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1、1、熟悉水稻苗期稻瘟病的症状特征。2、学习水稻苗期稻瘟病的鉴定方法。,一、目的,二、内容说明,水稻稻瘟病（Pyricularia oryzae）是水稻生产上的主要病害之一。它是一种真菌病害，分布范围及广，遍及世界及我国各个稻区，流行速度极快，对水稻的危害极大。根据稻瘟病发生的时期和部位，可分为苗瘟、叶瘟、节瘟、颈瘟和粒瘟。以叶瘟发生最早，在秧苗时期就可以发生，并可以进行鉴定。,虽然有些品种具有高度抗稻瘟病的特性，但是由于病源菌的生理小种变异频繁，抗病品种的抗性容易丧失，很快会变为感病型。这些并非是品种抗病性的改变，而是由于病源菌生理小种的频繁变化所致。必须不断了解病原菌的变化，并不断选育出新的
2、抗病品种用于生产，才能有效地控制病害。,稻瘟病发生和流行的环境条件，温度以25-28最为适宜，空气相对湿度为96%以上最为适宜。这时菌丝发育和分生孢子形成均有利。分生孢子的萌发还要求有水滴存在。光照对孢子的形成、萌发、浸入都有抑制作用。分生孢子萌发后，浸入组织，经四天的潜育期就可出现病班，稻株易感病的生育时期是四叶期、分蘖期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易导至稻瘟病的发生和流行。稻瘟病的鉴定方法分为人工接种鉴定和自然鉴定两种。前者常用于苗瘟和叶瘟的鉴定，后者可用于苗瘟、叶瘟、枝梗瘟和颈病等的鉴定。,三、所需用品和操作方法,（一）所需用品1、材料：（1）抗感稻瘟病特性不同的水稻品种材料数个。（2）供
3、试稻瘟病菌种。从当地收集分布广、致病力强的主要稻瘟菌代表性生理小种，将不同小种分别进行培养繁殖，接种时混合使用。,2、仪器和用品 高压灭菌锅、超净工作台，酒精灯、恒温培养箱，三角瓶、培养皿、接种环、搪瓷盘、显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、普通喷雾器或医用喷头喷雾器、注射器、橡胶管、保温保湿遮阳用品等。3、药品 可溶性淀粉、酵母、琼脂、大麦或高梁种子、无菌水等。本实验将涉及到以下的器具:,（二）操作方法,1、人工接种鉴定法（1）制备菌种采用酵母淀粉琼脂培养基 将琼脂10-15g放入1000ml水中加热溶化，再加入可容性淀粉（或蔗糖）10g，酵母2g，分装入试管中，进行高压灭菌。取出后制成斜面，接入
4、所采集的稻瘟菌菌种，放在26-28恒温箱中培养3-4天后，摇动三角瓶中的大麦粒，使菌丝均匀生长。待菌丝体长满大麦粒并变黑时，用自来水冲洗大麦粒上的菌丝，再将大麦粒薄摊于搪瓷盘中，用1-2层纱布覆盖以保湿，置于25-28下培养48小时，即可产生出大量孢子，可供接种之用。应注意在扩大繁殖时搪瓷盘内的湿度不宜保持过高，否则只长大量菌丝，而产孢子很少。,病原菌的一级培养繁殖,病原菌的二级培养繁殖,（2）育秧 将各供试水稻材料的种子进行粒选，各取30-40粒种子，经消毒、冲洗、催芽后，在盛有肥沃泥土的搪瓷盘中育秧。每个盘中最好同时安排有感病和抗病品种作对照。在幼苗2叶期定株，每个材料选留10株生长一致的
5、秧苗。定株后酌施2-3次氮肥，最后一次施氮肥应在接种前3-4天施用，使幼苗生长嫩绿。一般在3-4叶期接种。如采用注射接种鉴定法，可在秧田中育秧，移植于大田后进行接种鉴定。要注意以下几点：,适时播种 既要考虑到在自然条件下的湿度和温度，最利于病菌的浸入，发病与流行，又要使供试材料正是最易感病的生育时期，一般在34叶期，日平均气温2528 和阴雨高湿，叶面长时间（12小时以上）常有水珠的时期，最有利于发病。育秧方式 采用育秧盘育秧，每盘中最好都安排感病品种对照，整个鉴定材料中还应安排品种对照。采用注射接种方法，可以在秧田育秧，后移植于本田。苗床要增施氮肥（接种前45天），以利于发病。,（3）接种喷
6、雾接种：当秧苗达3-4叶期时，先按病菌小种分别配制孢子悬浮液，用100倍显微镜检孢子密度，平均每个视野应有孢子20-25个（孢密度则为20-25万个/ml）。然后将不同生理小种的孢子悬浮液混合，用于接种。采用专用喷雾器喷雾接种。喷雾时要将叶片充分均匀湿润。接种后，在26-28下，用薄膜覆盖保湿24小时。然后移至室外，在20-30下保持高湿，培养7天，进行病情鉴定。,【孢子悬浮液的配制】将上述产生孢子的大麦粒放入盛有自来水的烧杯中经搅拌制成孢子悬浮液，其孢子浓度在100倍显微镜下观察，平均每个视野2025个ml，随后将不同小种的孢子悬浮液混合成混合孢子悬浮液。【接种】用专用的普通喷雾器或医用喉头
7、喷雾器喷雾接种。喷雾时要使叶片上布满均匀的雾点。接种最好是在专用接种室内进行，便于保湿保温。【保温、保湿和遮强光】喷雾接种后，秧苗应在2628和保持叶片上有水珠的湿度条件下24小时，而后移于室外,在2030下，经4天左右即可见发病。,注射接种：【孢子悬浮液的配制】与“喷雾接种”相同。【接种】一般在水稻67叶期分蘖进行，接种的分蘖必须有一张未展开的嫩心叶，使用医用皮下注射器从叶鞘外侧注入孢子悬浮液，直到多余菌液从心叶中冒出为止。接种后7天调查植株的发病情况。【注意】这种方法把菌液直接注射到叶鞘内，使心叶较长时间处于浸渍状态，保证了湿度，因此，发病往往较喷雾法重，一般条件的情况下采用。,2、自然诱
8、发法 选择稻瘟病重病区，在多雾天气和阴雨的条件下，种植鉴定材料，采用自发诱发抗病鉴定。,将鉴定材料种植在重病区肥沃土壤上，施氮水平略高于当地丰产田。如有必要可进行人工田间接种，以诱导发病。每个鉴定材料一般栽植10-20丛，可移栽或直播，重复三次。以当地抗、感品种作对照。在鉴定区周围应种植若干行咸感病的品种作诱发行，以增加感染强度。保持高湿条件。,对于数量较大的世代材料，每个株系种植2-5行，每行10株（丛），每隔10个株系种植一个抗、感病品种作对照。当感病品种达到高度发病时，即可进行病情鉴定。,3、病情鉴定 一般在接种后7天左右进行病情鉴定。病情鉴定的方法可按全国稻瘟病鉴定分级标准（下表）逐株进行，分别记录每株鉴定的结果，然后计算各品种的病情指数。,也可供参考国际水稻所将稻瘟病的抗性分级标准分为10级（下表）。,苗瘟和叶瘟抗性分级标准,苗瘟和叶瘟抗性分级标准（IRRI）,四、作业,1.分组进行稻瘟病的苗期人工喷雾接种鉴定。先配制病菌孢子悬浮液，在100倍显微镜下检查孢子数，明确是否符合所要求的孢子悬浮液。2.进行喷雾接种和喷雾接种后的保温、保湿和遮光等管理工作。3.接种7天后，进行发病情况检查，确定供试水稻品种抗性4.水稻抗瘟性鉴定应注意哪些问题？,
