《实验十八豆科植物根瘤根瘤细菌的形态观察及其分离.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《实验十八豆科植物根瘤根瘤细菌的形态观察及其分离.ppt(10页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、2023/10/12,实验十八,豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离,豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离,目的要求实验材料实验程序思考题,目的要求,观察几种豆科植物的根瘤和根瘤细菌的形态。掌握从根瘤中分离根瘤细菌的方法及培养的方法,实验材料,不同豆科植物新鲜标本数株,不同豆科植物的浸制标本。加入结晶紫的根瘤菌培养基(10mL)。无菌培养皿、接种环、1mL无菌水、2mL无菌水、手术剪、无菌玻棒、载玻片、镊子、酒精灯、显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。0.1%升汞液。革兰氏染色液一套。,实验程序,观察豆科植物根瘤和根瘤细菌的形态。分离豆科植物根瘤菌,实验程序(观察豆科植物根瘤和根瘤细菌),
2、观察几种豆科植物根部根瘤的形状、色泽、以及着生部位,识别有效根瘤和无效根瘤,或观察几种豆科植物浸制标本的根瘤形状,并绘图。观察根瘤细菌的形态:用镊子取根瘤1个,洗净后放在洁净的载玻片上,加蒸馏水1滴,然后再用另一洁净载玻片在这根瘤上轻轻压出根瘤中的汁液,再取此汁液用接种环涂片,(亦可用分离到的根瘤菌悬液涂片),用简单染色法染色,油镜下观察并绘图。,实验程序(分离豆科植物根瘤菌),选择1株生长健壮的豆科植物,在主根部位选择1个红润饱满的较大根瘤,连同1小段根剪下,以免损伤根瘤,用清水洗净。将根瘤浸泡在75%酒精的无菌培养皿中,5min后,用镊子将根瘤转入盛有%升汞(HgCl2)溶液的无菌培养皿中
3、浸泡23min,以杀死根瘤表皮附着的杂菌,消毒时间一到,马上用无菌镊子将根瘤转入盛有无菌水的培养皿中,用镊子翻动几次,然后用镊子挟起根瘤,再用无菌水冲洗几次,洗去残存的升汞液。将已消毒的根瘤放入装有1mL无菌水的试管中,用无菌玻棒轻轻挤压根瘤,制成根瘤菌悬浊液备用。,实验程序(分离豆科植物根瘤菌),取已融化的根瘤菌培养基以无菌操作制成平板(2付培养皿)待用。取上面已凝固的根瘤菌平板,用接种环在无菌操作下取一环根瘤汁液进行分离(连续划线或分区划线)。倒置28300C培养。一般快生型根瘤菌(蚕豆、豌豆、苜蓿、三叶草、紫云英根瘤菌)培养35d,慢生型根瘤菌(大豆、花生、豇豆)培养710d即可长出菌落。观察菌落形态,并进行描述;选取典型菌落进行涂片,革兰氏染色,油镜下观察并绘图。将典型的单菌落转接到斜面培养基上,得到根瘤菌纯种,用作菌种保藏。如不纯,应再次划线分离。,思 考 题,分离根瘤菌时,为什么要进行根瘤表面的消毒?为什么有效根瘤往往生长在主根上?并呈粉红色?,2023/10/12,实 验 十 八,结 束,