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1、HPV 竞品分析,市场部 王飞雁,HPV 检测,HPV DNA 检测,HPV E6，E7 mRNA 检测,分型,不分型,部分分型,方法,代表厂家,PCR-反向点杂交法,亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇,流式荧光杂交法,上海透景,杂交捕获（HC2）,QIAGEN(凯杰),PCR-荧光探针法,港龙、凯普、达安、科华,PCR-荧光探针法,罗氏,bDNA 技术,科蒂亚,酶切信号放大法（Cervista）,HOLOGIC(英硕力),不分型,PCR-反向点杂交法原理,PCR-反向点杂交法技术特点,高灵敏度-PCR高特异性-核酸分子杂交高通量-膜上固定多种探针能实现HPV分型检测,亚能和凯普HPV基因分型
2、产品对比,亚能和凯普膜条显色对比,亚能,凯普,膜条尺寸：12mm78mm,膜条尺寸：22mm22mm,亚能产品与凯普HPV分型产品的比较优势,有配套的全自动核酸分子杂交仪检测HPV 型别多：23型有真正意义的内部质控可检测更多类型的标本，有文献支持灵敏度、特异性、重复性好PCR扩增体系预分装显色斑点大而清晰，易于进行结果判读,HPV 检测,HPV DNA 检测,HPV E6，E7 mRNA 检测,分型,不分型,部分分型,方法,代表厂家,PCR-反向点杂交法,亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇,流式荧光杂交法,上海透景,杂交捕获（HC2）,QIAGEN(凯杰),PCR-荧光探针法,港龙、凯普、达
3、安、科华,PCR-荧光探针法,罗氏,bDNA 技术,科蒂亚,酶切信号放大法（Cervista）,HOLOGIC(英硕力),不分型,代表厂家：上海透景高危型人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒检测的基因型：19种高危型（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73,83，26,55,61,66），种低危型（6,11,40,42,44,53,54）(无注册证)进口专用仪器(美国Luminex多功能流式点阵分析仪）,流式荧光杂交法,流式荧光杂交法,流式荧光杂交法是将PCR产物和微球杂交液进行混合，并经过杂交，荧光素标记，Luminex流式分析仪阅读得到相应的检测结果。
4、微球杂交液中包含多种荧光编码微球，每种编码微球的表面都共价交联有与HPV 型别对应的探针，在杂交过程中，探针特异性识别并结合相应的靶序列，经过荧光素反应后形成微球-探针-PCR产物-荧光素的复合物，经Luminex流式分析仪阅读，可以获得每种复合物的微球编码及对应的荧光信号强弱，得出检测结果,流式荧光杂交法操作流程,PCR 扩增,DNA提取,向微孔杂交板中加入微球杂交液，加入PCR产物,PCR产物变性,杂交，48，30 min,加入荧光素SA-PE(链霉亲和素标记的藻红蛋白)，15 min,Luminex 流式分析仪检测,Luminex 100TM多功能流式点阵仪,流式荧光杂交法-HPV 不定
5、量,流式荧光杂交法技术总结,原理：普通PCR技术，核酸分子杂交技术和荧光标记技术尚不成熟，灵敏度和特异性有待提高只分型，不定量需价格昂贵的流式荧光检测仪,亚能与流式荧光杂交法对比,亚能产品与上海透景产品的比较优势,灵敏度，特异度更高通用仪器设备可检测更多来源的标本标本保存时间更长PCR 反应液预分装,亚能生物与港龙HPV 基因分型对比,HPV 检测,HPV DNA 检测,HPV E6，E7 mRNA 检测,分型,不分型,部分分型,方法,代表厂家,PCR-反向点杂交法,亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇,流式荧光杂交法,上海透景,杂交捕获（HC2）,QIAGEN(凯杰),PCR-荧光探针法,港龙
6、、凯普、达安、科华,PCR-荧光探针法,罗氏,bDNA 技术,科蒂亚,酶切信号放大法（Cervista）,HOLOGIC(英硕力),不分型,杂交捕获二代（Hybrid Capture 2,HC2）,HC2基本原理：利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测13种高危HPV基因型,不能提示具体的基因型,计算机判读15 min,杂交60 min,抗体捕获60 min,第二抗体结合，化学发光30 min,DNA变性45 min,HC2 实验步骤图示,吸取变性剂于对照和样本管中,旋涡振荡10秒,65孵育45分钟，采用Microplate heater I,HC2操作步骤-DNA 变性,将已变性的样本
7、混匀，吸取75 ul 于“杂交微孔板”中,20-25孵育10分钟,加入25 ul 高危HPV探针于微孔板中,65孵育60分钟,置于Rotary Shaker I中，1100 rpm，32分钟,准备HPV 探针混合物,HC2操作步骤-杂交,将杂交产物转移至“捕获微孔板”相应的小孔中,20-25孵育30-45分钟,20-25孵育60分钟，1100 rpm,加入75 ul Detection Reagent 1（碱性磷酸酶偶联的抗体）于“捕获”微孔板相应的小孔中,HC2操作步骤-抗体捕获及酶标,洗涤微孔板：采用Automated Plate Washer I或进行手动洗板，重复洗6次,加入75 ul
8、 Detection Reagent 2（化学显色底物）于“捕获”微孔板相应的小孔中,20-25孵育15-30分钟,采用Digene microplate luminometer(DML2000)读数,HC2操作步骤-洗板及化学显色,HC2如何进行结果判读?,1.阴性对照 每次实验必须同时做3份阴性对照。阴性对照的结果必须为10-250 RLU（相对光单位）。变异系数（%CV）应该25%，如果25%，那么去掉偏离平均值最远的一个阴性对照，用剩下的两个阴性对照计算平均值以及变异系数。%CV必须25%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告2.标准品 每次实验必须同时做3份高危HPV标
9、准品。%CV应该15%，如果15%，那么去掉偏离平均值最远的一个标准品，用剩下的两个标准品计算平均值以及变异系数。%CV必须15%，否则，本次实验结果无效，必须重做，无法给病人出报告3.用标准品平均值（MHRC）以及阴性对照平均值MNC计算MHRC/MNC比值.2.0MHRC/MNC 15。如果2.0 或15，本次实验结果无效，必须重做。4.如果符合以上的标准，检测结果是可靠的。此时的Cutoff值（阳性标本评判的标准）就是MHRC,Cutoff 值=318，所有标本的相对光单位（RLU）应该转换为与Cutoff值的比值，比值大于1为阳性，比值小于1则为阴性,结果的判定,质控,3份阴性对照，3
10、份高危HPV标准品，2份质控，共需额外消耗8人份试剂！,HC2-定性检测,以上为FDA 批准的说明书中内容截图,HC2技术总结,原理：采用核酸分子杂交，抗体捕获（吸附杂交体），化学显色不分型不能检测HPV多重感染不定量有交叉杂交反应手动操作很多，步骤繁琐每次实验要额外消耗8人份试剂，试剂成本高需基因杂交信号放大系统，设备成本高,亚能HPV产品与HC2的比较优势,能分型检测23种HPV 基因型可检测更多来源的标本无交叉杂交反应，特异性高通用仪器设备，如PCR仪和杂交仪检测成本低,careHPV Test,定性检测14种高危型 HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,5
11、8,59,66,68产品名称：高危型人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂盒方法：杂交捕获-化学发光法商品名：careHPV Test,该检测技术专为缺少水、电或现代化实验室等基础设施落后的临床环境设计，便于携带、易于使用，当日可出检查结果careHPV识别宫颈癌与高度病变的敏感度和特异度，都大大优于醋酸染色后观察法,HPV 检测,HPV DNA 检测,HPV E6，E7 mRNA 检测,分型,不分型,部分分型,方法,代表厂家,PCR-反向点杂交法,亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇,流式荧光杂交法,上海透景,杂交捕获（HC2）,QIAGEN(凯杰),PCR-荧光探针法,港龙、凯普、达安、科华,P
12、CR-荧光探针法,罗氏,bDNA 技术,科蒂亚,酶切信号放大法（Cervista）,HOLOGIC(英硕力),不分型,PCR-荧光探针法,化 学 原 理,原理：在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累,实时监控整个PCR过程。基于Taqman探针,PCR-荧光探针法总结,灵敏度高不分型，或部分分型不能检测HPV多重感染检测HPV 种类有限，目前最多检测14种高危型自动化程度高需价格昂贵的荧光定量PCR仪,亚能与PCR-荧光探针法对比,亚能产品与PCR-荧光探针法的比较优势,能分型检测23种HPV 基因型能检测HPV多重感染可检测更多来源的标本使用普通PCR仪特异性更高,亚能生物HPV
13、基因分型与罗氏对比,HPV 检测,HPV DNA 检测,HPV E6，E7 mRNA 检测,分型,不分型,部分分型,方法,代表厂家,PCR-反向点杂交法,亚能、凯普、达安、港龙、珠海赛乐奇,流式荧光杂交法,上海透景,杂交捕获（HC2）,QIAGEN(凯杰),PCR-荧光探针法,港龙、凯普、达安、科华,PCR-荧光探针法,罗氏,bDNA 技术,科蒂亚,酶切信号放大法（Cervista）,HOLOGIC(英硕力),不分型,酶切信号放大法,代表厂家：美国Hologic，中国子公司-英硕力产品名称（中文）：高危型人乳头瘤状病毒DNA 检测试剂盒（酶切信号放大法）产品名称（英文）：Cervista HPV HR,亚能生物与Cervista 的比较优势,能对HPV进行精确分型检测HPV 种类多：能检测23种HPV兼容标本类型多单次检测标本量多：最多可做96个标本无交叉反应标本处理简便快速,谢谢,
