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1、实验五 白细胞分类计数,一、实验目的掌握显微镜外周血白细胞分类计数（DLC）的方法；掌握外周血各类白细胞的正常形态。,二、实验原理 将血液制成细胞分布均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。通常计数100个白细胞，计算得出各种白细胞所占的百分率。,三、实验器材与试剂 器材：显微镜，香柏油，擦镜纸，清洁液 试剂：Wright 染液。四、实验标本：制备良好的血涂片,五、操作步骤1.制备血涂片：按照正确的操作方法制备血涂片2.染色：用Wright染液对血涂片染色，冲洗干净，自然干燥后备用。3.低倍镜观察：低倍镜下观察全片，包括白细胞飞分布和染色情况。,4
2、.油镜观察：选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，滴加1滴香柏油，按一定的方向顺序对所见到的每个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器做好记录，共计数100个白细胞。,5.计算：求出各类白细胞所占的百分率。6.报告方式：百分率（%）。,六、参考区间,WBC 百分率（%）绝对值（109/L）中性杆Nst 15 0.040.50中性分Nsg 5070 2.007.00嗜酸性 E 0.55 0.050.50嗜碱性B 01 00.10淋巴 L 2040 0.804.00单核M 38 0.120.80,七、注意事项1.计数区域：以体尾交界处最佳。2.分类方法：遵循一定的方向，以“城垛式”连续进
3、行，避免主观选择视野；结果的记录可采用计数器、手工画“正”字或“+”。3.计数的白细胞数：白细胞总数在（3.015.0）109/L之间者，分类计数100个白细胞；总数在15.0109/L以上时，计数200个；总数低于3.0109/L时，应选用两张血涂片计数50100个白细胞。,4.计数结果：用各类白细胞的百分率乘以白细胞总数，即可求得每升血液中各类白细胞数量的绝对值。5.血涂片中有有核红细胞时，应逐个计数，但不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到的有核红细胞个数来报告，并注明其所属阶段。6.分类中还应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）
4、及其他异常所见。,外周血各类白细胞的正常形态,白细胞,粒细胞,淋巴细胞,单核细胞,一、白细胞的组成,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,白细胞是机体抵抗病原微生物等异物入侵的主要防线,全能干细胞,髓系干细胞,淋巴系干细胞,粒-单核系祖细胞,T淋巴系祖细胞,B淋巴系祖细胞,原粒细胞,T原淋巴细胞,B原淋巴细胞,分叶核粒细胞,单核细胞,T淋巴细胞,B淋巴细胞,浆细胞,GM-CSF,T幼淋巴细胞,B幼淋巴细胞,早幼粒细胞,中幼粒细胞,晚幼粒细胞,杆状核粒细胞,幼单核细胞,原单核细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,中性粒细胞（Neutrophil，N）,具有趋化、变形、黏附、吞噬、杀菌作用，防御和抵
5、抗病原菌侵袭,二、白细胞的功能,淋巴细胞（Lymphocyte，L）,B细胞 浆细胞 生成Ab 体液免疫T细胞 免疫活性物质 细胞免疫,单核细胞（Monocyte，M）,吞噬，杀灭病原体 清除损伤或已死亡的细胞 处理抗原,嗜碱性粒细胞（Basophil，B）,通过释放嗜碱性颗粒（组胺、肝素、慢反应物质等）参与超敏反应,嗜酸性粒细胞（Eosinophil，E）,抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞合成和释放活性物质，吞噬其释出颗粒，破坏组胺，限制过敏反应 参与对寄生虫的免疫反应,1.中性粒细胞(N),直径10-15um,胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红色中性颗粒。,胞核：染色不均,三、白细胞正常形态,按
6、胞核的形态分为：,N杆状核（Nst）,N分叶核（Nsg）,核径最窄处大于最宽处1/3为杆状核，核型多样，可呈C形、S形、V形或不规则形。,核径最窄处小于最宽处1/3为分叶核，细胞分25叶，甚至5叶以上。,中性粒细胞,杆状核,分叶核,2.嗜酸性粒细胞（E）,形态：略大于中性粒细胞,胞浆：胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗粒,胞核：长呈分叶状，二叶居多，呈眼镜状，偶见34叶,染色质粗，染深紫红色。,嗜酸性粒细胞（血涂片）,3.嗜碱性粒细胞（B）,胞体呈圆形，略小于中性粒细胞,胞浆：含粗大但大小不一、分布不均匀的紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上，致使核的轮廓与结构模糊不
7、清,胞核：核分叶不明显，形态不规则。,嗜碱性粒细胞（血涂片）,颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强,4.淋巴细胞（L）,形态：直径6-15um，分为大L和小L。,胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色质粗糙，排列均匀，大淋巴细胞核常偏于一侧。,胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒，常呈裸核。大淋巴胞浆丰富，呈透明蓝色，常有少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。,淋巴细胞（血涂片）,5.单核细胞（M）,形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um 胞体呈圆形或不规则形。,胞浆：丰富，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃样半透明。胞浆内含大量细小、弥散分布的灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。,胞核：细胞核大，呈不规则圆形
8、、肾形、马蹄形或不规则分叶，有时折叠扭曲。染色质细致、疏松如网状，染为淡紫红色。,五类白细胞,外周血正常白细胞形态特征,四、一些异常结构及细胞的认识,1.核左移 外周血中杆状核粒细胞增多或出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒细胞,2.核右移：主要见于营养性巨幼细胞性贫血、恶性贫血等,3.毒性变化,大小不均：病程长的化脓性炎症中毒颗粒：化脓菌感染及大面积烧伤空泡：败血症Dohle小体（蓝斑）：是核和胞质发育不平衡表现退行性变：核固缩、核肿胀、核溶解,中性粒细胞大小不均,大小不均,中性粒细胞中毒颗粒,中毒颗粒：粗大、大小不等、分布不均匀的紫黑色或深紫红色颗粒。,中性粒细胞退行性变,退行性变,中性粒细胞空泡性变：中性粒细胞胞质内出现一个或数个空泡,空泡,杜勒小体：中性粒细胞胞质毒性变化保留的局部嗜碱性区域，呈圆形、梨形、云雾状，天蓝色或灰蓝色,杜勒体,异形淋巴细胞,型（空泡型）,型（单核细胞型）,型（幼稚细胞型）,
