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1、实验二、氨基酸的甲醛滴定法,问题提出,1、滴定法一般需要用什么物质作为滴定终点的标准？2、这里所用的指示剂是什么？3、它PH值的变化范围是多少？4、我们的实验目的是什么？5、AA滴定为什么加甲醛？,甲醛滴定的是AA哪个基团的氢？,一、目的与要求:掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作方法。二、原 理 用甲醛与氨基相互作用，使氨基上的二个氢原子被甲醛所取代生成氨基酸的二羟基衍生物。由于氨基上的氢被取代，则氨基上的H+离子解离的PK值降低到7左右，滴定终点在PH9左右，这样就可以用酚酞指示剂，用氢氢化钠来滴定-NH3+上的H+。从而计算出氨基酸的量。,三、试剂,1、中性甲醛2、0.5%酚酞乙醇溶
2、液3、标准的氢氧化钠液4、0.01N Gly液5、未知浓度的Gly液,四、主要的器材,如何正确使用滴定管？,五、操作方法,甘氨酸氨基氮回收率 1取锥形瓶3个，编号，向第1、2号两瓶内各加入2毫升0.01N标准甘氨酸溶液及1-2滴酚酞指示剂。向第3号瓶内加入2毫升蒸馏水及1-2滴指示剂作为对照混匀后，用0.01N标准氢氧化钠溶液滴定第1号瓶内的溶液至微红色，并保留作为掌握滴定终点的颜色标准。向第2、3号瓶内加入4毫升中性甲醛溶液混匀，分别用0.01N标准氢氧化钠溶液将它们滴定至第1号瓶颜色，将每个编号都重复操作2次，并求出甘氨酸氨基氮的平均回收率。,甘氨酸氨基氮回收率=2取未知浓度的甘氨酸溶液2毫升，按照上述方法进行测定平行做2份，并计算出每毫升该种甘氨酸溶液中含有氨基氮的平均毫克数。氨基氮(毫克/毫升)=（V2-V3)*0.14008/2,注意事项,1、滴定管的清洁与检查2、尽量要求数据准确3、参比颜色,思考题与实验报告,1、甲醛滴定时，加入的氢氧化钠溶液滴定的是氨基酸的氨基或羧 基？为什么？2、该滴定法能否定量测定蛋白质的水解溶液？3、是否所有的AA均能用该方法测定？为什么4、为什么计算氨基酸含量可只计算氨基氮？值 日实验报告,
