《生化实验一lowry法测Pr含量.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生化实验一lowry法测Pr含量.ppt（21页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、生物化学实验,生物化学与分子生物学系杨 芬,实验室规则,按规章操作，保障实验安全；进入实验室要着白大衣；禁止进食和饮水禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；维持实验室的整洁。,实验分组 实验室卫生 实验报告的书写,实验名称,姓名：班级：学号：,实验原理：,实验目的：,实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表,实验结果：原始数据、计算过程、结论,实验讨论：结果分析、实验注意事项,实验日期：同组人员：,实验报告的书写,一、玻璃仪器的常规清洗,二、试剂瓶、吸量管、试管的放置,基 本 操 作,三、刻度吸量管的使用,四、微量移液器的使用（加样枪）,一、玻璃仪器的常规清洗,二、试剂瓶、吸量管、试管的放置,1、清洗剂
2、洗刷2、自来水冲洗3-5 遍3、蒸馏水冲洗2-3 遍（2-3ml/次)4、倒扣放置,1、试剂瓶用后放回原处、标签面向自己 2、吸量管尖头朝下放置，以免倒流 3、空置干净试管倒扣放在试管架上,选、吸、平、减、吹,三、刻度吸量管的使用,四、微量移液器的使用（加样枪）,单通道数字可调式移液器,多通道手动可调式移液器,1、看清加样枪规格。2、仔细调节旋钮至所需刻度。3、安装枪头。4、压至一档，吸取溶液。5、放出溶液：压至二档。,实验一改良Lowry氏法测定蛋白质含量,蛋白质常用的定量方法,1.凯氏定氮法,2.紫外吸收法,3.呈色法,一、实验目的：,1、学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法2
3、、了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点,二、实验原理：,Pr,Cu2+,OH-,Pr-Cu2+螯合物(紫红色),酚试剂,钼蓝-钨蓝混合物(蓝色),（双缩脲反应）,优缺点,缺点：费时较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。专一性较差，干扰物质较多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油以及含有巯基、酰胺基、伯胺基的化合物等均可干扰。,优点：灵敏度高 双缩脲法的检出限为0.21.7mg/ml，而本法的检出限为0.0150.110mg/ml。,三、实验步骤：,标准曲线的绘制及样品测定,分光光度计以波长650nm依次比色读取光密度值,分光光度计,分光光度计的原理,分
4、光光度计的操作,光源,I0,I,单色器,样品池,狭缝,检测系统,分光光度计的构造,T=I/I0，A=-lg T,Lambert-Beer 定律,A=KcL,分光光度计的原理,K：吸光系数c：溶液浓度L：溶液厚度,c,A标/A测=c标/c测,A：吸光度,T：透光度,2.标准曲线法,分光光度计的使用,1、打开分光光度计，预热20-30min。2、调节旋钮至需要的光波长。3、检查拉杆是否在分光光度计的休息状态。,T档 拉杆1档 空白管 调T 100%：T档 拉杆1档半 调T 0%：A档 拉杆2、3、4档 测吸光度 标准管，测定管休息状态：拉杆1档半,四、结果：,1、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得,实测Pr含量,2、浓度换算 待测蛋白浓度（g/L）=实测Pr浓度稀释倍数,五、注意事项：,1、测定管蛋白浓度应在0.015-0.110mg/ml；2、各管加试剂C必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊；3、精确控制操作时间。,Lets begin！,
