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1、项目二 畜禽活体检验技术,教学目的,熟悉畜禽流行病现状特点及预防，病原菌的鉴定方法,病毒的分离和鉴定 掌握畜禽临床检疫步骤,病原菌的分离和培养方法,各种动物临床检疫要点,病原菌的分离和培养方法,教学重点,教学难点,一、畜禽流行病现状,1.很多病毒侵害宿主的免疫系统2.动物病原体呈现加速变异的趋势，畜禽间及向人类传播的风险也越来越大3.环境在疫病的流行中占有重要地位4.全球气候变暖扩大了传染病的分布范围,任务一 一般流行病的基本知识,二、畜禽流行病的特点,1.幼龄畜禽疫病突出2.新的流行病增多3.寄生虫病是放牧牲畜的主要危害,三、畜禽流行病发生的条件及预防,传染源 指在体内有病原体微生物、寄生虫
2、生长繁殖并能不断向外界排出病原体的患病畜禽或其他动物。传染途径 就是病原体由传染源排出，经过一定方式再传入其他易感动物所经过的途径。易感动物 是指对某种传染病、寄生虫病易于感染的动物。,传染源,传染途径,易感动物,基本环节,四、动物免疫接种,1.预防接种 为了防患于未然，平时有计划地按一定的免疫程序给健康畜群进行的免疫接种，称为预防接种。,2.紧急接种 和终止疾病的流行，使疫区和受威胁区尚未发病的畜禽尽快建立起特异性保护所进行的应急性免疫接种。,任务二 临床检疫,1.畜禽的群体检查 静态观察 运动检查 采食观察,一、临床检疫步骤,2.畜禽的个体检查 包括群体检查时发现异常个 体或抽样检查（5%
3、20%）的个体,1）视诊2）触诊3）叩诊4）听诊5）检查体温、脉搏、呼吸数6）检查渗出物、漏出物、分泌物、病理性产物的颜色、质度、气味等,二、各种动物临床检疫要点,1.猪的临床检查（1）群体检查 1）运动时的检查 2）休息时的检查 3）采食饮水状态的检查,2）体温检查 猪患急性热性传染病时，在病的发生和发展期，大多表现体温升高，所以在猪的检疫中，检查体温是个非常必要的步骤。在检疫中，要把检查体温和其它方面的检查结合起来进行综合判断。,3）个体检查 个体检查的着眼点为 精神外貌，姿态步样。眼、鼻、口腔及咽喉，被毛、皮肤及四蹄，肛门及排泄物，摄食及饮水，以及体温的变化等。,2.牛的临床检查（1）群
4、体检查 1）运动时的检查,2）休息时的检查,3）摄食饮水时的检查,（2）体温检查 牛的急性传染病和焦虫病等，常表现体温升高，因此在牛的检疫中，检查体温是一个重要步骤。对大群牛的检温，一般常采用“排队保定法”或“检疫夹道”，在保定后再进行测温。测温时为5min左右，测温后记录每头牛的体温度数。当发现体温异常时应做上标记，待全群检查完毕后，再进行复检。,（3）个体检查 牛个体检疫时的着眼点，除精神外貌、姿态、步样、皮肤、被毛等处，大群检疫时还应逐头看牛鼻镜是否干燥，服、鼻孔有无分泌物，嘴角是否流出唾液，被毛是否有光泽.如遇到牛排粪、尿时，也应注意观察其粪便的性状等。,3.羊的临床检查（1）群体检查
5、1）运动时的检查,2）休息状态的检查,3）摄食饮水时的检查,（2）体温检查 羊只的疫病常有体温升高的表现。因此，在羊的临床检疫中，进行测温是很重要的。凡发现体温异常者，应及时剔出进行细致的检查。,（3）个体检查 一般是以大群检疫中剔出的疑似病羊为重点。此外，对可疑被感染的羊只也要做某些病的重点检疫。羊个体检疫时，还要特别注意可视黏膜及分泌物、排泄物的检查，同时注意皮肤、被毛的检查。,4.禽的临床检查（1）大群检疫,1）休息状态的检查,3）饮食时检查,2）动态检查,（2）个体检疫 禽只的检疫以鸡新城疫，禽流感、法氏囊病、鸡白痢、鸡伤寒、鸡痘、鸡传染件喉气管炎、鸡白血病、鸡马立克氏病、鸭痘、禽巴氏
6、杆菌病等为主要对象。,（2）个体检疫 禽只检疫重点项目为精神外貌，行走姿态，冠、肉髯、鼻孔、耳道、眼、嘴、嗉囊或食道膨大部，颈、体、羽毛、皮肤、泄殖孔部、呼吸及饮食状态等。禽类除必要时测体温外，一般不做检查。,5.兔的临床检查（1）观察食欲（2）观察精神及眼色（3）观察耳朵（4）观察背毛和营养状况（5）观察粪便（6）观察体温、呼吸,任务三 动物病原菌实验室检验,一、病料的采集 分离病原菌，必须准确采集含菌最多的病料，必须充分了解各种病原菌在患畜体内及其分泌物和排泄物中的分布情况。采集病料时应尽可能避免杂菌污染。病料应作显微镜检查和分离培养。,二、病原菌的分离和培养方法,1.分离方法（1）病变组
7、织，又是用无菌方法采集的，可将病料直接涂抹在固体培养基平皿上，或用铂耳环钩取少许组织，划线接种于琼脂平皿上或斜面上。如果杂菌太多，可采用平皿法或毛细吸管法分离出纯培养物。,（2）病料是痰、乳、阴道分泌物、粪、尿等材料，污染杂菌较多，则需根据分离的病原菌特性，采用一些对病原菌无害、但对杂菌有杀死作用的方法，事先处理材料，以除去杂菌，然后接种培养基或在培养基中加入一些不妨碍病原菌生长，但对杂菌有抑制作用的抑菌药物，以得到纯的培养物。,（3）如果从肠道内容物，或从被不产生 芽孢的杂菌污染的培养物中分离能形成芽孢的细菌,可将材料或培养物在80加热15min。（4）有些污染杂菌的病料和培养物，可 以通过
8、易感动物排除杂菌，而得到病原菌纯培养物。,（5）液体病料，含菌太少，先作集菌处理，然后接种，以提高阳性检出率。（6）有些病原菌能通过一般隔菌滤板，如钩端螺旋体能通过石棉滤板，而其他细菌则不能随液体病料过滤，取滤过液作培养，可获得钩端螺旋体纯培养物。,2.培养方法（1）温度 绝大多数病原菌最适宜的生长温度是37（2）厌气条件 梭菌属的病原菌（3）CO2环境,3.分离病原菌用的培养基 大多数培养基都以肉或肝浸液为基础，然后按需要加入各种成分配制成各种各样的培养基,碳源,病原菌要求的营养成分,氮源,无机盐类,生长因素,三、病原菌的鉴定方法,1.形态学观察（1）肉眼观察要点 1）菌落形态 2）在半固体
9、培养基中的生长情况 3）在特殊培养基上的生长情况,（2）显微镜观察要点 1）注意菌体的形状、大小和排列规律 2）注意是否产生芽孢和芽孢的位置 3）能不能运动 4）有无荚膜 5）染色反应如何,（3）细菌染色方法 常用的酸性染料有伊红、酸性复红、胭脂红等。复合染料亦称为中性染料，是碱性染料和酸性染料的结合物，如瑞氏染料中的伊红化美蓝，姬姆萨氏染料中的伊红化天青等。,（3）细菌染色方法 最常用的染色法有革兰氏染色、碱性美蓝染色、石炭酸复红染色、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色、印度墨汁染色法、抗酸染色、改良抗酸染色、瑞特氏染色法、姬姆萨氏染色法。,2.生化特性试验糖发酵试验 靛基质（吲哚）试验VP试验
10、甲基红（MR）试验 柠檬酸盐利用试验 硝酸盐还原试验 产生硫化氢试验 明胶液化试验尿素酶试验 牛乳试验3.血清学试验,任务四 动物病毒性传染病实验室检验,1.待检标本的采集和保存（1）拭子标本 应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉、结膜、阴道或直肠内的分泌物。蘸取分泌物后立即将拭子浸入保存液中，密封低温保存。,一、病毒的分离和鉴定,（2）血液标本 无菌采血后加入1/1 000（约相当100 UL/mL）肝素做抗凝剂，也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，振荡脱纤维蛋白。需要时也可不加肝素，自然凝血后取血清做待检标本。,（3）组织标本 无菌采取待检组织35g，立即浸入保存液中，密封低温保存。（4）渗出物
11、标本 在痘疱病灶破溃前，用无菌手术吸取渗出液，混入等量保存液（可用组织标本保存液），封闭低温保存。也可应用灭菌玻璃毛细吸管，无菌操作吸取疱液、脓汁或渗出液，然后在火焰下迅速熔封两端开口，置低温保存。,2.待检标本的运送 绝大多数病毒均对热不稳定，故均应低温保存、运送。标本最好在48h内接种，在4左右保存、运送。如48h内不能接种时，需在-15以下保存、运送。保持温度恒定，温度波动往往对病毒有一定的灭活作用。,3.接种前待检标本的处理 无论采用何种分离手段，都要求接种材料尽可能无菌，并尽可能地使标本中的病毒游离出来。,4.待检标本的接种 由于病毒只能在活的动物或组织细胞内寄生和复制，所以病毒的分
12、离培养技术较细菌的分离培养要复杂一些。通常分离培养病毒的方式有动物接种、胚胎卵接种和组织培养接种等。,.病毒的鉴定程序 病原鉴定的原则是在不断观察的基础上逐渐缩小搜索范围，以期最后的确诊。首先要详细地进行流行病学调查，口岸检疫要了解动物来源地的疫病流行情况。在初步鉴定的基础上，最后鉴定主要靠血清学方法，最常用的血清学方法有中和试验、交叉保护试验、补体结合反应、血细胞凝集抑制试验、间接血凝试验、免疫扩散、免疫荧光抗体技术、放射免疫、免疫酶标记、免疫电泳、免疫层析以及免疫电镜技术等。,小结,一、畜禽流行病现状特点及预防,二、畜禽临床检疫步骤，各种动物临床检疫要点,三、病原菌的分离和培养方法,四、病原菌的鉴定方法,病毒的分离和鉴定,畜禽流行病现状特点及预防？畜禽临床检疫步骤，各种动物临床检疫要点？病原菌的分离和培养方法？病原菌的分离和培养方法有那些？,作业与思考,谢 谢,
