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1、抗体联合应用与病理诊断,郑鹏才长江大学医学院形态学部,免疫组化应用的意义,鉴别诊断预后判断指导治疗查找病原体分子分型,抗体为何要联合使用,肿瘤的发生和进展是多分子信号通路发生异常改变的结果，单一的生物标志常难以鉴别诊断。没有100%针对某一抗原（某一疾病）的特异抗体。一种抗体常在多种疾病中表达。联合应用可以达到1+12的效果。,一.乳腺癌,ER/PR/HER2每个病人需要常规检测判断预后、决定治疗方案、生物靶向治疗的依据ER、PR判读标准阳性信号定位于细胞核判定方法和标准有差异。建议采用：1.注明阳性（需给出比例）、阴性，如ER（+，90%），PR（-）。2.阳性临界值选择：只要存在明确的瘤细
2、胞核染色即可，如ER（+，8%）；当阳性细胞特少时，可也可表述为ER（+，1%）。3.不必考虑染色强度。,（步宏教授推荐）,ER（+，90%）,PR（+，70%）,ER（）,ER（+，2%）,ER、PR表达的意义：ER、PR阴性的癌细胞增殖不受内分泌激素的调控，肿瘤分化程度较低，预后较差，内分泌治疗无效。ER、PR阳性，特别是高表达者，肿瘤组织分化程度较高，恶性度低，预后较好，内分泌治疗往往有效。PR、ER阳性患者辅助治疗的选择要视其术后复发的风险级别而定，而复发风险与淋巴结转移和Her-2表达等有密切关系，一般低危险和中危险首选内分泌治疗，高风险则以化疗为主。,HER2基因扩增（过表达）的临
3、床意义,表皮生长因子受体-2(HER-2)是位于染色体17q21，编码185kDa具有跨膜酪氨酸激酶活性的生长因子受体，参与细胞生长、分化的调节。,乳 腺 癌,预后因子+预测因子,HER2：预后指标,HER2阳性患者生存期较低 平均生存期 HER2阳性 3年 HER2阴性 67年,HER2：乳腺癌危险因素的定义,G1 T2 ER/PR+,淋巴结-HER2-LVI 无,淋巴结-，HER2+，ER/PR-或LVI浸润，淋巴结1-3HER2-，ER/PR+,年龄35 G2-3 T2,淋巴结1-3和HER2+，ER/PR-或淋巴结4,低 中 中 高,低,高,RISK,RISK,HER2：预测指标,HE
4、R2状态预示肿瘤对治疗的反应内分泌治疗 HER2阳性患者相对耐药CMF方案 HER2阳性患者相对耐药蒽环类 对大剂量蒽环类相对敏感紫杉类药物 相对敏感HER2状态提示病人预后HER2阳性者肿瘤进展快，恶性度高。HER2阳性者赫赛汀治疗有效，预后反而好。,Her-2的检测方法,免疫组化（IHC）方法简单、价廉显色原位杂交（CISH）荧光原位杂交（FISH）金标准条件苛刻、昂贵,HER2免疫组化判读标准,评分：01+（），2+（），3+（）,浸润性肿瘤细胞无着色为阴性(0)瘤细胞呈弱且不完整的胞膜着色或10瘤细胞呈较弱的胞膜染色为(1+)10瘤细胞有较弱但完整的胞膜着色或30瘤细胞呈强且完整的胞膜
5、着色为(2+)30%肿瘤细胞呈较强的完整细胞膜染色为(3+),HER2(0),HER2(1+),HER2(3+),HER2(2+),1+,2+,2+,3+,二.甲状腺癌,CK19/GAL-3/HBME-1甲状腺病变鉴别难点甲状腺滤泡性腺瘤（FA）和滤泡性癌（FC）微小浸润良性乳头状增生（主要是结节性甲状腺肿）和乳头状癌（PC）滤泡性腺瘤和滤泡型乳头状癌,CK19、GAL3、HBME-1、ERK、RET、P16、CyclinD1、p27、CITED-1、FNI和HNWCK在甲状腺良、恶性肿瘤之间的表达均有差异，但前三种对诊断最有帮助。,Expression of the markers in d
6、ifferentiated thyroid carcinoma(DTC)and benign thyroid nodule,引自Park报道,Papillary carcinoma showing diffuse expression of galectin-3(A),HBME-1(B),Papillary carcinoma showing diffuse expression of CK19(C),and cyclin D1(D).,Benign papillary hyperplasia in nodular hyperplasia showing focal expression of
7、 galectin-3(A)and no expression of HBME-1(B).,Follicular carcinoma showing focal expression of galectin-3(A)and diffuse expression of HBME-1(B)in area of capsular invasion.,Follicular adenoma showing no expression of galectin-3(C)and focal expression of HBME-1(D).,在对三者联合应用的研究中观察到。96.5(8184)的乳头状癌和63.
8、1(2438)的滤泡性癌至少出现三者中的一个标志阳性；三者同时阳性对诊断癌具有54(2037)的敏感性和100(053)的特异性；而三者同时阴性对诊断甲状良性病变具有38(2053)的敏感性和100(3737)的特异性。两者以上的抗体联合应用共表达对鉴别良恶性的作用明显增强。,Sensitivity,specificity,positive predictive value,negative predictive value,and diagnostic accuracy of the immunohistochemical markers in the diagnosis of differ
9、entiated thyroid carcinoma,3项抗体同时标记，可起到取长补短的作用，提高特异性和准确率。由于免疫组化结果受诸多因素的影响，在实际应用中一定要以组织学为主诊断，免疫组化能提高我们对组织学诊断的信心和把握，它不能作为独立诊断的依据。,引自Park报道,提示,CK19在淋巴结异位甲状腺肿为阴性，而在淋巴结转移性PC为阳性，对二者有较好的鉴别作用。GaL-3对FC的敏感性稍低（60%），但在包膜下明显阳性，故对FC的微小浸润有特殊的标记作用，GaL-3甲状腺包块穿刺细胞学可出现假阳性应引起注意。,三.子宫颈上皮内瘤变,P16/Ki-67 最常使用的抗体。宫颈活检的重要任务识别
10、宫颈上皮内瘤变和HPV感染 HPV感染与P16 高危型的HPV感染 癌基因蛋白E7产生 E7结 合在RB基因 RB基因功能丧失 P16蛋白过表达。,P16：HPV表达和活动指标，宫颈上皮内瘤变辅助标记,中度、高度危险性HPV病变 强阳性低危性HPV病变 表层细胞片状阳性CIN23 阳性反应性病变（非HPV感染）阴性,P16INK4,p16,CIN1CIN2/3,P16,P16,P16,P16,Ki-67抗原是除G0期外所有细胞周期上都有表达的一种非组蛋白性蛋白质,Ki-67在大多数低级别SIL和宫颈湿疣的鳞状上皮上2/3细胞中有表达。正常宫颈组织，慢性宫颈炎，及鳞状上皮化生仅在基底层有少量上皮
11、表达。注意鳞状上皮化生偶尔也在上皮上层表达Ki-67，但阳性细胞数量较少。,HPV感染 上皮细胞程度增殖 Ki-67染色增强,在宫颈病变中的作用HPV感染辅助工具 上皮上层细胞可阳性CIN分级参考 CIN3细胞阳性40%,HPV感染的直接证据是原位杂交等分子病理技术检测到病毒的DNA P16和Ki-67间接反应HPV感染P16不能区别LSIL和HSILP16和Ki-67可用来推断是否HPV感染和CIN以及CIN的级别,提示,P63、CK17,P63 增生细胞强阳性CK17 正常细胞阴性，增生成熟细胞阳性,四.胃肠道间质瘤,CD117/CD34/SMA/S-100/Desmin/Ki-67中国胃
12、肠道间质瘤病理专家组推荐 1.CD117（95%病例特征性表达）2.CD34（70%病例表达）3.SMA（40%局灶性表达）4.S-100（5%）5.Desmin（2%）6.Ki-67 用于标记瘤细胞增殖指数。,GIST CD117 CD34,五.转移性腺癌来源判断,CK7/CK20/villin原发灶不明的转移性肿瘤约占5一15%。确定肿瘤原发灶有助于确定治疗方案和病人预后的评估。单一的抗体很难从众多的肿瘤中找到其来源。抗体联合使用可以缩小原发灶的搜寻范围。,CK7、CK20及villin用于判断转移性腺癌的来源,8种模式,实际应用,第一步先检测这三种抗体参照表格来推断肿瘤可能存在于哪些范围
13、中，哪些肿瘤可以排除。根据肿瘤检出率来考虑其发生的可能性。例如：肿瘤出现了CK7+CK20+villin+的模式，要考虑胃腺癌、胆管癌、卵巢黏液癌等，可排出肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢浆液性癌。第二步根据具体情况，采用其他相对特异的抗体 例如：胃肠道用CDX2，肺癌和甲状腺癌用TTF-1等，为最终确定肿瘤的器官来源提供有价值的信息。,结肠癌卵巢转移,CK20,CEA,转移性粘液腺癌,CK20,CK20,CEA,villin,原发性卵巢癌,CK20,CK7,六.不易明确组织来源的肿瘤,CK-Pan(AE1/AE3)/Vimentin/S-100/LCA,七.其他组合,观察肌上皮 SMA/P63/34E12血管、淋巴管浸润 CD31/CD34/D2-40前列腺癌的诊断 P504S/P63/34E12内分泌肿瘤分型肿瘤耐药检测,1+12,专注病理，重视免疫组化,THANK YOU!,
