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1、发酵工程实验报告,实验五 植酸酶酶活的测定,一.实验目的,1.复习酶活力的测定方法。2.鉴定摇瓶发酵的黑曲霉的产酶能力。,二.实验原理,植酸酶活性单位：样品在植酸钠浓度为5.0mol/L,温度37，PH5.5的条件下，每分钟从植酸钠中释放1umol无机磷，即为1个植酸酶活性单位。在酸性溶液中正磷酸与钼酸作用生成磷钼酸，后者当有还原剂（如Vc）存在时，立即转化为蓝色还原物质，其最大吸收在660nm处。,三.试剂,1.乙酸缓冲液 2.植酸钠溶液 3.10%TAC 4.2.5%钼酸钠 5.10%Vc 6.17%硫酸 7.硫酸二氢钾（标准磷液）8.显色液：（17%硫酸）：（水）：（2.5%钼酸钠）：（
2、10%Vc）=1：2：1：1,四.实验步骤,1.先将实验所需溶液按相应浓度配置好。,2.标准曲线制作,（1）按表稀释磷溶液,水浴加热,将装好的溶液摇匀，放在37水浴锅中持续20min,冷却。,显色反应,测稀释液的吸光值,在波长为660nm处测吸光值,绘制标准曲线,以无机磷为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。,3.样品中植酸酶活力的测定,（1）酶液制备：摇瓶液为试样，在离心机中以3000r/min转速离心15min，取清液。,（2）酶活的测定,五.实验结果,1.取吸光度OD=3.159，将其替换为标准直线中的中的y值，得到x=3.0895，此值即为无机磷的质量。2.由酶活的计算方法 酶活=Fm/3031V 其中V=0.3ml,F=1,所以得到植酸酶酶活=11.07U/L,谢谢欣赏！,
