及mRNA 提取外周血白细胞、血浆、血清中CMV DNA，采用套式PCR可诊断活动型MCV感染，利用逆转录PCR技术检测外周血白细胞中MCV mRNA，能够测出完整的病毒复制周期，特异性较普通PCR检测DNA高。,1、病毒感染 CMV感染,2023/7/14,褚云卓,12,艾滋病患者、器官移植者当处于CMV感染的活动期时，体内含有较高水平的CMV DNA，伴随着临
6、床症状的出现和用药治疗的失败CMV DNA的拷贝数会快速升高。因此，Rasmussen等用外周血白细胞中的CMV DNA含量来确定艾滋病患者的视网膜炎是否由CMV感染引起。但是，用PCR方法检测CMV DNA还不能判定患者是处于活动期、无症状期还是潜伏期，不能精确评估疾病的进程和用药治疗的效果。,2023/7/14,褚云卓,13,形态学检查 取标本涂片，以姬姆萨和瑞氏染色，镜检可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2023/7/14,褚云卓,14,病毒分离 在感染最初几天取病损处的水泡液或刮片拭子或组织标本接种于HSV敏感的细胞中，常用的细胞为人胚肾、兔
7、肾细胞、Hela细胞等。接种4896小时后，如发现有细胞肿胀、变圆、细胞融合等细胞病变现象和特征性的核内包涵体便可作出诊断。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2023/7/14,褚云卓,15,免疫学检测 HSV抗原检测主要是用HSV特异性单克隆抗体，以免疫荧光或ELISA方法直接检测病人组织或分泌物细胞中的HSV抗原，若为阳性则诊断为近期感染HSV。HSV抗体检测虽然是临床上最常用检测HSV感染的一种手段，但艾滋病患者通常会出现假阴性反应。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2023/7/14,褚云卓,16,核酸检测 采用PCR技术，扩增HSV基因组中一段特异性的基因序列，是
8、目前检测速度最快且敏感性最高的方法，但是阴性不能排除含有HSV的可能，因为临床早期获得的某些样本用PCR检测是阴性的，另外在样本中也可能存在PCR反应的抑制剂。在临床诊断较困难时，HSVPCR仍将发挥作用，例如可通过PCR在艾滋病患者的玻璃体液和皮肤黏膜病损中检测到HSVDNA。,1、病毒感染 HSV-1和HSV-2感染,2023/7/14,褚云卓,17,诊断HHV-6和HHV-7感染培养：可采取病人血液、唾液、体腔液或疱疹液。特异性病毒抗体：间接免疫荧光法或ELISA法检测。但是由于健康人群中血清抗HHV-6和抗HHV-7抗体阳性率均超过85%，因此血清学检测的临床意义不大。分子生物学方法：
9、分子杂交或PCR方法直接检测标本中的病毒核酸。,1、病毒感染 HHV-6、HHV-7和HHV-8感染,2023/7/14,褚云卓,18,血清HHV-8潜伏蛋白(latent protein)抗体：Kaposis肉瘤和B淋巴细胞瘤患者阳性，艾滋病患者血清抗HHV-8潜伏蛋白抗体阳性常预示病人即将发生Kaposis肉瘤。血清抗HHV-8可溶性抗原（lytic antigen）的抗体：几乎所有Kaposis肉瘤病人和90%男性同性恋HIV感染者为阳性，而正常人群阳性率为25%。,1、病毒感染 HHV-6、HHV-7和HHV-8感染,2023/7/14,褚云卓,19,疱疹基底部的组织碎片进行涂片及瑞氏
10、或姬姆萨染色，查找嗜酸性核内包涵体，或用电子显微镜直接检查水疱液中的典型疱疹病毒。采用PCR方法检测标本中病毒核酸，方法灵敏、准确。血清学检查多应用ELISA法，于发病2个月内查特异性IgG和IgM抗体，有诊断价值。,1、病毒感染 V-Z感染,2023/7/14,褚云卓,20,间接荧光抗体试验（IFA）和酶联免疫试验（EIA）最理想的EB病毒血清学检测组分是VCA-IgG、EA-IgG和EBNA，这种组合，单份血清即可给90%95%的患者进行精确诊断分类。嗜异性抗体和EB病毒特异性抗体IgG 嗜异性凝集效价从1：501：224均具有临床价值，EB病毒特异性抗体IgG滴度1：80即有诊断价值。检
11、测EB病毒的核酸 常用的方法有：冷冻切片和石蜡切片的原位杂交试验、细胞悬液的杂交、点杂交和Southern印迹杂交等,1、病毒感染 V-Z感染,2023/7/14,褚云卓,21,2、细菌感染,机会性细菌感染是艾滋病的主要致死因素，艾滋病患者因反复发生细菌感染而多次住院治疗。凡是医院及社区人群感染的细菌均可引起艾滋病患者感染，常见的细菌有金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、假单胞菌、肠杆菌、流感嗜血杆菌和分枝杆菌等。尤其是正常免疫人群很少感染的细菌如非结核分枝杆菌等，常引起艾滋病患者机会性感染。,2023/7/14,褚云卓,22,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),革兰
12、阴性，长短不一，单鞭毛。生长温度2542。氧化酶阳性。还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性。,2023/7/14,褚云卓,23,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa),2023/7/14,褚云卓,24,标本直接检查 涂片染色镜检：抗酸染色和荧光染色 核酸检测：MTD试验 AMPLICOR MTB方法 分离培养：体培养法和液体培养法,2、细菌感染 结核分枝杆菌,2023/7/14,褚云卓,25,鸟分枝杆菌 菌体呈杆状，有时亦呈球杆状或丝状。卵黄培养基表现为淡黄色，在油酸卵蛋白琼脂培养基上菌落呈光滑无色素透明样的菌落，菌落中心较厚。鸟型分枝杆菌特异性抗原检测，或用频率脉冲电子捕获气液色谱法检测细菌
13、中的“结核硬脂酸”，或用特异性RNA或DNA探针进行杂交试验，或用PCR等方法鉴定标本中的鸟型分枝杆菌。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2023/7/14,褚云卓,26,龟分枝杆菌 菌体呈多态性，可表现为细而长或短而粗的菌体，幼龄菌呈强酸性，陈旧培养物可渐渐失去抗酸性。此菌为快速生长菌，培养要求不高，在血琼脂培养基及麦康凯培养基上均生长良好，通常13天即可长出12mm直径的菌落，菌落表面光滑、湿润、有光泽、乳白色或淡黄色。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2023/7/14,褚云卓,27,偶发分枝杆菌 菌体呈棒状、球状或细丝状，偶尔菌体亦可呈念珠状或表现为膨胀的菌体。在液体培养基中菌体分叉状。此
14、菌为快速生长型菌，5天即可长出肉眼可见的菌落，菌落呈平滑、柔软、奶油状，菌落亦可呈半球状、蜡样分裂叶状，亦常出现暗淡、粗糙、中心呈堆叠的菌落。在孔雀绿培养基上菌落可呈绿色，在玉米粉琼脂培养基上，菌落粗糙呈致密索状。光滑型菌落其周围有宽阔的网状物。,2、细菌感染 非结核分枝杆菌,2023/7/14,褚云卓,28,真菌感染 卡氏肺孢子虫感染,病原学检查 可从患者的痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中查到卡氏肺孢子虫。常用的染色方法有：六亚甲基四胺银（GMS）染色：包囊壁被染成褐色，囊壁可见特征性括弧样结构；亚甲胺蓝（TBO）染色：包囊壁呈深紫色，无特征性括弧样结构；荧光染色法：包囊呈现明亮蓝绿色光
15、环，包囊括弧样结构清晰可见。,2023/7/14,褚云卓,29,特异性DNA检测 用原位杂交技术和PCR方法检测血液、痰、支气管肺泡灌洗液及肺活检组织中的卡氏肺孢子虫DNA敏感性高，特异性好，PCR可检出10个拷贝的靶DNA。,真菌感染 卡氏肺孢子虫感染,2023/7/14,褚云卓,30,直接涂片镜检：将标本悬于生理盐水或10%20%的氢氧化钾中，镜下可见卵圆形芽胞及假菌丝，革兰染色芽胞及假菌丝呈蓝色。分离培养：将标本接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂及显色培养基，3037培养2448小时，在沙氏培养基上出现乳白色、光滑、中等大小的菌落，在显色培养基上菌落为绿色，即可确定为白假丝酵母。,真菌感染 白假
16、丝酵母感染,2023/7/14,褚云卓,31,墨汁染色或刚果红水溶液染色:新型隐球菌呈圆形或椭圆形的厚壁孢子或芽生孢子，外有一层宽厚荚膜，边缘清楚整齐，有时可见单个出芽的细胞。胶乳凝集试验:即新型隐球菌乳胶凝集试验，检测病人CSF或血清中新型隐球菌荚膜多糖抗原，其特异性和敏感性均较高，可简便快速有效诊断隐球菌性脑膜炎。分离培养:采用自动微生物系统和API鉴定。,真菌感染 新型隐球菌感染,2023/7/14,褚云卓,32,2023/7/14,褚云卓,33,2023/7/14,褚云卓,34,痰涂片的直接镜检:可见到大量的分隔菌丝，而对疑为侵袭性曲霉病患者，推荐支气管灌洗液标本检查.分离培养:可见白
17、色丝形菌落，随着孢子产生而转变为绿色或暗绿色。产生的孢子柄可长达500m以上，柄的顶端为穹形包囊，囊表面有长串孢子攀丝。膨大的典型分生孢子柄和攀丝是曲霉菌的特点。,真菌感染 曲霉菌感染,2023/7/14,褚云卓,35,2023/7/14,褚云卓,36,2023/7/14,褚云卓,37,2023/7/14,褚云卓,38,2023/7/14,褚云卓,39,2023/7/14,褚云卓,40,2023/7/14,褚云卓,41,直接涂片瑞氏染色:可见到典型圆形或卵形有明显横隔的细胞，常在巨噬细胞内。分离培养：马尔尼菲青霉为双相真菌，25培养呈青霉相，37呈酵母相，无红色色素产生。组织病理学检查：在单核
18、巨噬细胞系统之外的组织中常引起化脓性反应；在单核巨噬细胞系统器官为肉芽肿性反应；在巨噬细胞内外有酵母样菌体，呈圆形、椭圆形或腊肠形，有横隔。,真菌感染 马尔尼菲青霉感染,2023/7/14,褚云卓,42,外周血涂片瑞氏、姬姆萨或过碘酸染色：为小的卵圆形出芽细胞（常群聚于巨噬细胞内），如临床标本中可见大的厚壁细胞。分离培养：荚膜组织胞浆菌属于双相真菌，25沙堡弱培养基（SDA）为霉菌相，血琼脂37培养可转为酵母相，大约有30%的菌株在25SDA培养可见特征性的大分生孢子，直径814m，表面有指状突起，还有的菌株产生椭圆形小分生孢子，直径24m，从菌丝生出锐角的小梗上，有时可以出芽似哑铃状。,真菌
19、感染 荚膜组织胞浆菌感染,2023/7/14,褚云卓,43,荚膜组织胞浆菌，25培养,2023/7/14,褚云卓,44,荚膜组织胞浆菌（X400）,2023/7/14,褚云卓,45,荚膜组织胞浆菌（X1000）,2023/7/14,褚云卓,46,荚膜组织胞浆菌（X1000）,2023/7/14,褚云卓,47,直接涂片：可见特征性的圆形、厚壁（2m）的球形体，直径1080m。不出芽，内含内孢子，直径25m。球壁破裂，则有内生孢子游离在外。每个内孢子可延长为关节菌丝，关节菌丝裂为关节孢子，后者发展为小球体。在肺空洞病例，痰标本可见菌丝及小球体。,真菌感染 球孢子菌感染,2023/7/14,褚云卓,
20、48,分离培养：因该菌易于播散，吸入肺中，有高度的传染性，培养操作应该在有专门条件的实验室进行。经2530培养27天即可获得可鉴定的菌丝型菌落，呈白色绒毛状菌落，以后变灰白色，中央有丛状菌丝，经3740特殊的转换培养基可产生球形体。组织病理检查：发现原发性皮肤球孢子菌病组织学改变主要为慢性肉芽肿，播散性皮肤球孢子菌病主要表现为化脓性肉芽肿，极少数情况可见到菌丝成分。,真菌感染 球孢子菌感染,2023/7/14,褚云卓,49,病原学检查：可见弓形虫滋养体和假囊，滋养体较小，常位于细胞核内。免疫学检查：循环抗原（Cag）的检测 血清抗体的检测PCR检测弓形虫DNA,原虫感染 弓形虫感染,2023/
21、7/14,褚云卓,50,通常用硫酸锌或蔗糖悬浮沉淀法浓缩病人粪便，经Kinyoum抗酸染色法或碘液染色后，在相差显微镜下可观察到浅粉红色或深红色、直径约26m大小的隐孢子虫卵囊。也可采取病人肠粘膜活检标本，经姬姆萨染色后，从组织标本中的微绒毛层中检出14m的隐孢子虫滋养体。,原虫感染 隐孢子虫感染,2023/7/14,褚云卓,51,讲授内容,一、机会性感染病原学检查二、性病实验室检查检查,2023/7/14,褚云卓,52,二、性病实验室检查检查,1、梅毒2、淋病3、非淋菌性尿道炎4、尖锐湿尤,2023/7/14,褚云卓,53,梅毒概况,梅毒是最常见的一种性病，在20世纪之前与淋病、软下疳、性病
22、淋巴肉芽肿、腹股沟肉芽肿合称为经典性病。梅毒起源于欧洲，十六世纪初传入我国。长期以来，人们无法区分淋病与梅毒，直到1905年Schandim和Hoffman发现了梅毒的病原体梅毒螺旋体（Treponema Pallidum，TP）。,2023/7/14,褚云卓,54,梅毒的临床分期,梅毒螺旋体通过粘膜或有破损的皮肤进入人体后，经淋巴系统及血液循环播散到全身，几乎可以侵犯全身各脏器和组织。临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长。梅毒的病程分三期,2023/7/14,褚云卓,55,一期梅毒:主要表现为生殖器形成硬下疳,即使未经治疗也可自然愈合，梅毒螺旋体进入血液而潜伏于体内，约经23月隐伏期后进入
23、第二期。二期梅毒：主要表现为全身皮肤黏膜出现梅毒疹，即使不加治疗症状也常在3个月以内消退。一、二期梅毒并称为早期梅毒。,梅毒的临床分期,2023/7/14,褚云卓,56,三期梅毒：二期梅毒未经正规治疗，经5年或更久有50%左右病人会发展为三期梅毒，此时病变可累及全身各器官、组织，常见的有神经系统、心血管系统等，严重的可导致死亡。此外，隐性梅毒患者虽没有临床症状，但却是重要的传染源。胎传梅毒（先天梅毒）则可引起胎儿全身感染，并在出生后（710岁）出现皮肤梅毒、骨髓炎、楔状齿等。,梅毒的临床分期,2023/7/14,褚云卓,57,梅毒的传播途径,梅毒主要通过性交传播，也可通过胎盘传染下一代，极少数
24、患者通过其他途径传染。性接触：未经治疗的病人，在感染后的第一年内最具有传染性，这些病人的皮肤、黏膜损害表面有大量梅毒螺旋体。因此，凡和这些病人有接触（包括同性恋），皮肤和黏膜接触到病人损害处，都可传染上梅毒。随着病期的延长，梅毒的传染性逐渐减少，到感染4年后，通过性接触几乎无传染性。,2023/7/14,褚云卓,58,胎传：梅毒孕妇血中的梅毒螺旋体，可通过胎盘及脐带血传到胎儿体内，胎儿一般于6个月后才对螺旋体的感染发生反应。未经治疗的晚期（病程超过4年）梅毒妇女，虽然经过性接触已无传染性，但怀孕后仍可传染胎儿，但传染性比早期梅毒低。病期越长，传染性越小。,梅毒的传播途径,2023/7/14,褚
25、云卓,59,其他途径：极少数患者经性接触以外的途径感染。直接接触的有接吻、哺乳、输血以及新生儿经过产道而感染等。间接接触的有接触病人的日常用品，如剃刀、餐具、烟嘴、坐式便器、医疗器械等。医务人员在接触梅毒螺旋体的标本时不小心也可以感染,梅毒的传播途径,2023/7/14,褚云卓,60,梅毒在全球的流行状况,1900年世界卫生组织把梅毒列为世界上最流行的50种疾病之一。梅毒的发病率在性传播疾病中列第4位。估计全世界每年约有300万新发病例。90年代末，世界上每天有100万人感染性病，每年产生淋病病人6200万，梅毒病人1200万，其它性传病原体感染病人1.5个亿，发展中国家是性病和梅毒的重灾区。
26、,2023/7/14,褚云卓,61,梅毒从16世纪初由印度传入我国广东，至今已流行400余年，解放前梅毒的发病率为所有性病之首。20世纪60年代初期，我国基本消灭了梅毒。改革开放后，梅毒再次从国外传入我国。近年来，梅毒增长幅度明显加快。自1979年再次报告梅毒后，报病数逐年增多，特别是1993年后，全国许多地区梅毒呈现大幅上升，至1999年全国梅毒报病数为80406例，是1993年的40倍。,梅毒在国内的流行状况（一）,2023/7/14,褚云卓,62,1979-1987年全国梅毒报告病例不超过1000例；1988-1992年间每年报病数不超过2000例（1990年除外）；1993-1999年
27、则成倍增长，年均增长85%。有的地区梅毒发病率超过150/10万，足见其严重性。,梅毒在国内的流行状况（一）,2023/7/14,褚云卓,63,梅毒在国内的流行状（二）,梅毒在中国的病例报告数(19852000),2023/7/14,褚云卓,64,2000年梅毒报病数位于前10位的省份为：广东（10383例）、江苏（8500例）、辽宁（8097例）、浙江（7950例）、上海（6573例）、福建（5980例）、黑龙江（3854例）、安徽（3407例）、吉林（3312例）和广西（3106例），仍然分布在珠江三角洲、长江三角洲和东北三省。,梅毒在国内的流行状（三）,2023/7/14,褚云卓,65,
28、发病率位于前10位的省份为：上海（49.83/10万）、辽宁（19.365/10万）、海南（18.29/10万）、浙江（17.69/10万）、福建（17.67/10万）、北京（16.08/10万）、广东（14.27/10万）、吉林（12.38/10万）、江苏（11.70/10万）和黑龙江（10.12/10万）。,梅毒在国内的流行状（三）,2023/7/14,褚云卓,66,2000年梅毒报告病例位于前10位的省份,2023/7/14,褚云卓,67,发病率(1/10万）位于前10位的省份为,2023/7/14,褚云卓,68,由于各种原因，全国各地存在大量的梅毒漏诊和漏报，我国专家估计，实际患病人数
29、是报告数的6-10倍或以上。男性梅毒病例以一期最多，女性则以二期最多。女性的二期梅毒和隐性梅毒均多于男性，胎传梅毒的发生率也随之增高。,梅毒在国内的流行状（四）,2023/7/14,褚云卓,69,2000年全国有26个省份报告了胎传梅毒，共359例，较1999年增长了30.36%。其中报告病例数较多的省份为：广东91例、福建81例、浙江59例、上海55例、黑龙江31例、辽宁29例、广西17例、江苏16例和安徽11例等。2001年，胎传梅毒数仍呈明显上升的趋势。,梅毒在国内的流行状（四）,2023/7/14,褚云卓,70,2000年全国各性病监测点梅毒不同型别的分析,梅毒在国内的流行状（五）,2
30、023/7/14,褚云卓,71,梅毒在国内的流行状（六）,未经治疗的梅毒对妊娠结果的影响,2023/7/14,褚云卓,72,梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关，从社会学角度来看，凡人群中梅毒发病率高，意味着人群中性乱现象严重，提供了艾滋病流行的条件；从医学角度来说，患有梅毒的人，因有局部溃疡，可明显增加带有CD4受体信息的目标细胞，故对HIV感染的易感性增加210倍。同样，HIV感染者伴有梅毒，其生殖道排出的HIV的量要比仅有HIV感染者排出的量大得多。在HIV感染者中，梅毒血清学反应有时会出现难于解释的现象，因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表现为阴性者，建议考虑HIV检查。,梅毒在国
31、内的流行状况（七）,2023/7/14,褚云卓,73,人类对梅毒无先天免疫性，尚无疫苗接种进行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染。感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗39个月后或晚期梅毒治疗2年后，大部分病人IgM可转阴性，再感染时又出现阳性，故IgM型抗体的存在是活动性梅毒的表现。,梅毒的免疫性,2023/7/14,褚云卓,74,感染梅毒四周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出。,梅毒的免疫性,
32、2023/7/14,褚云卓,75,梅毒的免疫性,另一种具有抗体性质的物质叫反应素（reagin），是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在感染后57周（或下疳出现后23周）产生。经正规治疗后可逐渐消失。,2023/7/14,褚云卓,76,胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（69个月）已能合成IgM型抗体，出生后第3个月开始形成IgG型抗体；IgM抗体不能通过胎盘，而IgG抗体能通过胎盘，如患儿血清中检侧出19S-IgM抗梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据。,梅毒的免疫性,2023/7/14,褚云卓,77,暗视野显微镜检查法：是目前国内主要的
33、梅毒病原学诊断方法之一。适用于对一期梅毒及二期梅毒早期的检测。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒诊断。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,78,镀银染色法：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察。直接免疫荧光法（DFA)：是目前国外采用较多的方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚
34、云卓,79,非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种，原理基本相同，目前我国多采用RPR和TRUST这两种试验：1、性病研究实验室玻片试验（VDRL)：由于试剂需现配现用，故而国内实验室很少采用。但VDRL是可用于神经性梅毒诊断的血清学方法。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,80,2、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)：在特制的纸片上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果。3、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉颗粒，使结果更易于观察。4、不加热血清反
35、应素试验（USR),梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,81,非梅毒螺旋体抗原血清试验受多种条件的影响，有一定缺陷：1、特异性：由于在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,82,2、敏感性：非梅毒螺旋体抗原血清试验有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又怀疑二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的前带现象。12二期梅毒病人可出现此现象而发生梅毒血清假阴性反应。此外，由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体
36、，晚期梅毒反应素又可能转阴，因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,83,3、主观性：结果靠肉眼观察，带有主观性。优点：1、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随疗程逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标。2、此类方法价格低廉,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,84,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,85,梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法：1、荧光梅毒螺旋体抗体吸
37、收试验（FTA-ABS)2、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）5、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,86,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)FTA-ABS是所有螺旋体试验中最敏感的方法，特异性也很高，被认为是检测梅毒的“金标准”。但操作困难，试验可靠性：标准化的结果判断、高质量的荧光标记抗体以及适当的稀释度。实验需有优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能得到准确的结果，故常不被临床实验室作为首选方法。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓
38、,87,梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,88,优点：该方法比FTA-ABS易操作且稳定性好，它的敏感性除早期梅毒外与FTA-ABS相似，对大样本进行批量检测时，TPHA也比FTA-ABS易操作，这是目前国内许多实验室选用的梅毒螺旋体确证试验方法。不足：由于红细胞具有生物活性，可能产生非特异性凝集，且保存时间较短，故实际使用中也存在一些问题。目前国内使用的商品化TPHA试剂盒均未通过国家的批批检。,梅毒
39、的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,89,梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)原理：TPPA的原理与TPHA基本相同，它以人工合成的惰性明胶颗粒代替TPHA试验中的红细胞作为载体。优点：1、试剂更稳定，操作更简单，结果判读更为清楚 明确，敏感性和特异性也较TPHA进一步提高。2、TPPA的加样、稀释及凝集结果读取过程已经可以实现自动化。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,90,梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检血清以及酶标抗原，形成双抗原夹心，可同时检测IgG、IgM抗体。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,9
40、1,优点：1、敏感性和特异性较高 2、价格较低，适合于对大量样品的筛查 3、可实现操作的自动化不足：各家ELISA试剂盒采用的抗原和工艺不同，使测定的敏感性和特异性产生较大的差异，临床实验室在选用ELISA试剂前应认真进行评估。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,92,梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）：金标或硒标方法的主要优点是快速及单人份使用，但其价格较为昂贵，由于此类试剂面世不久，其敏感性、特异性等指标尚有待进一步考核。,梅毒的实验室诊断,2023/7/14,褚云卓,93,梅毒的实验室诊断,梅毒血清学检测方法的比较,2023/7/14,褚云卓,94,2、淋病（gonorrh
41、ea),病原体：淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae)传播途径：性接触、非性接触感染（使用被污染的物品、淋菌性结膜炎等）、经胎盘或产道感染、偶见经血传播（菌血症、关节炎和脑膜炎）感染特点：泌尿生殖道系统化脓性炎性疾病,2023/7/14,褚云卓,95,淋病的临床表现,根据临床表现，淋病可分为：无合并症淋病与有合并症淋病 无症状与有症状淋病 播散性淋病 急性与慢性淋病等。,2023/7/14,褚云卓,96,男性无合并症淋病,急性淋菌性尿道炎（急性淋病）：潜伏期为1-14天，常为2-5天。初起，为急性前尿道炎，约2天后，分泌物变得粘稠，尿道口溢脓，脓液呈深黄色或黄绿色，同时伴有尿道不适症状加重，
42、红肿发展到整个阴茎龟头及部分尿道，出现尿频、尿急、尿痛、排尿困难等。可有腹股沟淋巴结肿大，红肿疼痛，亦可化脓。全身症状一般较轻，少数可有发热达38左右，全身不适，食欲不振等。,2023/7/14,褚云卓,97,慢性淋菌性尿道炎（慢性淋病）：症状持续2个月以上称为慢性淋菌性尿道炎。因为治疗不彻底，淋球菌可隐伏于尿道体、尿道旁腺、尿道隐窝使病程转为慢性。临床表现尿道常有痒感，排尿时有灼热感或轻度刺痛、尿流细、排尿无力、滴尿。多数患者于清晨尿道有少量浆液痂封口，若挤压阴部或阴茎根部常见稀薄粘液溢出。,男性无合并症淋病,2023/7/14,褚云卓,98,女性无合并症淋病,女性原发性淋球菌感染主要部位为
43、子宫颈，患者早期常无自觉症状，宫颈充血，触痛，脓性分泌物的增多，常有外阴刺痒和烧灼感，偶有下腹痛及腰痛。淋菌性尿道炎：常于性交后2-5天发生，尿道口充血，有触痛及脓性分泌物，有轻度尿频、尿急、尿痛，排尿时有烧灼感，按压尿道有脓性分泌物；淋菌性前庭大腺炎 淋菌性阴道炎较少见,2023/7/14,褚云卓,99,有合并症淋病,男性主要有前列腺炎、精囊炎、附睾炎。女性淋病的主要合并症有淋菌性盒腔炎。,2023/7/14,褚云卓,100,其他部位淋病,淋病性结膜炎 淋菌性咽炎 淋菌性肛门直肠炎,2023/7/14,褚云卓,101,播散性淋球菌感染,淋菌性败血症淋菌性关节炎 淋菌性角化症 淋菌性心内膜炎
44、淋菌性脑膜炎,2023/7/14,褚云卓,102,淋菌实验室检查,涂片检查：取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推荐用培养法检查女病人。,2023/7/14,褚云卓,103,培养检查：只要培养阳性就可确诊，在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织推荐的筛选淋病的唯一方法。采用巧克力琼脂或GC琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36，70%湿度，含5%
45、-10%CO2（烛缸）环境中培养，24-48小时观察结果。根据菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等进行鉴定。培养阳性率男性80%-95%，女性80-90%。,淋菌实验室检查,2023/7/14,褚云卓,104,抗原检测 1、固相酶免疫试验（EIA）：2、直接免疫荧光试验：基因诊断 1、淋球菌的基因探针诊断 2、淋球菌的基因扩增检测,淋菌实验室检查,2023/7/14,褚云卓,105,药敏试验：在培养阳性后进一步作药敏试验。用纸片扩散法做敏感试验，或用琼脂平皿稀释法测定最小抑菌浓度（MIC），用以指导选用抗生素。-内酰胺酶试验,淋菌实验室检查,2023/7/14,褚云卓,106,3、非
46、淋菌性尿道炎(nongonococal urethritis，NGU),病原体：沙眼衣原体、支原体传播途径：主要经性接触传播感染特点：常与淋病同时发生、以尿道刺激症状及尿道少量粘液性分泌物为特点,2023/7/14,褚云卓,107,非淋菌性尿道炎的临床表现,成人男性的感染部位在尿道粘膜女性感染部位在宫颈新生儿主要引起结膜炎和肺炎潜伏期：一般1-4周，女性是13周。临床有尿道炎的表现，而尿道分泌物涂片及培养淋球菌均阴性,2023/7/14,褚云卓,108,男性非淋菌性尿道炎症状比淋病轻，起病不如淋病急，症状拖延，时轻时重。尿道有刺痒感或灼热感，偶有刺痛感，尿道口有分泌物，但较淋病的分泌物稀薄，为
47、清稀状水样粘液性或淡黄色粘膜脓性，分泌物量也较淋病少。有时病人无任何自觉症状。初诊时很易被漏诊。,2023/7/14,褚云卓,109,女性非淋菌性尿道炎的特点是症状不明显或无任何症状。当被感染引起尿道炎时，约有50有尿频、尿道灼热感或排尿困难，尿道口可发现有少许浆液样或粘液脓性分泌物，但一般无尿痛或仅有轻微尿痛的症状。有时宫颈也有炎症或糜烂，宫颈分泌物中有多数分叶型白细胞(高倍镜下每视野超过10个)。合并有输卵管炎、子宫内膜炎、盆腔炎的病人，会出现相应的症状。,2023/7/14,褚云卓,110,常与淋病同时感染。前者先出现淋病症状，经抗淋病治疗后，淋球菌被杀死，而衣原体、支原体依然存在，临床
48、上很易被误认为淋病未治愈或复发。处理不当或治疗不及时可引起并发症(1%)。如急性附睾炎、前列腺炎、结肠炎、咽炎。女性宫颈炎、宫颈糜烂、前庭大腺炎、阴道炎、输卵管炎、盆腔炎、异位妊娠等。可导致慢性腹痛、盆腔炎、不育、宫外孕等。,2023/7/14,褚云卓,111,实验室检查,般男性取尿道分泌物标本,也可取尿道上皮细胞、清晨初段尿离心沉淀物、前列腺液及精液标本检查；女性取宫颈或尿道标本或初段尿离心沉淀物。应取得粘膜柱状上皮细胞，男性取尿道标本时，拭子应深入尿道24cm，轻轻旋转拭子，并停留1020秒；女性取宫颈标本时，应用窥阴器扩张阴道，先用一个棉球将宫颈口擦拭干净，然后用拭子插入宫颈内1cm，用
49、力摩擦采取宫颈粘膜柱状上皮细胞，并停留1020秒。分泌物较少时，则停留的时间应适当延长。,2023/7/14,褚云卓,112,直接涂片检查：一般制成生理盐水湿片和直接涂片各一个。湿片用于直接检测念珠菌、滴虫；直接涂片染色可用于检测念珠菌、滴虫及上皮细胞内衣原体的包涵体，阳性即可确定诊断，阴性结果不能排除NGU诊断。,实验室检查,2023/7/14,褚云卓,113,培养法：衣原体细胞培养：是检查衣原体最敏感、最可靠的方法。常用McCoy细胞或Hela229单层细胞培养，通过观察细胞病变（肿大，变性，脱落）及细胞内特征性包涵体可确定诊断支原体培养：解脲支原体、人型支原体和生殖支原体。检测解脲支原体
50、和人型支原体最可靠的方法是先接种于液体培养基，待有生长后，再接种于固体培养基上，72小时后，如无菌落生长可视为阴性。生殖支原体主要用于液体培养基14天后无生长可视为阴性。,实验室检查,2023/7/14,褚云卓,114,免疫层析法单克隆抗体检查法 基因检测法 血清学诊断试验,实验室检查,2023/7/14,褚云卓,115,4、尖锐湿疣（condyloma acuminatum）,病原体：人类乳头瘤病毒(HPV)传播途径：主要为性传播,2023/7/14,褚云卓,116,尖锐湿疣临床表现,尖锐湿疣多发生在阴茎皮肤和女性生殖器的栖表部位，也可发生在阴道内、宫 颈和肛周。潜伏期通常为3个月，短者1个
