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1、第24章 病毒感染的检查方法与防治原则,http:/,1）掌握标本的采集与送检原则、病毒感染的快速诊断；2）熟悉病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗；3）了解病毒的分离培养。,学习要求,http:/,第一节 病毒感染的检查方法,病毒学实验室诊断有三个方面：直接检测和分离鉴定；检测病毒核酸和抗原成分；检测特异性抗体。,http:/,第一节 病毒感染的检查方法,一、标本采集与送检：,1、采集的标本：通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。,（一）供病毒分离培养、检测核酸和抗原,http:/,2、采集原则,（1）时间:在发病初期（急性期）采取，较易检出病毒，越迟阳性
2、率越低。（2）类型:在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰；（3）运输:冷藏速送。病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。远距离运送，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。（4）处理：无菌操作；污染检材，加双抗生素或氯仿处理。如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。,http:/,（二）供血清学检查的标本的采集原则,1、检测特异性抗体需要采取急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后23周采取。2、血清标本放4-20保存，试验前血清标本以5630分钟处理去除非
3、特异性物质及补体。3、无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。,http:/,二、形态学检查,电子显微镜（EM）:能观察病毒颗粒的形态和大小。光学显微镜:能观察病毒感染细胞内的病理变化，如包涵体或多核巨细胞等。例如，狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检出嗜酸性包涵体，称为内基小体，可辅助诊断狂犬病。,http:/,三、病毒的分离培养,（一）病毒分离的一般程序是,鉴定病毒种型(血清学方法),检验标本杀灭杂菌(青、链霉素)接种,易感的动物出现病状 鸡胚病变或死亡细胞培养细胞病变,http:/,http:/,（二）分离病毒的鉴定,1病毒在细胞内增殖的指征（1）细胞致病作用(Cytopathoge
4、nic effect,CPE):病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断。（2）红细胞吸附现象（3）干扰现象（概念、作用机理、意义）2病毒感染性的定量测定：,http:/,病毒在细胞内增殖的指标,正常细胞,病变细胞,http:/,干扰现象,概念：两种不同病毒或同种异型病毒、感染同一细胞时，一种病毒抑制另一病毒增殖的现象。,病毒诱导宿主细胞产生干扰素:抑制被干扰病毒的生物合成。竞争干扰：一种病毒破坏宿主细胞的表面受体，因而阻断另一病毒吸附。改变宿主细胞的代谢途经：从
5、而阻止第二种病毒的mRNA的合成或其他生物合成过程。产生缺陷病毒:其基因不能正常复制，但能干扰感染性病毒体的复制，这种缺陷病毒称为缺陷干扰颗粒。,http:/,四、病毒成分（核酸及抗原）的直接检出,（一）直接检出病毒核酸 1核酸杂交 2多聚酶链反应 3.基因芯片技术（二）直接检测病毒抗原 1免疫荧光（IF）技术 2酶联免疫吸附试验（ELISA）,http:/,ELISA,Microplate ELISA for HIV antibody:coloured wells indicate reactivity,http:/,五、特异性抗体的检测,病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗原免疫应答，特
6、异性抗体效价升高或lgM抗体出现有辅助临床诊断的价值。（一）补体结合试验（CF）（二）中和试验（NT）（三）血凝抑制试验（HIA）,http:/,光镜-包涵体,电镜,免疫荧光,ELISA,分子生物学技术,杂交,PCR,六、病毒感染的快速诊断,http:/,第二节 病毒感染的免疫预防,http:/,一、人工主动免疫,人工主动免疫制剂病毒疫苗：（一）减毒活疫苗是由从自然界或人工突变培育筛选出的致病性减弱或丧失的病毒突变株制备而成的疫苗，如脊髓灰质炎活疫苗。（二）灭活疫苗是利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性后制备而成。如乙型脑炎灭活疫苗。（三）亚单位疫苗是将病毒中有效的免疫原成分提取制备而成
7、。（四）基因工程疫苗利用基因工程技术制备的病毒疫苗主要有：基因工程亚单位疫苗；基因工程载体疫苗；核酸疫苗。,http:/,http:/,二、人工被动免疫,常用制剂有：抗病毒免疫血清:现有抗麻疹、抗狂犬病、抗乙型脑炎免疫血清等，这些免疫血清具有显著的预防作用；人免疫球蛋白制剂:包括人血清丙种球蛋白、胎盘球蛋白 特异性免疫球蛋白：从某种病毒感染者的血清中提取、纯化后制备的免疫球蛋白，可紧急预防相应的病毒感染，如乙型肝炎免疫球蛋白（HBIg）。,http:/,1抗病毒的化学制剂：目前抗病毒化学药物主要有核苷类药物。（1）核苷类药物：通过阻抑子代病毒基因的合成与表达，抑制病毒复制.常用药物有:用于DN
8、A病毒感染:阿糖腺苷、碘尿苷、无环鸟苷（阿昔洛韦）、丙氧鸟苷；用于HIV感染:叠氮脱氧胸苷（AZT）广谱抗病毒:3-氮唑核苷，对多种RNA或DNA病毒有抑制作用。,第三节 病毒感染的治疗,http:/,（2）病毒蛋白酶抑制剂：通过抑制病毒蛋白酶的活性，阻止病毒的复制.常用药物有印地那韦、利多那韦等，对HIV有一定抑制作用。（3）其它抗病毒药物：金刚烷胺或甲基金刚烷胺用于甲型流感的治疗，甲酸磷霉素用于疱疹病毒感染的治疗。,http:/,2干扰素及干扰素诱生剂:干扰素具有广谱抗病毒作用，主要用IFN-，副作用小，对某些病毒性疾病的防治有较好的效果。3中草药:黄芪、大青叶、板兰根、贯众。4其他:单克隆抗体、治疗性疫苗、细胞因子等免疫制剂。,http:/,
