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1、衰退的原因：基因突变 分离现象常见的衰退现象：菌落和细胞形态的改变；生长速度缓慢，产孢子越来越少；代谢产物生产能力下降；,第五节 菌种的衰退、复壮及保藏,一、菌种的衰退与复壮,1.衰退（degeneration）,菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象。,控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是510-4，自发突变的频率为10-810-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的次数）；创造合适的培养条件；采用不易衰退的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）；采用有效的菌种保藏方法。,防止菌种
2、衰退的方法,致病菌对宿主侵染能力下降；抵抗力、抗不良环境能力减弱等。,狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种。,2、菌种的复壮（rejuvenation）,纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮）；淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进
3、行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。采用有效的菌种保藏方法。,菌种的复壮措施,二、菌种保藏,存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）,1.目的：,2.原理：,广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。,3.国内外菌种保藏机构,菌种保藏机构的任务,菌种保藏机构,中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)美国的典型菌种保藏中心(ATC
4、C)英国国家典型菌种保藏所（NCTC）法国里昂巴斯德研究所（IPL）,休眠态,4.菌种保藏的方法,石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。,低温保藏法方法：菌种管置4冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降。,干燥保藏法将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。,真空冷冻干燥法加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。,液氮超低温保藏法将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（-196）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法,几种常用菌种保藏方法的比较,The end,
