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1、实 验激素对血糖浓度的影响,安徽中医学院生化与分子生物学教研室 朱 洁,目的要求,1、掌握血糖测定的原理-葡萄糖氧化酶法2、掌握大鼠的一般实验方法3、熟悉血糖含量的调节机制，明确肾上腺素和胰岛素对家兔血糖含量的影响。,实验原理,升糖激素与降糖激素的作用相互对抗又彼此协调，共同维持着血糖浓度的恒定。,血 糖,肾上腺素,胰岛素,本实验通过分别给大鼠注射肾上腺素和胰岛素，作用一段时间后再分别采血，对比注射前后血糖浓度的变化，观察激素对血糖浓度的影响。,本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。,葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+H2O2,葡萄糖氧化酶,2H2O2+4-AAP+酚,红色醌类化合物,过氧化物酶,
2、其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在505nm处与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡萄糖含量。,实验原理,1、胰岛素注射液2、肾上腺素注射液 3、葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶过氧化物酶法）4、吸管、分光光度计、电热恒温水浴箱、碘酒棉球、酒精棉球、注射器等。5、麻醉剂：乌拉坦：按大鼠 0.5ml/100g。,实验试剂与器材,（一）动物准备及取血1、动物准备及空腹采血 取禁食16小时大鼠一只，过磅称重，并记录体重。2、取血并测定注射激素前血糖水平 大鼠断尾取血，用血糖仪测定血糖浓度（空腹血糖浓度）并记录“胰前”或“肾前”。3、注射激素 按0.5ml/100g腹腔注射胰岛素或肾上腺素。记录注药时间
3、。,实验步骤,4、注射胰岛素或注射肾上腺素20分钟后，腹腔注射乌拉坦 0.5ml/100g，麻醉，腹主动脉取血，标以“胰后”或“肾后”。,5、将收集的血液置离心机运转5分钟(3000/min.r)，分离出血浆，制备样本管。,大鼠，禁食16小时，称重并记录,腹腔注射肾上腺素0.3ml/100g，记时20分钟,断尾取血，用血糖仪测定大鼠注射激素前血糖水平，并记录胰前或肾前,腹腔注射胰岛素0.3ml/100g，计时20分钟,按 0.5ml/100g，皮下注射乌拉坦，麻醉,将麻醉后大鼠捆绑于解剖台上固定,将收集血液置离心机运转5分钟(3000/min转)，分离出血浆，制备样本管。,腹腔解剖，暴露腹主动
4、脉，抗凝负压管取血，轻轻振荡，静置,葡萄糖氧化酶法试剂盒，分别测定血糖含量，并记录“胰后”或“肾后”,比较大鼠“胰前”或“胰后”血糖的差异以及“肾前”与“肾后”血糖的差异,（二）血糖含量的测定,置37水浴5分钟，用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）。结果处理计算：样本管吸光度（A）葡萄糖（mmol/L）标准液浓度（5.55）标准管吸光度（A）（0.24）比较激素对血糖影响的百分数。,本实验要求男女搭配,操作大鼠时要耐心大胆,特别注意不能放走大鼠.大鼠注射激素后要放回大鼠笼!打开腹腔时不要用厚的劳保手套!换戴一次性手套.实验结束后统一收集大鼠尸体,仔细清理实验台面,不要留有血迹!,实验步骤,讨论思考,1、比较注射激素前、后血糖浓度的变化，这些变化说明什么？2、血糖主要有哪些代谢来源与去路？升糖激素和降糖激素的作用机制是什么？3、葡萄糖氧化酶过氧化物酶法测定血糖的基本原理是什么?4、血糖浓度测定有何临床意义？,
