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1、,细菌的分类及鉴定同济医院检验科,细菌的生物化学试验,原理：由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别细菌的类别，这种试验称为细菌的生化反应试验,常用检查方法,碳水化合物代谢试验氨基酸和蛋白质代谢试验碳源利用试验呼吸酶类试验抑菌试验,碳水化合物代谢试验,糖（醇、苷）类发酵试验,原理 由于细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖的能力不同，终末产物亦不一致。应用 鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。,氧化一发酵试验(OF试验),原理 氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖 发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解
2、葡萄糖 产碱型：在有氧或无氧环境中都不能 分解葡萄糖,结果：两支培养基均无变化为产碱型；两支培养基均产酸为发酵型；若不加石蜡的培养基产酸为氧化型。应用：肠杆菌科细菌（发酵型）非发酵菌（产碱型/氧化型）葡萄球菌（发酵型）微球菌（氧化型）,-半乳糖苷酶试验,原理：有的细菌可产生-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。,结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在2030min内显色。应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。,七叶苷水解试验,原理：七叶苷 七叶素 黑
3、色化合物培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。,细菌,枸橼酸铁,结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。应用：D群链球菌（+）其它链球菌（-）,甲基红试验,原理：葡萄糖 丙酮酸 混合酸（pH)醇酮醛（pH)红色反应（+）橘黄色（-）,细菌,甲基红试剂,培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。应用：大肠埃希菌（+）产气肠杆菌（-）肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属则为阴性。,V-P试验,原理：葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 红色化合物（+）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基,细菌,OH-,O,胍基,结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35 4h后仍
4、如故者即为阴性。应用：常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。产气肠杆菌（+）大肠埃希菌（-）,蛋白质和氨基酸代谢试验,吲哚试验,原理 色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚（红色）应用 肠道杆菌的鉴定。大肠埃希菌（+）沙门菌属（-）,对二甲基氨基苯甲醛,硫化氢试验,原理 含硫氨基酸 硫化氢 硫化铅/硫化亚铁（黑色）应用 肠杆菌科菌属间的鉴定。,细菌,醋酸铅/硫酸亚铁,尿素（脲）酶试验,原理：无色尿素 氨 红色应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。,细菌,苯丙氨酸脱氨酶试验,原理 苯丙氨酸 苯丙酮酸 10%氯化铁 绿色化合物应用：肠杆菌科的鉴定 变形杆菌属、摩根菌属、普罗威 登斯菌属（+）,氨
5、基酸脱羧酶试验,原理：氨基酸 特异性脱羧酶 胺CO2 指示剂变色应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如肺炎克雷伯菌赖氨酸为阳性，鸟氨酸为阴性。,明胶液化试验,原理：明胶 明胶酶 氨基酸 失去凝固力应用：肠杆菌科细菌的鉴定。如沙雷菌、普通变形杆菌、阴沟肠杆菌等。,碳源利用试验,枸橼酸盐利用试验,原理 枸橼酸盐 碳酸盐+氨（pH)溴麝香草酚蓝 绿色 深蓝色应用：肠杆菌科细菌的鉴定 埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌 属（-）,呼吸酶类试验,细胞色素氧化酶试验,原理 盐酸二甲基对苯二铵 醌类化合物（深紫色）应用 奈瑟菌属、假单胞菌属（+）肠杆菌科（-）,细菌,Cyt氧化酶,过氧化氢酶（触酶）试验,原理 某些细菌分泌过氧化氢酶，使过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。应用 金黄色葡萄球菌、奈瑟菌属（+）链球菌属（-）,（血浆）凝固酶试验,原理金葡 血浆凝固酶应用：致病性葡萄球菌的鉴定,游离,结合（凝聚因子）,协同因子,凝血酶,纤原,纤维蛋白,胆汁溶菌试验,原理 胆盐、去氧胆酸钠和牛黄胆酸钠能选择性的溶解肺炎链球菌。应用 肺炎链球菌（+）甲型链球菌（-）,CAMP试验,B族链球菌,
