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1、实 验 四,放线菌、霉菌和酵母菌形 态 的 观 察,一、实验目的要求,1.学习掌握观察放线菌、霉菌和酵母菌形态的基本方法。2.加深理解放线菌、霉菌和酵母菌的形态特征。,原核类：细菌、古生菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体等。真核类：真菌（酵母菌、霉菌、蕈菌）、原生动物、显微藻类。非细胞类：病毒、亚病毒（类病毒、朊病毒等）,二、实验原理,放线菌、霉菌和酵母菌分类地位,二、实验原理,1放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。
2、菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。,链霉菌不同类型孢子丝,2酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿，由于酵菌细胞比细菌的大，细胞间隙含水量较少，不能运动，菌落较大、较厚，外观较稠、不透明，菌落颜色多为乳白色或矿烛色。,二、实验原理,（1）形态观察：不运动、单细胞、真核生物，比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数以出芽方式无性繁殖，分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。（2）死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的
3、氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。,二、实验原理,2酵母菌,酵母菌的菌落,啤酒酵母,1、菌落较大、较厚、外观较稠和较不透明。2、与培养基结合不紧密，易挑起。3、正面和反面、边缘与中央颜色一致。,3霉菌：霉菌的菌丝和孢子比放线菌的粗得多。菌落形态较大，质地蔬松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。,二、实验原理,黑曲霉,三、实验材料,放线菌培养物：链霉菌(医学院学生分离)4
4、天培养物。啤酒酵母24至28h培养物。黑曲霉4d平面培养物。,显微镜、载玻片、接种环、解剖刀、酒精灯、镊子、酒精、蒸馏水等。,四、实验步骤,观察放线菌的形态观察酵母菌的形态观察霉菌的形态,1.放线菌孢子丝形态观察(插片法)（1）融化高氏1号培养基，冷却至50度倒平板，平板要厚一些，以利于插片。接种、插片、培养。（2）染色：用镊子小心取出盖玻片，并将其背面附着的菌丝体擦干净，用0.05%美蓝染色约1min后水洗。然后将盖玻片无菌丝体的面放在载玻片上。（3）镜检：晾干后用100X油镜观察孢子丝形态特征。,四、实验步骤,注意：染色水洗时水流要缓，以免破坏孢子丝形态。,10092436俞佩枫拍摄,放线
5、菌,放线菌,2.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别：美蓝浸片的观察:（1）滴一小滴0.05吕氏碱性美蓝染色液于载玻片中央，按无菌操作取少量酵母菌与其混合均匀。用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌体接触，缓缓将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。放置约3min后，先用低倍镜后用40X高倍镜(不用油镜),观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。（2）染色0.5h后再次观察，注意死细胞是否增加。,四、实验步骤,注意事项：用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。滴加染液要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。,四、实验步骤,2.酵母菌
6、形态观察及死活细胞鉴别：,3分钟,10092436俞佩枫拍摄,30分钟,10092436俞佩枫拍摄,3.霉菌的形态观察：（1）在载玻片上滴加一滴0.05%美蓝染液；（2）用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少量已经产孢子的霉菌菌丝；（3）放在载玻片上的染液中，用解剖针小心将菌丝分开；（4）盖上盖玻片，置于10X低倍镜下观察，必要时换40X高倍镜.(不用油镜!),四、实验步骤,黑曲霉,10092436俞佩枫拍摄,3.霉菌的形态观察注意：用镊子取菌和用解剖针分散菌丝时要细心，尽量减少菌丝断裂及形态被破坏，盖盖玻片时避免气泡产生。,四、实验步骤,1.绘图并说明放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的形态和特征2.绘图并说明酵母菌形态及出芽生殖情况3.列表说明在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？4.根据你所观察到的吕氏碱性美蓝染液浓度及作用时间与酵母死、活细胞数量变化的情况，填下表：,五、实验报告,
