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1、课题3 分解纤维素的微生物的分离,一、基础知识,1.纤维素,纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。,土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。,2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,一、基础知识,在2支20mL的试管中，分别放入16cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（7080U/mL）。将二支试管
2、固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。,1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。,底物：酶所作用和催化的化合物。,在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；,思考1实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？,滤纸崩溃法,（2）纤维素分解菌的筛选,1、筛选纤维素分解菌的方法_。该方法可以通过_反应直接筛选。,刚果红染色法,颜色,2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被_分解后，红色复合物无法形成，出现以_为中心的_，可以通过_ 来筛选纤维素分解菌
3、。,红色复合物,纤维素酶,纤维素分解菌,透明圈,是否产生透明圈,可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,练一练：,1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是,A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是,A.刚果红能与纤维素形成红色复合物 B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,(三)、实验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别培养基,挑选菌
4、落,1、纤维素分解菌选择培养基属于_（固体、液体）培养基，原因是_,【资料二】选择培养,阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：,液体,没有添加琼脂,2、该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是_,具有,以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；,若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将_改为_。,3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？,葡萄糖,纤维素粉,【资料三】刚果红染色法,方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：在倒平板时就加入刚果红,鉴别纤维素分解菌的培养基,(水溶性羧甲基纤维素钠),颜色反应基本上是纤
5、维素分解菌的作用,操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,思考：这两种方法各有哪些优点与不足,挑选产生透明圈的菌落,挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C 370C培养，可获得纯培养。,四、结果分析与评价,1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。,分解纤维素的微生物的分离,纤维素酶,刚果红染色,筛
6、选原理,实验设计,土壤取样,选择培养,涂布培养,纯化培养,前置染色法后置染色法,富含纤维素土壤,增大分解菌含量,染色鉴别,分离出分解菌,课堂总结,1本实验关于选择培养目的叙述正确的是()A可以增加纤维素分解菌的浓度 B可以减少纤维素分解菌的浓度 C所用培养基是固体培养基 D所用培养基是平板培养基,课堂检测,A,2.筛选出纤维素分解菌后还需要用什么实验来确定()A发酵产纤维素酶 B发酵产纤维素 c纤维素酶分解滤纸 D纤维素分解产 生葡萄糖,A,3.在105稀释度下，平板上生长的平均菌落数为50则每克样品中的菌落数是()A5107 B50 C5108 D503,A,4.能排除培养基是否有杂菌污染的
7、方法是()A将未接种的培养基放在实验桌上培养 B将未接种的培养基放在窗台上培养 c将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D将已接种的培养基放在恒温箱中培养,C,5请分析下面的培养基配方，回答下面的问题：纤维素分解菌的选择培养基 纤维素粉 5 g NaN03 1 g Na2HP047H 20 1.2 g KH2P04 0.9 g MgS047H 20 0.5 g KCl 0.5 g 酵母膏 0.5 g 水解酪素 0.5 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000 mL,(1)上述配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?(2)这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何选择的?(3)如果要证明该培养基的选择培养作用可用培养基做 实验。,液体培养基 培养基中无琼脂等凝固剂,有选择作用 本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的细菌可以大量繁殖，不能利用纤维素的微生物则难以生存。,牛肉膏蛋白胨,对照,
