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1、食物中毒及肠道传染病采样,前 言,食物中毒和肠道传染病是最常见的卫生事件,在食物中毒和肠道传染病诊断与技术处理过程中,实验室检查是非常重要的,检验结果直接关系到食物中毒和肠道传染病事件的控制和病人的救治,在食物中毒和肠道传染病流行病学调查中对可疑标本的采集与送检,是保证检验质量的前提,同时也是一项涉及面较广的基本技能,每个卫生工作者都应掌握。,病原学分类,食物中毒：化学性 生物性 生物性：细菌、病毒、真菌毒素 细菌性食物中毒：人体摄入了被细菌或其毒素污染的食品后所出现的非传染性急性、亚急性疾病肠道传染病：生物性 生物性：细菌、病毒 细菌性肠道传染病：属我国法定传染病，主要包括霍乱、痢疾、伤寒、
2、副伤寒及其它感染性腹泻采样：细菌性食物中毒的样品采集最具代表性,一、标本的采集原则,1.典型性原则 食物中毒标本的采集不同于卫生评价采样,应根据中毒病人的临床表现和现场流行病学调查,初步判断中毒类型,根据可疑食物的性质采集可能含毒最多的标本。如细菌性食物中毒以病人用药前的排泄物、可疑残留食物,尤其是动物性食物为主;真菌及真菌毒素性食物中毒以食物原料为主;化学性与植物性食物中毒以可疑残留食物、食物原料、病人排泻物及体液为主。,一、标本的采集原则,2.适时性原则 为了防止可疑食物丢失和被检物质组分发生变化,保证得到正确结论必须尽快采样送检。流调人员到达现场后应及时采样送检,临床有时需要实验室结果采
3、用针对性的药物进行抢救,故采样送检的时间性在食物中毒处理中尤其重要。,3.适量性原则 由于引起食物中毒的毒物种类繁多,有时需实验室检索的项目很多,这要求有一定的样本量,在可能的情况下尽量多采。4.程序原则 采样、送检、留样和出具报告必须按规定的程序进行，各阶段都要有完整的手续，责任分明。,一、标本的采集原则,二、食物中毒标本的采集,通过初步调查结果和对中毒事故的初步判断，根据需要进行采样，样品一般情况下有以下几种：.食品原料及剩余食品；.患者的呕吐物、粪便、血液、尿液；.食品容器及加工工具表面涂抹；.食品生产经营者的手试、肛试，必要时可做全面的身体健康检查；.其他与中毒食品有关的物品或病人的标
4、本等。,1.采样用具要求,所有采样的用具包括标本容器要符合微生物检验的无菌及无抑菌物质采样用具包括酒精灯、镊子、剪刀、勺子、试管架、灭菌棉拭子、灭菌肛拭管、灭菌生理盐水管、灭菌aCl营养肉汤管、-运送培养基、分离平板、pH7.6甘油缓冲液、灭菌容器(玻璃瓶、塑料袋、纸袋等)、饮盒；,1.采样用具要求,止血带、采样垫巾、无菌棉签、复合碘伏消毒液、真空采血管（生化项目用生化管；免疫项目用生化管或肝素抗凝管；血常规项目用2mlEDTA-K2抗凝管）、持针器、一次性静脉采血针。,2.采样人要求,A.采样必须由2 名以上专业人员执行,出示证件说明来意及采样依据,告知被采样人所享有的权利和义务,在被采样者
5、的陪同下进行样品的采集。B.注意被采样人及采样人员的卫生和安全，采样人员采样时应着工作服，戴口罩和一次性手套。,3.采样方法,（1）残存食物、原料的采集在没有明确的可疑中毒食品线索时，采取样品应注意样品的代表性;如果已取得可疑中毒食品的部分依据，则应注意样品的典型性，即有针对性地采取最容易、最可能、感官异常、最明显部位的样品。采样数量比卫生监测采样应稍多一些，以便多次反复检测。采取可疑食物时，最好采取餐桌上剩余食物。若做细菌检验，必须注意无菌操作，可用灭菌镊子夹取后，放入灭菌的容器内，取200500克。,如无剩余食物时，可用灭菌盐水，冲洗盛装过可疑食物的容器或食具，并将洗涤水装入灭菌容器内采样
6、；亦可用沾有灭菌生理盐水的消毒棉拭子在盛过可疑中毒食物的容器内涂擦，用剪刀剪除棉签柄，或是将棉签柄在试管口折断（用酒精灯火焰烧断），使棉签头置入装有灭菌盐水的试管内。体积较大的肉食及鱼类等，可将其表面消后，取内部样品，放入灭菌容器内。必要时也可采取半成品及原料送检。,（2）食物制售环节的采样炊具、容器、锅、盆、桶、刀、菜板、抹布等样品的采取，可用棉拭沾灭菌aCl营养肉汤管反复涂擦，弃去手指接触污染部分棉签，然后置于增菌液内。菜板可用消毒刀刮取其表面，抹布可用灭菌剪刀剪下一块，剪下的抹布、菜板(墩)刮下的木屑，分别用灭菌工具采取，置入不同的装有少量灭菌生理盐水的试管内。,（3）患者吐泻物及粪便的
7、采集患者呕吐物、排泄物及洗胃液样品，应取新鲜的，并避免混入其他杂质和细菌。若怀疑为细菌性食物中毒，采粪便时应用肛拭子采样，已用抗生素治疗后采取粪便样品，可能影响检验效果。若病人正在洗胃或呕吐，则应直接采取洗胃液或呕吐物装入灭菌的容器内。中毒者的粪便、呕吐物样品，每份取5-10克，洗胃液100200ml。,肛拭采样A、采样人员采样前检查肛拭管表面是否光滑、有无破损及裂痕以防意外；然后将肛拭管放于润滑液中（灭菌的pH7.6甘油缓冲液、生理盐水或肉汤)B、被检者采样时匍匐于病床或桌椅上，充分暴露其肛门，采样者嘱被检者放松，避开内外痔，将肛拭管轻轻插入肛门约5cm，儿童约-3cm,轻轻转动一圈，擦取直
8、肠表面的粘液后取出，放入生理盐水、增菌液或C-B运送培养基中。C、为防止污染，装有增菌液的试管在开、盖塞子时应将试管口在酒精灯火焰上灭菌。,特别注意：病人痔疮严重？采病人刚排出的新鲜粪便，用灭菌棉签从粪便中采取样品，放入采便盒或采便管内 若让中毒病人自行留便可能影响致病菌的检出率。,（4）血、尿样采集怀疑是感染型细菌性食物中毒时，可在发病初期采血直接培养病原体。观察从患者血液、排泄物中分离出的菌株，是否与食物中分离出的菌株同一菌型。对疑似细菌性食物中毒,应采患者急性期(3 d 内)和恢复期(2 周左右)血液。方法:无菌操作抽取静脉血3m1 于无菌试管中,同时采集1 份正常人血样作对照；尿样品每
9、份取100-200毫升。,（5）组织器官的采集组织器官采集包括尸解或手术后采取的胃、肝、肾、肺等重要器官标本,尸解最好在病人死亡后48 h内进行,要注意防止所用器械带来污染。每一采集部位应更换消毒器械,每种组织应多部位采集,每份标本应采集50100 g 于无菌洁净容器中,分别保存冷藏送检。,（6）从业人员带菌检查细菌性食物中毒对从业人员带菌检查非常重要,粪便用肛拭管直接采样(不宜留便),保存于增菌液中；对患有呼吸道或皮肤病从业人员,用无菌拭子对其咽部或皮肤病灶处进行涂抹采样,保存于无菌试管或增菌液中同时涂片数张(立即火焰固定)。,（7）直接平板划线分离当高度怀疑为某些常见细菌性食物中毒时，为缩
10、短检测时间，常根据要求用可疑样品在采样现场进行直接平板划线分离。平板划线分离培养细菌的目的是将病理材料中的细菌分散，以便使细菌单在，从而发育成单个菌落，防止长成菌苔，避免可疑菌被杂菌掩盖。原理：表面划线，可疑菌被稀 释，单个菌发育成肉眼可见的有 某些特征的菌落。,方法：1.将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等 的区域（目测）。各区之间的交角应为120左右（平板转动一定角度约60），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。,2.点燃酒精灯后，左手持皿，底朝 下，开口向上，右手持接种环，在火焰上烧灼 冷却后取少许 检样涂在培养基
11、边缘，将接种环上多余的检样在火焰上烧掉，接种环自涂抹处与平板面成3040夹角，以腕力在平板表面轻轻地分区进行“Z”字形划线，先在A区划3-4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少而定)。,3.划完A区后应立即 烧掉环上的残菌，以 免因菌过多而影响后 面各区的分离效果。4.将烧去残菌后的 接种环在平板培养基 边缘（无菌）冷却一 下，并使B区转到上方，接种环通过A区(菌源区)将菌带到B区（注意压线），进行“Z”字形划线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。5.随即将皿底放入皿盖中，烧去接种环上的残菌。,三
12、、水污染事件的样品采集,在调查水域污染状况时，需进行综合分析判断，抓住基本点（如水流入前、流入后充分混合的地点，用水地点，流出地点等），以取得代表性水样。对江河、湖泊、泉水、井水等水源采样时，将容器浸入水体中，待水至容器23处时取出。在采集管网系统水样前，先消毒，再放水5分钟，以保证样品具有代表性。严格按无菌采样规范要求采样。,四、标本的送检,中毒标本应尽快分析,标本送检前,应根据采样记录和样品登记表清点样品,填好装箱单和送样单,盛装标本的容器或包装要牢固,防止破碎和污染,把标本放入样品箱(或塑料桶)中由专人负责,立即送检。微生物检验和易变质标本一般从取样到检验不应超过2 h,如超过2 h,应
13、将标本保持在8 以下,且不得超过6 h。短途(市内)运送加冰保冷即可;长途运送需加干冰保冷（高温季节特别注意）。,标本采集与送检是食物中毒调查处理过程中重要步骤,要求在标本采集后应尽可能地用快速检验方法在现场进行定性检验,以协助诊断;对现场无法进行检验的标本在保证标本原始状态下尽快送检,以便在最短的时间内查明中毒原因,采取有效的抢救措施抢救病人,制定控制措施防止蔓延。,五、注意事项,1.采样前应通知实验室做好准备，必要时，邀请实验室人员到现场采样。2.要填写采样记录，采样记录中的采样目的项要填写具体的检验项目。采样记录要有卫生调查人和被采样人的签名。3.样品必须贴上标签，填写名称或编号、时间、
14、地点、数量、现场条件、采样人等。4.做到严密封闭包装，置冰箱内保存，温度通常控制在8 以下，并应在6小时内送至实验室，如无条件时，在样品采集和运送途中应用冰壶冷藏。,5.样品容器最好是清洁的玻璃器皿，也可用无色塑料制品，切勿使用金属或陶土器皿。如发现容器可能影响检验结果时，应在检验报告上注明。6.食品样品采集尽量采取中毒患者食用后的剩余食品;无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的容器，取洗涤液;必要时采集半成品或原料。7.可疑细菌性食物中毒或原因不明时，要用无菌采样方法进行。,8.可疑细菌性食物中毒或原因不明时，尽可能采集未用药患者的样品，但用药后的样
15、品仍可能有价值。9.大便样品采集必须用采便管采集腹泻病人大便，若让中毒病人自行留便可能影响致病菌的检出率。10.对大型食物中毒一般至少应采集10-20名具有典型临床症状的患者的检验样品，同时采集部份且有相同进食史但未发病者的同类样品做对照。,11.血液采集 怀疑感染型细菌性食物中毒时，采中毒病人急性期(3天内)和恢复期(2周左右)静脉血各3ml，至少采集5名病人，同时，采集正常人静脉血作为对照，观察抗体效价的变化，以便明确致病菌。当可疑化学性食物中毒时，根据情况也应考虑采集血液样品。12.当怀疑细菌性食物中毒时，应根据对食品加工人员带菌情况调查结果进行采样，可用采便管对厨师进行肛拭。对患有呼吸道感染或皮肤病从业人员，应对其咽部皮肤病灶处进行涂抹采样。13.送样要及时，做细菌检验的样品应在冷藏箱内保存，温度通常控制在8 以下，并应在6小时内送至实验室。,影响检测的因素,不恰当的选择 不正确的采集方法 不正确的运送温度 运送时间延长,未贴标签或错贴标签 干涸的拭子样本 容器被压碎或有破裂 样本量不足,谢谢！,
