动物分子遗传学实验.ppt

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1、动物分子遗传学实验,实验六 琼脂糖凝胶电泳,一、实验原理,琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带。,二、实验目的,通过此实验操作,掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和技术。,猪,鸡基因组DNA的PCR产物电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。琼脂糖,1XTAE电泳缓冲液,溴化乙锭(EB),6X载样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.

2、25%二甲苯青,40%蔗糖水溶液;0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青,30%甘油水溶液,三、实验材料、器具及药品,四、实验步骤,(一)制胶,1.准备好凝胶成型器,插入成型梳。2.将1.5琼脂糖加至100 ml 1TAE缓冲液中,摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化,冷却至60以下。3.加入5ul溴化乙锭(终浓度0.5ug/ml)至熔化的琼脂糖液中混匀,但避免出现气泡。4.将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器,制备凝胶。,(二)电泳,1.待胶变硬,直到它呈乳白状且不透明(约20分钟),小心垂直向上拔出梳子,将凝胶置入电泳槽中,加1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm。2.用移液器吸取2l 的6X载样缓冲液于封口膜上,再加入5l样品,混匀后,小心加入点样孔。3.接通电源,调节电压至4-5V/cm,DNA从负极移到正极。电泳时间3060分钟。4.电泳结束,关掉电源。,1.将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统 的平台中间;2.开通紫外光,可见到发出荧光的DNA条带,在 电脑中观察图像;3.关上紫外光电源,在电脑中编辑和保存图像;4.根据图像结果判定基因型。,五、结果分析,图1 猪基因组DNA1%琼脂凝胶电泳图,图2 PCR产物琼脂凝胶电泳图(1、2、3、4为PCR产物,M为DL2000Marker),Thank you!,

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