实验二 血涂片制备 白细胞分类计数课件.ppt

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1、涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本,染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。,血涂片制备,推片,载玻片,血液,一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,方法与步骤,推片:挤出第二滴血置于载玻片的右侧,再取另一张边缘光滑的双凹片,斜置于血滴的前缘,先向后稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线状。,3045,两玻片的角度以30-45为宜,轻轻将双凹片向前匀速推进,即涂成血液薄膜。,血涂片,不良血涂片,实验用品,器材:医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻

2、片、双凹片(推片)。试剂:Wrights(瑞氏)染液:Wrights色素粉末0.1g,溶于60 ml甲醇。,瑞氏染色原理,瑞氏粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料,为伊红钠盐,其有色部分为阴离子;美蓝是一种碱性染料,为氯化美蓝,有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝,以E-代表伊红。将适量的ME溶解在甲醇中,即成为瑞氏染液。,甲醇的作用可使ME溶解,解离为M+和E,这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样,因此,在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色;细胞中

3、的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色;当细胞含酸、碱性物质各半时,它们既与酸性染料作用,又与碱性染料作用,染成淡紫红色。,瑞氏染色原理,血涂片染色,勿冲洗再加瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混匀静置10分钟,直接流水冲洗3-5分钟(切勿先倒掉染液),涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,染色,浓染:待涂片在空气中完全干燥后,滴加数滴Wrights染液盖满血膜为止,染色35 min。淡染:然后滴加等量缓冲液,使其与染液均匀混合,静置1015 min。用流水冲去染液,吸水纸吸干,镜检。,血涂片的观察,低倍镜观察1.染色

4、情况(满意、偏酸、偏碱)2.细胞分布情况油镜下分类计数:体尾交界处。油镜分类时应按一定走向,不要重复计数。(共计数100个白细胞),李四123,体尾交界处,理想区域,细胞重叠 细胞太稀,理想区域,各类成熟白细胞的形态学:,中性粒细胞(Ne):在瑞氏染色血涂片上呈圆形,直径1013m,胞浆染粉红色,核形一叶(杆状核)至五叶不等,以三叶者多见,染成深紫红色,胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。,嗜酸性粒细胞(Eo):较中性粒细胞稍大,胞核多为两叶,呈眼镜、八字形,核染色质粗糙染深紫红色,胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒,瑞氏染色时呈桔红色,有折光性。,嗜碱性粒细胞(Ba):胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒

5、,瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡,乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致;核呈淡紫红色常看不清,呈杆状或分叶状。,淋巴细胞(Ly):胞体呈圆形,直径介于615m之间,在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见,直径69m,核大呈深紫色致密而浓染,胞浆量极少;大淋巴细胞胞浆量较多,呈清澈的淡蓝色,可见少量嗜苯胺蓝颗粒,胞核圆或椭圆,常偏向细胞一侧,染色较深。,单核细胞(Mo):在瑞氏染色涂片上为1220m,胞体圆形、椭圆形或不规则形;核形多种多样,最重要的特点是染色质较细致疏松,呈丝网状或条缕状,着色较淡胞浆较多,淡兰色,含大量细小尘土样颗粒。,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,嗜碱性粒细胞(右),单核细胞,血小板,使用时,直接删除本页!,精品课件,你值得拥有!,精品课件,你值得拥有!,使用时,直接删除本页!,精品课件,你值得拥有!,精品课件,你值得拥有!,涂片制备的注意事项染色操作注意事项染色质量的控制,

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