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1、二、基因表达载体的构建,1、为什么要构建基因表达载体？,2、基因表达载体要包括那些结构与运载体是不是一个意思?,（请阅读P11结合课本插图思考下列问题）,3、启动子、终止子和标记基因，在基因表达载体中有何作用?,4、在表达载体的构建过程中用到了哪些工具酶？,使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。,二、基因表达载体的构建基因工程的核心,目的：,载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构,1.用一定的_切割 质粒，使其出现一个切 口，露出_。2.用_切断目 的基因，
2、使其产生_ _。,二 基因表达载体的构建,核心,3.将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量_，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒）,限制酶,黏性末端,同一种限制酶,的黏性末端,切口,DNA连接酶,相同,质粒,DNA分子,限制酶处理,一个切口两个黏性末端,两个切口获得目的基因,DNA连接酶,重组DNA分子（重组质粒）,核心,同一种,(二)基因表达载体的构建,4.过程:,三、将目的基因导入受体细胞,1、什么是转化？2、针对不同的受体细胞，常见的转化方法都有哪些？3、将目的基因导入细胞的具体过程是怎样的？,阅读课本P12-13相关内容，思考下列问题,(三)将目的基因导入受体细胞,转化,方法
3、,将目的基因导入植物细胞,将目的基因导入动物细胞,将目的基因导入微生物细胞,显微注射法,感受态法,目的基因进入_内，并且在 受体细胞内维持_和_的过程,受体细胞,稳定,表达,1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法适用于：,(三)将目的基因导入受体细胞,双子叶植物,2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（2）程序：,(三)将目的基因导入受体细胞,3、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少（2）方法：,目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵）显微注射 受精卵 新性状动物,用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子
4、,(四)目的基因的检测与鉴定,检查是否成功,分子水平,个体水平,检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因,检测目的基因是否转录出了mRNA,检测目的基因是否翻译成蛋白质,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,方法,方法,方法,DNA分子杂交,分子杂交（注意与上不同之处）,抗原抗体杂交,DNA分子杂交示意图,采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。,DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交
5、；抗原抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。,完成导学案第6题,结合导学案P2相关内容，注意以下两点,获取目的基因2.构建基因表达载体3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定,从基因文库利用PCR化学方法人工合成,目的基因、启动子、终止子、标记基因,农杆菌转化法、显微注射法、,检测：是否插入、转录、翻译,归纳:基因工程的基本操作程序,1）有关基因工程的叙述正确的是（）A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料,D,练习,2）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达,C,练习,
