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1、医学微生物学,实验一 细菌形态学,本次实验内容,一、实验室规则二、细菌的基本形态和特殊 结构的观察三、革兰染色法四、油镜的使用,（一）实验前要做好实验预习，进实验室只带必要的文具、讲义，并穿工作服。（二）实验室内应保持清洁、安静，实验时要认真严肃，禁止抽烟、饮食和开玩笑。,一、实 验 室 规 则,（三）爱护实验器材，注意节约实验材料，实验室内任何物品不得带出室外。（四）注意安全，若带菌材料污染桌面、地板、书籍和衣物或误吸入口，应立即报告教师进行处理。,（五）实验中待培养的材料应放在培养区；实验用过的带菌材料如吸管、玻片等应放在消毒缸、消毒箱等消毒区，不得放在桌上或冲洗于水槽内。,（六）实验完毕
2、，桌面应整理清洁，洗手后方可离室。值日同学负责湿性打扫实验室，并关好水、电、门窗。,细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。,二、细菌基本形态的观察,1球菌：如葡萄球菌经结晶紫染色后为球状，常堆集成葡萄串状，呈紫色。,金黄色葡萄球菌血涂片,葡 萄 球 菌,肺炎球菌,肺 炎 球 菌,链 球 菌,链 球 菌,2杆菌：如大肠杆菌经番红染色后呈淡红色杆状，两端钝圆，散在排列。,大 肠 杆 菌,3螺形菌：如霍乱弧菌经稀释复红液染色后呈红色弧形，菌体微弯，如逗点状，或呈眉毛状，散在排列。幽门螺杆菌呈螺旋状、U状、S状及海鸥展翅状。,幽门螺杆菌,三、细菌的特殊结构：1、鞭毛 2、荚膜 3、芽
3、胞 4、菌毛,鞭 毛,Flagellum,化学组成：,功能：,鞭毛蛋白,运动器官与致病有关鉴定分类细菌,变形杆菌（鞭毛）,荚 膜,化学组成：,功能：,Capsule,多糖或多肽,抗吞噬作用粘附作用抗有害物质损伤作用,芽 胞,功能与医学上意义：,Spore,对外界的抵抗力增加可发芽成繁殖体有致病性,有鉴别作用应以杀死芽胞为灭菌效果的指标,四、革兰染色,（一）细菌涂片的制作（二）染色：单染色法 革兰染色法 抗酸染色法,复染色法,（一）细菌涂片标本的制作 1涂片：取清洁无油载玻片一张，将接种环用火焰烧红灭菌，待冷后取一环菌液轻轻涂抹在玻片上，制成直径约1cm大小薄层，然后将接种环灭菌。,2干燥：涂片
4、置室温自然干燥，必要时可将标本面朝上，放在离火焰较高处微微烘干，但切勿在火焰上直烤。,3固定：标本面朝上，用钟摆样速度来回通过火焰三次。,（二）革兰染色法步骤 1初染：在上述已固定的涂片 上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。2媒染：滴加革兰碘液，作用13分钟，水洗。,3脱色：滴加 95酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。4复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。,1 初染:结晶紫染色液,1分钟 媒染:革兰碘液,1分钟 脱色:95%酒精,15-20秒 复染:番红染色液,30秒,涂片-干燥-固定,（二）革兰染色法步骤,（三）革兰染色法 1、结果观察：革
5、兰阳性菌-兰紫色 革兰阴性菌-红色 2、原理 3、意义,五、油镜的使用(一)油镜头的识别 显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。油镜头的下缘，标有油 100、oel、oil等字样。,(二）油镜的原理：,滴镜油后可以增加油镜视野的亮度。,（三）镜检要领 把载玻片固定于载物台上，使油镜头对准镜筒。于载玻片上滴一小滴液体石蜡，眼睛从镜筒侧面看，旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜油并贴近标本，但勿触及玻片。,镜检完毕后，把镜筒升高，用擦镜纸把油镜头上的镜油擦净。,（四）油镜的保护办法,作业：画图 1、混合细菌革兰染色结果。（标题：实验一、细菌形态学 标注：细菌名称、染色法、放大倍数）,作业：画图 1、混合细菌革兰染色结果。2、细菌特殊结构示教片之一。（标题：实验一、细菌形态学 标注：细菌名称、染色法、放大倍数）,制片：标记 涂片 干燥 固定革兰染色：1 初染:结晶紫染色液,1分钟 2 媒染:革兰碘液,1分钟 3 脱色:95%酒精,15-20秒 4 复染:番红染色液,30秒,
